劉 暢，任鐵軍，王麗娟，侯建峰，秦愛英

洛陽市中心醫(yī)院腫瘤三病區(qū)，河南 洛陽 471000

消化道腫瘤發(fā)病率及死亡率逐年上升，成為嚴重威脅人類生命健康的常見惡性腫瘤，其中胃癌為危害健康的第二大腫瘤。臨床目前治療胃癌的主要方式為手術、放化療等，首選方式為手術治療，但部分患者確診時已錯過手術最佳時間，故對無法手術患者，選用何種更優(yōu)方式治療極為重要［1］。氟尿嘧啶類藥通過抑制胸腺嘧啶核苷酸以抑制合成DNA，具有抗代謝抗腫瘤作用。5-氟尿嘧啶（5-FU）是目前臨床治療實體瘤的氟尿嘧啶類藥物，特別對食管癌、結直腸癌及胃癌等消化道腫瘤使用較多。亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR) 為葉酸代謝關鍵酶，經(jīng)研究顯示MTHFR 基因具有多態(tài)性，其中最常見為C667T，667 位點C-T 改變能顯著降低該酶活性，提高體內5，10-MTHFR 水平，從而增加5-FU 抗腫瘤活性。二氫嘧啶脫氫酶（DPD）是5-FU 代謝的限速酶，其活性與5-FU 合成代謝及核苷酸類似物產生量密切相關［2］?？ㄅ嗨麨I為5-FU 前藥，目前應用于晚期胃癌、結直腸癌等腫瘤治療。為此，本研究探討了MTHFR 基因多態(tài)性對胃癌化療患者治療療效及預后的影響，旨在為臨床治療提供參考依據(jù)，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016 年1 月—2018 年12 月期間洛陽市中心醫(yī)院收治的300 例胃癌患者。納入標準：經(jīng)病理學確診為胃癌［3］者；錯過手術最佳時機而選擇化療者；經(jīng)CT 檢查可觀測到病灶者；接受基因檢測者；自愿參與本試驗并簽署知情同意書者。排除標準：近期接受其他藥物化療者；合并肝腎等重要臟器疾病者；精神疾病及溝通障礙者；依從性差者。納入患者中男性183例，女性117例；年齡為31～76 歲，平均年齡為（52.19±10.26）歲；病灶轉移：淋巴結81 例，肝臟41 例，肺15 例，肝臟及淋巴結31 例，其他132例。

1.2 方法

樣本收集及基因檢測分析［4］：化療前抽取患者靜脈血置于乙二胺四乙酸鈉抗凝管中，將患者血液樣本用氯化銨進行裂解，靜置5 min，離心機用3 000 r/min 速度將其離心5 min，去除上清液并再次重復上述步驟，保留管底白細胞。向含有白細胞離心管中加50 μL 核酸純化試劑，根據(jù)待測基因位點向白細胞中加相應測序試劑，后用熒光檢測儀進行檢測。提取DNA，對SNP位點所在片段進行PCR擴增，PCR 系統(tǒng)設置：95 ℃變性15 min，進行25 個循環(huán)，每隔循環(huán)有3 個溫度，94 ℃變性30 s，59 ℃和72 ℃各變性1 min，于72 ℃延伸7 min 后放置PCR 儀器中反應。取2 μL 反應物于3.0%瓊脂糖膠中電泳，用連接酶反應檢測其產物：在離心管中加100 μL 緩沖液、5 μL 連接酶、695 μL 去離子水進行充分混勻并離心，取9 μL 分裝置于200 μL PCR 反應管中并加入1 μL 反應產物。在PCR系統(tǒng)中95 ℃進行2 min 變性，共335 個循環(huán)，設置2 個溫度，94 ℃變性30 s，60 ℃變性2 min，將反應管放置PCR儀器中進行連接反應。取1 μL 連接產物、熒光標記分子量、去離子甲酰胺上樣液進行混合，在95 ℃中變性2 min，再放置冰中驟冷，用5%聚丙烯酰胺、5 μmol/L 尿素在3000 V 中電泳2.5 h，收集數(shù)據(jù)并分析基因型。患者使用5-FU 聯(lián)合卡培他濱方案進行化療，5-FU 劑量為350 mg/m2，卡培他濱為825 mg/m2，均靜脈滴注，以21 d 為一療程，兩個療程后評估患者治療效果。

1.3 觀察指標

根據(jù)患者臨床癥狀分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、穩(wěn)定（SD）和進展（PD）四個程度評估療效，有效率=（CR+PR）/例數(shù)×100%。觀察化療期間患者出現(xiàn)血液及消化系統(tǒng)障礙等不良反應情況，記錄發(fā)生例數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計分析研究，基因符合Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗（P＞0.05）；有效率及不良反應發(fā)生率用（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，F(xiàn)isher精確檢驗，以P＜0.05表示數(shù)據(jù)比較結果差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 基因檢測結果

根據(jù)基因檢測結果將患者分為A 組、B 組、C 組、D組，A組DPD酶活性低且MTHFR基因發(fā)生C-T突變，共72例（24.00%）；B 組DPD 酶活性低且MTHFR 基因未發(fā)生C-T突變，共76例（25.33%）；C組DPD酶活性高且MTHFR基因基因發(fā)生C-T突變，共74例（24.67%）；D組DPD酶活性高且MTHFR基因未發(fā)生C-T突變，共78例（26.00%）。

2.2 不同基因化療療效比較

A 組、B 組、C 組、D 組化療有效率分別為54.17%、39.47%、40.54%、32.05%；A 組有效率高于B 組、C 組、D組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 不同基因化療療效比較

2.3 不同基因化療不良反應比較

A組、B組、C組、D組不良反應發(fā)生率分別為20.83%、47.37%、52.70%、71.79%；A組不良反應發(fā)生率低于B組、C組、D組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 不同基因化療不良反應比較

3 討論

胃癌等多數(shù)惡性腫瘤患者死亡的主要原因為病灶復發(fā)與轉移，大部分患者行根治術后仍發(fā)生腫瘤復發(fā)或轉移，對不良預后的胃癌患者輔助化療為降低其復發(fā)率的最佳治療方式。5-FU 在臨床中普遍應用，但個體間敏感性、療效和毒性反應差異引起廣泛關注。隨著醫(yī)療科技進步，卡培他濱作為新型化療藥物應用于臨床，為5-FU 前藥，其療效不亞于5-FU，是目前治療消化道腫瘤的常用藥物。

DPD 酶多分布于肝臟及外周血單核細胞，腫瘤細胞和炎性組織中也有少量分布，為5-FU 代謝失活的限速酶，其活性大小決定了5-FU 進入代謝和產生核苷酸類似物含量。研究顯示［5］，當DPD 酶缺乏活性易阻礙5-FU 體內清除，延長半衰期，進而機體出現(xiàn)毒副作用。DPD 酶活性高或阻止表達量多時，患者對5-FU 敏感性差，療效不佳且預后差。吳沛鴻，徐玲［6］研究發(fā)現(xiàn)直腸癌體內DPD 低表達患者使用卡培他濱聯(lián)合奧沙利鉑療效及遠期生存優(yōu)于DPD 高表達患者。該研究中DPD 表達對使用5-FU 患者無顯著差異，但療效及生存方面比較，DPD 高表達患者差于低表達患者。MTHFR 為參與5-FU 合成代謝的關鍵酶，產生于MTHFR 基因編碼。葉酸代謝過程中，MTHFR 將5,10-MTHFR 轉化為5-MTHFR，參與蛋氨酸循環(huán)及多種基因DNA 甲基化。5-FU 體內轉化后與胸苷酸合成酶（TS）、5,10-MTHFR 結合成穩(wěn)定三元共價物，干擾DNA 合成及修復而發(fā)揮療效。研究顯示［7］，MTHFR 基因為多態(tài)性，C677T 為其最常見多態(tài)，即在MTHFR 位點C-T 變化，降低酶活性，提高體內5,10-MTHFR 水平，有增強5-FU 抗腫瘤作用。MTHFR 基因C677T 多態(tài)性易影響葉酸濃度及其細胞中分布，并改變細胞生長及機體對化療敏感性［8］。本研究結果顯示，A 組DPD 酶活性低且MTHFR 基因發(fā)生C-T 突變，共72 例；B 組DPD 酶活性低且MTHFR 基因未發(fā)生C-T 突變，共76 例；C 組DPD 酶活性高且MTHFR 基因基因發(fā)生C-T 突變，共74 例；D 組DPD 酶活性高且MTHFR 基因未發(fā)生C-T 突變，共78 例。根據(jù)化療結果，A 組療效高于其余三組，且不良反應發(fā)生率最低，說明DPD 酶低活性表達且MTHFR 位點C-T 發(fā)生變化患者對5-FU 及卡培他濱敏感及耐受性高，藥物在其體內利用率高，有效率高。

綜上所述，通過檢測胃癌患者體內DPD 酶活性及MTHFR 基因多態(tài)性，預測不同基因型患者化療藥物敏感性及耐受性，在疾病初期為患者制定個體化給藥方案，可有效提高治療有效率并減少不良反應，預后較好，值得推薦。