傅群

吉安市食品藥品檢驗檢測中心（吉安 343000）

對羥基苯甲酸酯類化合物因其良好的殺菌能力和穩(wěn)定性，在食品、化妝品及醫(yī)藥等行業(yè)被廣泛用作防腐劑。有研究表明，此類化合物對人體可能存在一定的危害[1-3]。與此同時，人為添加和環(huán)境帶入等不同渠道已經使得越來越多的食品中檢出對羥基苯甲酸酯類物質[4-6]。我國食品安全國家標準GB 2760—2014《食品添加劑使用標準》規(guī)定了從飲料、水果、蔬菜等到醬及其制品、蠔油、蝦油等多類食品中對羥基苯甲酸酯類及其鈉鹽的最大使用量，而對應的食品安全國家標準GB 5009.31—2016《食品中對羥基苯甲酸酯類的測定》只規(guī)定了醬油、醋、飲料及果醬四類基質較為簡單的食品中的檢測方法。因此，建立適用多類食品中對羥基苯甲酸酯類的檢測方法已迫在眉睫。

食品中對羥基苯甲酸酯類的檢測方法主要有氣相色譜法[5-6]、液相色譜法[7-8]、液相色譜-質譜法[9-11]、氣相色譜-質譜法[12-16]等。樣品的前處理方法主要是液液萃取、分散液液微萃取、固相萃取等。綜合來看，較簡單的前處理方法并不能很好地除去色素、磷脂、脂肪等基質干擾，而除雜效果較好的方法步驟又很繁瑣，消耗品也多。此次試驗旨在建立一個適用范圍廣、相對簡單且高效的檢測方法。

1 試驗部分

1.1 儀器、試劑與材料

Agilent 7890A/5975C氣相色譜質譜聯(lián)用儀；DL-6000B離心機（上海安亭科學儀器廠）；VORTEX-5渦旋混合器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；Quintix224-1CN電子天平（德國賽多利斯集團）。

對羥基苯甲酸酯類溶液標準物質：對羥基苯甲酸甲酯（MeP）、對羥基苯甲酸乙酯（EtP）、對羥基苯甲酸丙酯（PrP）、對羥基苯甲酸丁酯（BuP），質量濃度均為1.00 mg/mL，北京海岸鴻蒙標準物質技術有限責任公司。

乙腈（色譜純，SCHARLAB S. L.）；氯化鈉（分析純，西隴科學股份有限公司）；鹽酸（分析純，西隴科學股份有限公司）；Waters Oasis PRIME HLB（3 mL，60 mg；3 mL，150 mg；6 mL，200 mg）固相萃取小柱（Waters）。

1.2 樣品前處理

準確稱取1 g（精確至0.000 1 g）樣品于10 mL玻璃試管中，加入1 mL水和0.05 mL（1+1）鹽酸，渦旋1 min，再依次加入1 mL飽和氯化鈉溶液和2.00 mL乙腈，渦旋1 min，以4 000 r/min離心5 min，殘渣加入2.00 mL乙腈重復提取1次，合并上清液，直接過Oasis PRIME HLB小柱后進行氣相色譜-質譜測定。

1.3 色譜/質譜條件

1.3.1 色譜條件

色譜柱為HP-5（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；進樣口溫度為250 ℃；進樣量為1.0 μL，不分流進樣；載氣為高純氦氣（純度99.999%）；恒流模式；流量為1.0 mL/min；升溫程序：100 ℃保持1 min，以15 ℃/min升到180 ℃保持1 min，以5 ℃/min升到200 ℃保持1 min，以20 ℃/min升到280 ℃保持5 min。

1.3.2 質譜條件

電子轟擊源（EI）；電離能為70 eV；離子源溫度為230 ℃；MS四極桿溫度為150 ℃；溶劑延遲7.5 min，采集模式為全掃描和選擇離子監(jiān)測模式，主要質譜參數(shù)見表1。

表1 4種羥基苯甲酸酯類化合物的質譜參數(shù)

2 結果與分析

2.1 提取溶劑選擇

為了簡化操作，使吸取溶劑更方便，選用比水輕的乙腈、乙醚、乙酸乙酯、丙酮-正己烷（1︰9，V/V）作為提取溶劑進行考察。結果表明，上述溶劑的提取效率無明顯差異，從經濟、環(huán)保、安全的角度考慮，選擇乙腈作為提取溶劑。

2.2 樣品凈化

Oasis PRIME HLB小柱使用無需活化和平衡，為了提高檢測效率，選擇它來凈化樣品。對不含油脂色素等基質很簡單的樣品，提取上清液，可在過微孔濾膜之后直接上機測定。對其他樣品，用Oasis PRIME HLB（3 mL，60 mg）小柱凈化。結果顯示4種目標物回收率均在88%～105%之間。但對于油脂含量特別高的樣品如油辣椒，其凈化效果并不太有效。因此用Oasis PRIME HLB（3 mL，150 mg）和Oasis PRIME HLB（6 mL，200 mg）小柱凈化。使用Oasis PRIME HLB（3 mL，150 mg）小柱時，其凈化效果無明顯改善，且回收率下降至65%～78%；使用Oasis PRIME HLB（6 mL，200 mg）時，小柱凈化效果有明顯改善，但回收率也出現(xiàn)較大幅度的下降，在60%～70%之間。因此，對于油脂含量特別高的樣品，Oasis PRIME HLB（3 mL，150 mg）小柱并不適用，而如果使用Oasis PRIME HLB（6 mL，200 mg）小柱凈化，則必須將加標回收率代入計算測定結果才更準確。

2.3 方法學驗證

2.3.1 方法的線性關系

將對羥基苯甲酸酯類溶液標準物質按比例稀釋成系列濃度的混合標準工作液，質量工作濃度在0.01～2.00 μg/mL之間。在選定的色譜條件和質譜條件下測定，以目標物質量濃度為橫坐標，以目標物峰面積為縱坐標，建立線性關系。試驗得出的線性回歸方程、線性關系、相關系數(shù)（r）和方法檢出限結果見表2，質譜圖見圖1。方程線性相關系數(shù)均在0.999 6以上，表明此方法在該濃度范圍內線性良好。

表2 4種羥基苯甲酸酯類化合物的線性范圍、線性回歸方程、相關系數(shù)和方法檢出限

圖1 1.00 μg/mL的混標溶液色譜圖

2.3.2 精密度和回收率

表3 4種羥基苯甲酸酯類化合物的平均回收率和相對標準偏差

圖2 蠔油加標樣品色譜圖

圖3 果汁飲料加標樣品色譜圖

圖4 魚罐頭加標樣品色譜圖

2.4 實際樣品測定

通過試驗建立的方法，對蠔油、醬油、含乳飲料、果汁飲料、辣椒醬、魚罐頭、火腿腸進行檢測。除辣椒醬檢出對羥基苯甲酸乙酯，含量為7.6 mg/kg，其他樣品均未檢出目標物。

3 結論

試驗運用氣相色譜-質譜技術對多種食品中對羥基苯甲酸酯類化合物含量的測定進行研究，建立起一套基于氣相色譜-質譜法可同時測定4種對羥基苯甲酸酯類化合物的檢測方法。該方法前處理簡單安全高效、消耗少、重復性好，除油脂含量特別高的樣品外，對其它樣品均能在保證較好凈化效果的同時獲得準確穩(wěn)定的檢測結果。