文蘭香， 覃世運， 陳麗君

(海南省三亞市中心醫(yī)院/海南省第三人民醫(yī)院腫瘤中心， 海南 三亞 572000)

乳腺癌屬于乳腺上皮組織來源惡性腫瘤，一般為女性發(fā)病。由于生活環(huán)境、飲食習慣、妊娠、精神狀態(tài)、遺傳等因素影響，乳腺癌在女性中發(fā)病率逐年升高，位居婦科惡性腫瘤之首。乳腺癌中晚期患者生存率低，預后極差，嚴重影響患者生存質量[1]。腫瘤放射治療簡稱放療，目前臨床多采用手術、放療、化療等手段結合治療乳腺癌，可明顯提高患者生存率[2]。放療療效與腫瘤放療敏感性有關，放療敏感性差異導致乳腺癌患者接受放療后生存率等預后狀況明顯不同[3]。有研究表明，宮頸癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達明顯增加，抑制其表達可降低宮頸癌細胞增殖和侵襲能力[4]。與癌旁組織相比，lncRNA SNHG20在肝癌組織中表達顯著上調，與肝癌患者總生存率較差有關，是肝癌患者預后獨立影響因素[5]。然而lncRNA SNHG20在乳腺癌組織中表達及其與乳腺癌放療敏感性、患者預后關系研究較少。本研究通過檢測lncRNA SNHG20在乳腺癌組織中表達水平，分析其與乳腺癌放療敏感性及患者預后關系。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取2013年11月至2016年10月本院收治的乳腺癌患者119例作為研究對象，患者年齡29～67歲，平均(43.28±10.31)歲。納入標準：①經穿刺活檢或病理組織切片檢查確診為乳腺癌；②臨床及隨訪資料完整；③入組前未進行任何治療；④患者及其家屬同意并簽署知情同意書。排除標準：①不能接受放、化療者；②合并患有其它部位腫瘤者；③患有嚴重精神疾病者。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟(TNM)分期系統(tǒng)[6]，將乳腺癌患者分為：Ⅰ～Ⅱ期80例，Ⅲ期39例；根據(jù)分化程度分為高、中分化74例，低分化45例；根據(jù)淋巴結轉移情況分為：無淋巴結轉移77例，有淋巴結轉移42例；根據(jù)ER、PR表達情況分為：ER陽性63例、ER陰性56例，PR陽性72例、PR陰性47例；根據(jù)治療手段分為：有輔助化療60例，未輔助化療59例。取入組乳腺癌患者活檢癌組織，另取本院病理庫正常乳腺組織119例作為對照。兩組年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經海南省第三人民醫(yī)院倫理委員會批準同意。

1.2主要儀器和試劑:實時熒光定量(Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR)儀(型號：ABI 7500 Fast，美國ABI公司)；總RNA提取試劑盒(貨號：TR205-10，北京天漠科技開發(fā)有限公司)；反轉錄試劑盒(貨號：ALH266-PTO，北京百奧萊博科技有限公司)；qRT-PCR試劑盒(貨號：RR820A，大連寶生物工程有限公司)。

1.3qRT-PCR法檢測lncRNA SNHG20表達水平:將癌組織及正常組織液氮迅速冷凍研磨后Trizol法提取總RNA，反轉錄為cDNA后，用于qRT-PCR實驗。20μL反應體系如下：SYBR Premix Ex Taq II 10μL，ROX Dye 0.4μL，上游引物0.8μL，下游引物0.8μL，cDNA 2μL，無酶水6μL。反應步驟如下：95℃ 30s，1循環(huán)；95℃ 5s、60℃ 33s，40循環(huán)。采用2-△△CT法計算lncRNA SNHG20相對表達量。本次實驗所用引物如表1，以β-actin為內參基因。引物由大連寶生物工程有限公司合成。

表1 qRT-PCR引物序列

1.4放療及療效評定:入組患者進行根治性放療，分別用6 MV X射線照射胸壁及鎖骨上下區(qū)，5次/周，照射劑量40 Gy，治療4周。療效：放療結束1個月后，根據(jù)RECIST療效評價標準[7]分為：完全緩解(CR)：腫瘤完全消失，且維持4周；部分緩解(PR)：目標病灶最長徑總和減少≥30%，維持4周；疾病穩(wěn)定(SD)：變化在PR與PD之間；疾病進展(PD)：目標病灶最長徑總和增加20%。緩解率=(CR+PR)/總例數(shù)×100%；總有效率=(CR+PR+SD)/總例數(shù)×100%。

2 結 果

2.1乳腺癌組織及正常乳腺組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達水平:乳腺癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達水平顯著高于正常乳腺組織(P<0.05)，見表2。

表2 lncRNA SNHG20表達水平比較

2.2乳腺癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達與臨床病理特征關系:以lncRNA SNHG20在乳腺癌組織中表達平均值(3.15)為界分為高表達組和低表達組。乳腺癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達水平與年齡、腫瘤直徑、ER值及PR值無關(P均>0.05)，與分化程度、TNM分期、淋巴結轉移及輔助化療有關(P均<0.05)，見表3。

表3 lncRNA SNHG20表達水平與乳腺癌患者臨床病理特征關系n(%)

2.3乳腺癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達與患者近期放療療效關系:lncRNA SNHG20高表達組患者放療后緩解率顯著低于低表達組(P<0.05)。lncRNA SNHG20高表達與低表達組放療總有效率相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表4。

表4 乳腺癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達與患者近期放療療效關系n(%)

2.4乳腺癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達與患者遠期生存情況關系:Kaplan-Meier生存分析結果顯示，lncRNA SNHG20高表達組患者3年累積生存18例，lncRNA SNHG20低表達組患者3年累積生存48例。lncRNA SNHG20高表達組患者3年總生存率為34.62%，顯著低于lncRNA SNHG20低表達組3年總生存率71.64%( 2=13.750，P<0.05)。見圖1。

2.5Cox回歸模型分析乳腺癌患者預后影響因素:Cox回歸模型單因素分析結果顯示，分化程度低、TNM分期Ⅲ期、淋巴結轉移、lncRNA SNHG20高表達、未輔助化療是影響乳腺癌患者不良預后危險因素(P均<0.05)。多因素分析結果顯示，TNM分期Ⅲ期、淋巴結轉移、lncRNA SNHG20高表達是影響乳腺癌患者不良預后獨立危險因素(P均<0.05)。見表5。

表5 乳腺癌患者預后影響因素分析

圖1 Kaplan-Meier生存分析

3 討 論

lnc RNA是一類長度大于200堿基的非編碼RNA，具有調控細胞周期、細胞分化等功能。Wu等[8]研究證實，lncRNA SNHG20在前列腺癌中表達顯著上調，下調其表達可抑制前列腺癌發(fā)生發(fā)展。本研究結果顯示，與正常乳腺組織相比，lncRNA SNHG20在乳腺癌組織中表達顯著升高，與Wu等[8]在卵巢癌中研究結果一致，提示SNHG20可能與乳腺癌發(fā)生有關。Zhenyao等[9]研究發(fā)現(xiàn)，非小細胞肺癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達明顯升高，與高TNM分期、淋巴結轉移及總生存率低有關。本研究結果發(fā)現(xiàn)，不同分化程度、TNM分期、淋巴結轉移情況乳腺癌患者lncRNA SNHG20表達水平不同，與Zhenyao等[9]在非小細胞肺癌中研究結果相似，提示lncRNA SNHG20可能與乳腺癌發(fā)展有關。

放療是通過α、β、γ等放射線進行局部治療，是乳腺癌治療的主要手段之一。有研究表明，lncRNA SBF2-AS1在非小細胞肺癌組織中表達上調，抑制SBF2-AS1表達則可增強非小細胞肺癌細胞放療敏感性[10]。Lai等[11]研究報道，放射敏感性乳腺癌組織中l(wèi)ncRNA CCAT1表達水平顯著低于耐輻射癌組織，lncRNA CCAT1是乳腺癌預后生物標志物。提示lncRNA可能與腫瘤放療敏感性及患者預后有關。本研究結果顯示，lncRNA SNHG20高表達組患者放療后緩解率顯著低于lncRNA SNHG20低表達組患者，提示lncRNA SNHG20表達水平升高可能與患者放療敏感性降低降低有關。Hu等[12]在乳腺癌研究中發(fā)現(xiàn)，lncRNA HOTAIR晚期癌細胞中表達量較高，能顯著增強癌細胞抗輻射性、促進癌細胞增殖。提示lncRNA SNHG20高表達可能通過抑制乳腺癌細胞放療敏感性促進乳腺癌進展。

Gao等[13]研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA SNHG20在口腔鱗癌組織中表達水平明顯升高，與患者生存期較短有關，是影響患者不良預后危險因素。本研究結果發(fā)現(xiàn)，lncRNA SNHG20高表達組患者3年總生存率明顯降低，提示lncRNA SNHG20高表達可能與乳腺癌患者預后不良有關。放療敏感性是影響腫瘤放療療效及患者預后重要因素。提示本研究中l(wèi)ncRNA SNHG20高表達可能通過抑制乳腺癌放療敏感性，影響患者3年總生存率低等不良預后。本研究還發(fā)現(xiàn)，TNM分期Ⅲ期、淋巴結轉移、lncRNA SNHG20高表達是影響乳腺癌患者不良預后獨立危險因素，提示lncRNA SNHG20表達水平可能成為判斷乳腺癌惡性程度、評估患者預后標志物。

綜上所述，lncRNA SNHG20在乳腺癌組織中高表達，與乳腺癌放療敏感性低、TNM分期、淋巴結轉移及患者總生存率有關。lncRNA SNHG20可能通過抑制乳腺癌放療敏感性，促進乳腺癌進展，進而影響患者總生存率低等不良預后。但由于本研究樣本量較少，研究較為基礎且隨訪時間較短，lncRNA SNHG20在乳腺癌中具體作用尚需進一步深入研究。