李劉煒,曾文珊,韓瑩
廣州市藥品檢驗(yàn)所,廣州 510160
阿托伐他汀鈣是一種高選擇性3-羥基-3-甲基-戊二酰酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑,適用于原發(fā)性高膽固醇血癥、冠心病、混合性高血脂癥和高膽固醇血癥伴有動(dòng)脈粥樣硬化患者[1]。近年來(lái),伴隨人們生活方式和飲食習(xí)慣的變化,我國(guó)高血壓合并冠心病的發(fā)生率逐年提高[2],而阿托伐他汀鈣片在降低病人的血脂和維護(hù)心血管方面起著重要作用[3],故近年來(lái)其在臨床上的用量呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)[4-6]。某些不法商家為了牟利而生產(chǎn)假劣藥品,不僅對(duì)服用患者的身體造成危害,并且破壞了藥品流通市場(chǎng)的秩序。因此需要一種簡(jiǎn)便快速篩查藥品質(zhì)量的方法,提高打假的命中率,使藥品監(jiān)管的界限增大[7]。
近紅外光譜分析技術(shù)以其簡(jiǎn)便、快速、高效、綠色、重復(fù)性好、穩(wěn)定性好、無(wú)損分析、應(yīng)用范圍廣、可實(shí)時(shí)在線分析等優(yōu)點(diǎn),可應(yīng)用于藥品的定性和定量快速篩查,在藥品監(jiān)管和打假方面發(fā)揮著重要作用[8]。一致性檢驗(yàn)是一種圖譜比較法,通過(guò)比對(duì)參考光譜與未知光譜的一致性指數(shù)(CI)限值,便能快速判定待測(cè)樣品是否與已知樣品為同一廠家生產(chǎn)的結(jié)論[9]。
本文采用近紅外光譜技術(shù)結(jié)合一致性檢驗(yàn)方法,建立進(jìn)口化學(xué)藥品阿托伐他汀鈣片一廠一品一規(guī)快速定性篩查模型,用以監(jiān)測(cè)該產(chǎn)品在流通環(huán)節(jié)的質(zhì)量安全及對(duì)不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品進(jìn)行快速鑒別。
1.1 近紅外光譜Matrix-F 型傅里葉變換近紅外光譜儀(配有1.5 m 長(zhǎng)的固定光纖探頭,德國(guó)Bruker公司);InGaAs 型檢測(cè)器;OPUS7.8 光譜分析軟件;光譜采集:中檢院統(tǒng)一測(cè)樣光譜軟件。
1.2 試藥隨機(jī)選取60 批(編號(hào)A1~A60)經(jīng)進(jìn)口通關(guān)檢驗(yàn)合格的阿托伐他汀鈣片(見(jiàn)表1),由國(guó)外A 公司生產(chǎn),規(guī)格10 mg/片;另2 個(gè)通過(guò)仿制藥一致性評(píng)價(jià)廠家(B 公司、C 公司)各10 批次阿托伐他汀鈣片(編號(hào)B1~B10,C1~C10),規(guī)格均為10 mg/片,均購(gòu)自藥店。
2.1 光譜采集環(huán)境環(huán)境溫度18~26℃,空氣濕度<70%。
表1 試藥信息表
2.2 光譜采集從60 批A 公司生產(chǎn)的阿托伐他汀鈣片中選取50 批(編號(hào)A1~A50)樣品作為建模采集樣,每批次隨機(jī)選取6 片,去除包裝后采用直接接觸方式,以儀器內(nèi)置背景作為參比,在12 000~4 200 cm-1區(qū)間進(jìn)行掃描,分辨率為8 cm-1,每次測(cè)量掃描32 次,每批樣品測(cè)試6 次,共采集300 張?jiān)紙D譜(見(jiàn)圖1)。
2.3 一致性模型的建立采用上述掃描得到的A 公司生產(chǎn)阿托伐他汀鈣片300 張近紅外原始光譜作為參考光譜,建模參數(shù)條件:預(yù)處理方法為二階導(dǎo)數(shù)+矢量歸一化,平滑點(diǎn)17,判別分析譜段為9 000~7 500 cm-1、6 900~5 600 cm-1和5 000~4 250 cm-1,最大CI 設(shè)定為6,譜段優(yōu)化后建立一致性模型(見(jiàn)圖2)。
2.4 一致性模型的驗(yàn)證將剩余的10 批(編號(hào)A51~A60)A 公司生產(chǎn)的阿托伐他汀鈣片近紅外光譜圖作為驗(yàn)證光譜,用于檢驗(yàn)該模型的預(yù)測(cè)能力,結(jié)果驗(yàn)證光譜最大CI 均<6,能通過(guò)模型識(shí)別,說(shuō)明了模型具有一定的準(zhǔn)確性(見(jiàn)圖3)。
另取2 個(gè)通過(guò)仿制藥一致性評(píng)價(jià)國(guó)內(nèi)廠家生產(chǎn)的阿托伐他汀鈣片各10 批(編號(hào)B1~B10,C1~C10)按上述方法分別采集近紅外光譜圖作為驗(yàn)證光譜,進(jìn)一步驗(yàn)證模型的專屬性。結(jié)果兩個(gè)廠家的樣品識(shí)別均為不通過(guò),驗(yàn)證光譜CI 均>6(見(jiàn)圖4),說(shuō)明所建一致性模型具有一定的專屬性,能快速鑒別A 公司和其他企業(yè)生產(chǎn)的阿托伐他汀鈣片。
3.1 判定譜段的選擇由譜圖(圖1)可以看出,近紅外光譜段在12 000~9 500 cm-1之間沒(méi)有明顯的吸收峰,多為基線漂移,而在4 200~4 000 cm-1的邊緣譜段易受到儀器噪聲的影響顯得雜亂,同時(shí)避開水分吸收峰7 000 cm-1附近的波長(zhǎng)區(qū),最終選擇譜段為9 000~7 500 cm-1、6 900~5 600 cm-1及5 000~4 200 cm-1作為建模判定譜段。
由圖5 結(jié)果顯示,原始光譜經(jīng)二階導(dǎo)數(shù)加矢量歸一化前處理后,原研藥與其他兩家仿制藥處理后的光譜圖存在一定的區(qū)別,在7 100cm-1~7 300 cm-1、6 000cm-1~6 100 cm-1、5 100 cm-1~5 400 cm-1等波數(shù)區(qū)間均存在不同程度的區(qū)別,特別在7 164cm-1及7 219 cm-1波數(shù)附近A 公司生產(chǎn)的原研藥光譜圖存在兩處明顯的吸收峰,而兩家仿制藥光譜圖則沒(méi)有。另在5 119 cm-1和6 050 cm-1波數(shù)段附近B 公司和C 公司生產(chǎn)的仿制藥均存在較強(qiáng)的吸收峰,而原研藥卻基本沒(méi)有吸收峰,說(shuō)明仿制藥與原研藥在處方、生產(chǎn)工藝、藥用輔料等方面存在一定的差異。
本文利用近紅外光譜法,通過(guò)光譜預(yù)處理的優(yōu)化,建立了A 公司生產(chǎn)的阿托伐他汀鈣片一致性檢驗(yàn)?zāi)P停–I=6),該模型可區(qū)分原研企業(yè)與其他生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的阿托伐他汀片,并適用于假劣藥品的現(xiàn)場(chǎng)快速篩查鑒定。