韋海鴻， 房 林

(同濟大學(xué)附屬第十人民醫(yī)院甲狀腺乳腺外科，上海 200072)

NUAK2，即NUAK家族SNF1樣激酶2，又名SNARK(SNF1/AMPK-related kinase)，是腺苷酸活化的蛋白激酶(AMPK)相關(guān)激酶家族的第4個成員，于1995年首次被發(fā)現(xiàn)[1]。人NUAK2的cDNA全長3443bp，編碼628個氨基酸蛋白，相對分子質(zhì)量約為69000，染色體定位為1q32.1[2-3]。

NUAK2在人體內(nèi)的作用尚不十分明確，已有的研究表明NUAK2對于介導(dǎo)細(xì)胞間的分離、維持肌動蛋白應(yīng)力纖維的穩(wěn)定是必需的[2,4],在維持骨骼肌的質(zhì)量、調(diào)控心肌細(xì)胞葡萄糖的轉(zhuǎn)運及脂肪細(xì)胞的穩(wěn)定方面也發(fā)揮著重要作用[5-7]。除此之外，現(xiàn)有的關(guān)于NUAK2與腫瘤相關(guān)性得研究提示NUAK2可能發(fā)揮著促進腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移的作用，同時，除了應(yīng)激狀態(tài)可以使NUAK2的活性上調(diào)以外[8]，某些細(xì)胞因子也可以調(diào)控NUAK2的活性，包括一些腫瘤相關(guān)的細(xì)胞因子，如LKB1、死亡受體CD95、TNF-α和EB病毒潛伏膜蛋白(LMP1)等都可以上調(diào)NUAK2的活性[9-12]，因此，NUAK2在腫瘤中發(fā)揮的具體作用值得進一步探索。

迄今為止，NUAK2是否與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)尚無定論，本實驗通過測定乳腺癌組織中的NUAK2基因表達(dá)的產(chǎn)物——NUAK2蛋白的表達(dá)水平，結(jié)合相關(guān)的臨床、病理特征進行分析，初步推斷NUAK2在乳腺癌中發(fā)揮的作用。由于乳腺癌不同的分子分型的治療方法及預(yù)后存在差異，因此本研究把最常見的Luminal型乳腺癌單獨作為研究對象，為今后更深入的研究提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 患者來源及納入、排除標(biāo)準(zhǔn)

隨機抽取從2015年1月1日—2015年12月31日在同濟大學(xué)附屬第十人民醫(yī)院甲狀腺乳腺外科接受手術(shù)治療的Luminal型浸潤性乳腺癌患者53例(分子分型根據(jù)《NCCN指南2017年第4版乳腺癌》[13])。手術(shù)方式包括乳腺癌改良根治術(shù)、保留乳房的乳腺癌切除術(shù)。術(shù)中常規(guī)予以腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)或前哨淋巴結(jié)活檢術(shù)，前哨淋巴結(jié)活檢陽性患者追加進行腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)。所有患者均按照相關(guān)指南決定是否接受術(shù)后化療、內(nèi)分泌治療、靶向治療和放療。

有以下情況之一者，不作為本研究的對象。有乳腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者；雙側(cè)乳腺癌患者；既往有其他惡性腫瘤病史患者；未按照醫(yī)囑接受術(shù)后輔助化療、內(nèi)分泌治療、靶向治療、放療者，或化療、內(nèi)分泌治療、靶向治療、放療中斷的患者。

1.2 隨訪

隨訪方式主要以住院復(fù)查隨訪、門診隨訪和電話隨訪為主，術(shù)后1～2年內(nèi)至少每3個月隨訪1次，第3～4年至少每4～6個月隨訪1次。隨訪內(nèi)容包括觸診體檢、血生化、血常規(guī)和肝臟彩超。有癥狀患者、或復(fù)發(fā)風(fēng)險較高患者根據(jù)情況予以檢查骨掃描、CT或MRI，但不作為常規(guī)隨訪檢查項目。隨訪開始時間為術(shù)后第1天，隨訪結(jié)束時間截點為2019年4月30日。

總體生存期(overall survival, OS)定義為納入本研究的患者自接受手術(shù)之日起至因乳腺癌引起死亡的時間。無復(fù)發(fā)生存期(recurrence-free survival, RFS)定義為納入本研究的患者自接受手術(shù)之日其至發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的時間。

滿足下列情況之一者作為刪失數(shù)據(jù)(censored case)，終止隨訪時間即為研究結(jié)束時間。(1) 觀察對象中途失訪者；(2) 觀察對象死于其他與研究無關(guān)的原因者；(3) 觀察對象的生存期超過了研究的結(jié)束時間截點。

1.3 石蠟切片的制作

根據(jù)納入研究的53例患者信息，調(diào)取同濟大學(xué)附屬第十人民醫(yī)院病理科常規(guī)石蠟包埋的組織，針對腫瘤組織和距離腫瘤5cm以上的正常乳腺組織，選取最佳切面，使用切片機進行切片，切片厚度控制在4～6μm。

用毛筆蠟帶挑取切片，放入40～45℃水浴鍋中進行展片，等到蠟片充分展平后，取一清潔載玻片，載玻片上涂一薄層蛋白甘油，然后在水中撈取切片，保證其平整地黏附在載玻片上，放到格盤內(nèi)，置38℃ 溫箱中烘干。

最終獲得乳腺癌切片標(biāo)本53例，正常乳腺組織切片標(biāo)本47例，根據(jù)相關(guān)信息在載玻片上做好標(biāo)記。此外額外制作足量的切片標(biāo)本以進行預(yù)實驗確定免疫組化染色時的抗體稀釋比例。

1.4 免疫組化染色

本研究使用NUAK2抗體來自Proteintech公司的兔多克隆抗體，使用Ultraview DAB全自動免疫組化儀進行免疫組化染色。

將石蠟切片放入全自動免疫組化儀器的切片槽內(nèi)，檢查各試劑均足量，完成信息確認(rèn)點擊開始，按照儀器使用指南啟動全自動免疫組化儀，步驟如下。(1) 加熱載玻片至75℃，孵育4min；(2) 將載玻片降溫至72℃，孵育4min；使用脫蠟液(EZ)脫蠟12min；沖洗載玻片，加熱載玻片至100℃；(3) 免疫組化抗原修復(fù)緩沖液(CC1)修復(fù)64min；(4) 沖洗載玻片，將載玻片降溫至37℃；(5) 添加紫外線抑制劑(UV inhibitor)，孵育4min；(6) 沖洗載玻片，添加NUAK2抗體，抗體稀釋比例分別為1∶20、1∶50、1∶100、1∶200、1∶400、1∶500，孵育16min；(7) 沖洗載玻片，添加UV HRP UNIV MULT，孵育8min；(8) 沖洗載玻片，同時添加UV DAB和UV DAB H2O2，孵育 8min；(9) 沖洗載玻片，添加UV COPPER，孵育4min；(10) 沖洗載玻片，添加hematoxylin Ⅱ，孵育4min；沖洗載玻片，添加BLUING REAGENT，孵育4min；(11) 取出切片，使用洗潔精和溫水浸泡、柔和沖洗，將油跡清洗干凈，然后放入乙醇中浸泡脫水，乙醇濃度依次為85%、95%和100%，二甲苯透明兩次，加入中性樹脂封片，鏡下觀看。

首先按照上述步驟進行預(yù)實驗確定最佳抗體稀釋比例為1∶400，重復(fù)上述步驟，對53例乳腺癌標(biāo)本及47例正常乳腺組織標(biāo)本進行免疫組化染色。

1.5 免疫組織化學(xué)結(jié)果評分

免疫組化評分由兩位病理科醫(yī)師進行，在顯微鏡下使用低倍鏡觀察選出最佳視野范圍，在此范圍中再使用高倍鏡(10×40)隨機觀察5個視野，免疫組化評分被定義為染色陽性細(xì)胞頻率和染色強度的乘積。

染色陽性細(xì)胞頻率評分標(biāo)準(zhǔn)為: 在高倍鏡下的5個視野中，陽性細(xì)胞比例<5%計為0分，5%～25%計為1分，26%～50%計為2分，51%～75%計為3分，76%以上計為4分。

染色強度評分標(biāo)準(zhǔn)為: 在高倍鏡下觀察，無特異性染色即為染色陰性，計為0分，染色為淡黃色為弱陽性染色計為1分，棕黃色為中度陽性計為2分，深棕色為強陽性計為3分。

最終以染色陽性細(xì)胞頻率評分與染色強度評分的乘積作為免疫組化最終評分結(jié)果，凡遇兩位病理醫(yī)師評分差異較大者，聯(lián)系第3位病理醫(yī)師進行評分得出最終結(jié)果，最終評分結(jié)果為0～12分。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 患者臨床、病理數(shù)據(jù)及預(yù)后的基本概況

本研究共納入Luminal型乳腺癌患者53例，均為女性；年齡31～70歲，平均為(52.2±1.25)歲，其中32例已絕經(jīng)；病理學(xué)類型: 45例浸潤性導(dǎo)管癌、4例浸潤性小葉癌、4例粘液癌；Luminal A型患者23例，Luminal B型患者30例；患者腫瘤病理學(xué)分級Ⅰ級9例、Ⅱ級28例、Ⅱ～Ⅲ級7例(Ⅱ～Ⅲ指分級介于Ⅱ級和Ⅲ級之間)、Ⅲ級9例；3例患者組織標(biāo)本脈管內(nèi)有癌栓；5例患者Her2陽性；腫瘤最大徑0.5～6cm，平均(2.05±0.122) cm；轉(zhuǎn)移腋窩淋巴結(jié)數(shù)目為0～28枚，平均(2.42±0.731)枚；Ki-67值為5%～80%，平均(29.15±2.293)%；病理TNM分期: Ⅰ 期22例、Ⅱ 期19例和 Ⅲ 期12例；隨訪時間為9～51個月，平均為(41.23±1.08)個月，其中48例獲得完整隨訪，5例中途失訪，失訪率為9.43%；至隨訪時間結(jié)束，出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的患者共10例，其中8例因腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移死亡，死于其他原因者0例。

2.2 NUAK2蛋白在Luminal型乳腺癌組織和癌旁組織中的表達(dá)及差異

免疫組化染色顯示，NUAK2蛋白在乳腺癌組織中的細(xì)胞核、細(xì)胞漿內(nèi)均有表達(dá)，但以核表達(dá)為主，典型的NUAK2蛋白在乳腺癌組織及癌旁組織中的免疫組化染色情況見圖1。根據(jù)其核表達(dá)水平進行免疫組化評分，53例乳腺癌組織免疫組化評分平均得分為(3.660±0.437)分，而47例癌旁乳腺組織平均得分為(2.128±0.294)分，NUAK2蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)高于癌旁乳腺組織(P=0.032)。通過兩兩配對比較同時擁有乳腺癌組織及癌旁組織的47例患者的組織標(biāo)本，其中乳腺癌組織中NUAK2免疫組化評分高于癌旁正常組織的有26例、相等的有10例、低于癌旁正常組織的有11例，分別占比55.3%、21.3%和23.4%，這47例乳腺癌組織中NUAK2免疫組化評分均值為(3.893±0.476)分，高于47例癌旁乳腺癌組織的(2.128±0.294)分(P=0.000<0.05)。另外，根據(jù)NUAK2在組織中免疫組化評分的高低，以0≤評分<3、3≤評分<6、6≤評分<9、9≤評分≤12分為4組，在乳腺癌組織中，各組分布頻數(shù)為26、10、14和3，而在癌旁乳腺組織中則為38、6、2和1，提示在乳腺癌組織中NUAK2蛋白也更趨向于高表達(dá)，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.005)，見表1。

2.3 NUAK2蛋白在Luminal型乳腺癌組織中的表達(dá)水平與患者臨床、病理特征和預(yù)后的關(guān)系

根據(jù)臨床、病理及隨訪數(shù)據(jù)將患者進行分組，比較不同組別的NUAK2免疫組化評分是否存在差異，死亡患者的NUAK2評分明顯升高，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.037<0.05，秩和檢驗)，提示NUAK2蛋白的高表達(dá)可能與乳腺癌患者的預(yù)后不良相關(guān)，見表2。

圖1 NUAK2蛋白在乳腺癌組織及癌旁組織中的免疫組化染色情況Fig.1 The immunohistochemical staining of NUAK2 protein in breast cancer and adjacent tissuesA和E、B和F、C和G、D和H分別為4例患者的癌旁組織和乳腺癌組織的鏡下照片；免疫組化染色結(jié)果顯示腫瘤組織細(xì)胞核染色強度高于癌旁組織

表1 乳腺癌組織和癌旁組織的免疫組化評分在各組中的分布

2.4 NUAK2蛋白表達(dá)水平與患者復(fù)發(fā)、死亡的相關(guān)性分析

為進一步分析NUAK2蛋白表達(dá)水平和乳腺癌患者復(fù)發(fā)、死亡等預(yù)后情況的相關(guān)性，依據(jù)53例患者NUAK2評分的中位數(shù)(NUAK2評分=3分)將其分為兩組，得到NUAK2低表達(dá)組(評分≤3分)27例[均值為(1.074±0.168)分]，NUAK2高表達(dá)組(評分>3分)26例[均值為(6.3462±0.460)分]，使用Kaplan-Meier曲線分析法進行統(tǒng)計學(xué)分析，兩組患者無復(fù)發(fā)生存和總體生存曲線見圖2～3。NUAK2高表達(dá)組和低表達(dá)組的無復(fù)發(fā)生存率分別為69.2%和91.7%，高表達(dá)組無復(fù)發(fā)生存率明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.035)；NUAK2高表達(dá)組和低表達(dá)組的總體生存率分別為72.6%和94.1%，差異同樣具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.024)，提示NUAK2高表達(dá)組乳腺癌患者更容易復(fù)發(fā)、死亡；另外，《NCCN指南2017年第4版乳腺癌》中乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險評估顯示: 乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險的危險度與年齡、原發(fā)腫瘤(pT)分期、病理學(xué)分級、脈管是否存在癌栓、HER2基因是否擴增以及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，從而分析NUAK2高表達(dá)組和低表達(dá)組患者與這些因素的相關(guān)性，顯示NUAK2高表達(dá)組患者較低表達(dá)組更容易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.038)，見表3。

表2 乳腺癌組織中NUAK2表達(dá)水平與臨床、病理特征之間的關(guān)系

續(xù)表

圖2 Kaplan-Meier生存曲線分析NUAK2蛋白表達(dá)水平與患者無復(fù)發(fā)生存率的關(guān)系Fig.2 Kaplan-meier survival curve analysis of the correlation between the expression level of NUAK2 protein and recurrence-free survival

2.5 Luminal型乳腺癌患者術(shù)后無復(fù)發(fā)生存時間、總體生存時間的影響因素分析

利用Cox比例風(fēng)險回歸模型分析與患者預(yù)后相關(guān)的影響因素。由于本研究樣本量較少，變量較多，首先進行單因素分析篩選出可能相關(guān)的變量，見表4。為避免篩選條件太嚴(yán)格將真正影響預(yù)后的變量刪除，參考其他相關(guān)研究的做法，適當(dāng)將P值的限制放寬(大多數(shù)研究將其放寬為0.1～0.15)，在此設(shè)定P<0.1者即可納入下一步的多因素分析；另外，雖然某些指標(biāo)在單因素Cox風(fēng)險回歸分析時被認(rèn)為是無關(guān)變量(P值≥0.1)，若這些指標(biāo)被證實與乳腺癌的復(fù)發(fā)相關(guān)，亦將其納入多因素分析；經(jīng)處理后將年齡、病理學(xué)分級、脈管癌栓情況、Her2、原發(fā)腫瘤分期(pT)、區(qū)域淋巴結(jié)分期(pN)和NUAK2評分納入多因素Cox比例風(fēng)險回歸模型，見表5。結(jié)果顯示原發(fā)腫瘤分期、區(qū)域淋巴結(jié)分期以及NUAK2評分與乳腺癌的復(fù)發(fā)相關(guān)，而原發(fā)腫瘤分期與乳腺癌的死亡相關(guān)，推測NUAK2蛋白可以作為是預(yù)測乳腺癌復(fù)發(fā)的獨立危險因素。

圖3 Kaplan-Meier生存曲線分析NUAK2蛋白表達(dá)水平與患者總體生存率的關(guān)系Fig.3 Kaplan-meier survival curve analysis of the correlation between the expression level of NUAK2 protein and overall survival

表3 NUAK2表達(dá)水平與乳腺癌復(fù)發(fā)相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系

表4 單因素Cox比例風(fēng)險回歸模型分析結(jié)果

表5 多因素Cox比例風(fēng)險回歸模型分析結(jié)果

3 討 論

2018年的數(shù)據(jù)顯示，在全球范圍內(nèi)的女性群體之中，乳腺癌的發(fā)患者數(shù)和死亡人數(shù)均已位列第一[14]?；仡櫲橄侔┲委煹臍v史，不難發(fā)現(xiàn)手術(shù)范圍的擴大并不能改善生存率，而近年來乳腺癌患者生存率的改善，主要歸功于早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷以及術(shù)后綜合輔助治療的不斷完善。盡管如此，仍然有一部分患者無法避免地出現(xiàn)腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，因此，尋找新的風(fēng)險基因和治療靶點從而獲得新的分型、新的藥物和治療策略勢在必行。

3.1 NUAK2在多種腫瘤中扮演著“促癌”的作用

在NUAK2與其他腫瘤的相關(guān)性研究中，F(xiàn)u等[15]發(fā)現(xiàn)在腦膠質(zhì)瘤組織中，NUAK2表達(dá)上調(diào)，其表達(dá)與疾病的晚期有關(guān)，體外研究發(fā)現(xiàn)，NUAK2過表達(dá)促進了A172膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，而攜帶靶向的NUAK2沉默抑制了A172膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖。Namiki等[16-18]在黑色素瘤的相關(guān)研究中，敲除NUAK2可以誘導(dǎo)黑色素瘤細(xì)胞的衰老，降低s期比例，減少遷移，體內(nèi)分析顯示，下調(diào)NUAK2會抑制小鼠黑色素瘤的生長，高水平NUAK2表達(dá)的肢端黑色素瘤患者復(fù)發(fā)的風(fēng)險大于低水平NUAK2表達(dá)的肢端黑色素瘤患者，表明NUAK2的表達(dá)與黑色素瘤細(xì)胞的致癌特性和肢端黑色素瘤患者的生存密切相關(guān)。在另一項NUAK2和胃癌關(guān)系的研究中，NUAK2蛋白在腫瘤組織和正常胃組織中的表達(dá)存在差異，同時NUAK2能顯著促進胃癌細(xì)胞的增殖，NUAK2過表達(dá)降低了G1期細(xì)胞百分率，增加了S期細(xì)胞百分率[19]。Western印跡法分析和miRNA微陣列顯示，過表達(dá)NUAK2導(dǎo)致增殖標(biāo)志物c-myc、增殖細(xì)胞核抗原、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶2、miRNA 21、胃癌干細(xì)胞標(biāo)志物醛脫氫酶1、CD44、CD133表達(dá)水平升高[19]。而本研究的結(jié)果表明，NUAK2蛋白在Luminal型乳腺癌組織細(xì)胞核中較正常乳腺組織高表達(dá)，其表達(dá)水平與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后情況存在相關(guān)性，這也與上述提到的研究結(jié)果相一致，可見NUAK2可能在乳腺癌等多種腫瘤中發(fā)揮著促進腫瘤發(fā)生、生長、侵襲、轉(zhuǎn)移的作用。

3.2 NUAK2可能是乳腺癌的一個原癌基因且通過基因擴增的方式活化

原癌基因活化后可以通過表達(dá)產(chǎn)物的質(zhì)和量的變化或表達(dá)方式在時間及空間上的改變，使細(xì)胞脫離正常的信號控制，從而發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，而本研究的結(jié)果恰恰顯示了NUAK2基因表達(dá)的產(chǎn)物——NUAK2蛋白在Luminal型乳腺癌患者的腫瘤組織中高表達(dá)，且表達(dá)水平與的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后相關(guān)。

而早在2008年，Argos等[20]為了識別與乳腺癌發(fā)生有關(guān)的新基因，選取接受手術(shù)的浸潤性乳腺癌患者的病理切片標(biāo)本，對其正常組織及腫瘤組織的DNA進行了全基因組掃描并進行對比，結(jié)果提示染色體區(qū)域1q32.1為拷貝數(shù)擴增顯著的區(qū)域，而人NUAK2基因的染色體定位恰恰就是1q32.1；另外，查閱TCGA數(shù)據(jù)庫，NUAK2基因在四種分子分型的乳腺癌組織中的表達(dá)量均高于正常乳腺組織。

原癌基因活化的方式包括基因突變、基因擴增、染色體易位和獲得啟動子和增強子，結(jié)合Argos等[20]的研究、TCGA數(shù)據(jù)庫的資料以及本研究的結(jié)果，NUAK2可能是通過基因擴增的方式使其表達(dá)產(chǎn)物——NUAK2蛋白增加，從而發(fā)揮促進乳腺癌發(fā)生發(fā)展的作用。

3.3 NUAK2可能通過與TGF-β通路、HIPPO通路相互作用而發(fā)揮“促癌”作用

本研究雖然提示NUAK2蛋白與Luminal型乳腺癌存在相關(guān)性，但關(guān)于其具體的作用機制未能明確。然而，可以根據(jù)此前的研究作出一定的假設(shè)。

Kolliopoulos等[21]發(fā)現(xiàn)在TGF-β信號通路中，NUAK2是該通路的一個靶基因，更重要的是，NUAK2在其中發(fā)揮著正反饋的作用，相當(dāng)于TGF-β信號通路的增強子，可以增強TGF-β的活性；而當(dāng)沉默NUAK2時，TGF-β的活性是明顯受抑制的。Gill等[22]發(fā)現(xiàn)，在HIPPO通路中，NUAK2是YAP/TAZ的激活劑，可以直接抑制lats介導(dǎo)的YAP/TAZ磷酸化，進而上調(diào)YAP/TAZ的活性；另外NUAK2是YAP/TAZ的一個下游因子，YAP/TAZ只有通過誘導(dǎo)NUAK2，才能實現(xiàn)YAP/TAZ信號通路的有效性，說明NUAK2是YAP/YAZ的一個靶基因且在其中起到正反饋的作用。而Yuan等[23]的研究得到了類似的結(jié)果，他們以肝癌為模型，確定NUAK2是YAP發(fā)揮作用的重要中介，NUAK2的缺失將會抑制YAP的作用，進一步深入研究表明，NUAK2可以被YAP誘導(dǎo)活化并反作用于YAP從而介導(dǎo)YAP的自我強化。

TGF-β信號通路可以誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，對乳腺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移以及耐藥性發(fā)揮促進作用；而YAP/TAZ作為HIPPO信號通路的核心組件，也可以促進乳腺癌細(xì)胞的生長、進展、轉(zhuǎn)移，影響著乳腺癌患者的預(yù)后。所以，有可能NUAK2是通過與TGF-β通路、HIPPO通路相互作用而發(fā)揮促癌的作用，但是否如此，本研究無法提供依據(jù)，需要更進一步的研究進行驗證。

綜上所述，NUAK2可能在乳腺癌等多種腫瘤中都發(fā)揮著促進腫瘤發(fā)生、生長、侵襲、轉(zhuǎn)移的作用。雖然本研究僅以Luminal型乳腺癌患者作為研究對象，樣本量也較小，不足以代表NUAK2蛋白在所有分子分型的乳腺癌組織中的表達(dá)情況；且本研究僅使用免疫組化方法、從蛋白的層面分析了NUAK2蛋白在Luminal型乳腺癌組織中的表達(dá)情況，方法較為單一，半定量實驗說服力也不足；但總體來說，不管是在乳腺癌中還是其他腫瘤中，NUAK2都有著很高的研究價值。希望通過本研究，能吸引更多的研究者去進一步探索，揭開NUAK2的面紗，相信其結(jié)果是讓人期待的。