范三紅，王嬌嬌，白寶清，張錦華

（1.山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西 太原 030006；2.特色植物資源研究與利用山西重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（山西大學(xué)），山西 太原 030006）

辣椒紅色素是從成熟的辣椒果實(shí)中提取出的一種天然色素，在食品添加劑和美妝領(lǐng)域發(fā)展?jié)摿薮骩1]。辣椒紅色素因包含有辣椒紅素、玉米黃質(zhì)素和β-胡蘿卜素等，故具有VA的活性。研究表明辣椒紅色素具有抗氧化、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)活性和預(yù)防輻射等重要的生理功能[2-3]。辣椒堿是辣椒中主要辛辣成分，已成為國(guó)際上主要的香辛料之一。辣椒堿類物質(zhì)具有消炎鎮(zhèn)痛、抑菌等生理活性[4]。Kang等[5]研究表明辣椒堿減輕脂肪組織的炎性反應(yīng)，改善胰島素耐受反應(yīng)，進(jìn)一步降低血脂代謝。因此，提取分離得到高質(zhì)量的辣椒紅色素和辣椒堿，并對(duì)辣椒紅色素和辣椒堿進(jìn)行定量定性分析具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。

目前針對(duì)辣椒紅色素和辣椒堿的提取分離方法研究較多，多采用有機(jī)溶劑提取法、超聲波或微波輔助提取法和超臨界CO2萃取法等[6-7]，但對(duì)同時(shí)萃取分離得到2 種目標(biāo)產(chǎn)物的研究較少[8-9]。鹽析萃取是一種新興的綠色萃取技術(shù)[10]，現(xiàn)已被充分應(yīng)用于天然產(chǎn)物有效成分的提取[11]。范勇等[12]采用雙水相體系L44/Na2CO3/乙醇提取辣椒堿，通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化各因素，辣椒堿提取率達(dá)到95.6%。Dang Yanyan等[13]研究采用三液相體系分離辣椒紅素和辣椒堿，辣椒紅素和辣椒堿的產(chǎn)率分別為常規(guī)溶劑提取的105%和88%。本實(shí)驗(yàn)研究超聲輔助石油醚-乙腈-K2HPO4三相鹽析萃取體系同時(shí)分離得到辣椒紅色素和辣椒堿，并采用響應(yīng)面法優(yōu)化體系參數(shù)。

高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）作為一種能準(zhǔn)確、靈敏檢測(cè)天然產(chǎn)物有效成分含量的分析方法，已較多應(yīng)用于辣椒堿的檢測(cè)分析[14-15]，而辣椒紅色素的檢測(cè)還主要是常規(guī)的分光光度計(jì)法等[16]，其準(zhǔn)確性較低。本實(shí)驗(yàn)在響應(yīng)面優(yōu)化超聲輔助三液相萃取同時(shí)分離辣椒紅色素和辣椒堿的基礎(chǔ)上，結(jié)合HPLC法對(duì)33 種不同品種辣椒樣品中的辣椒紅色素和辣椒堿含量進(jìn)行測(cè)定，并運(yùn)用聚類分析法進(jìn)行分析。以期為辣椒紅色素和辣椒堿的萃取分離及其深入研究提供理論基礎(chǔ)，為選育優(yōu)質(zhì)辣椒品種提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

不同品種辣椒（編號(hào)c1、c100、c104、c105、c107、c116、c121、c123、c126、c22、c24、c25、c27、c29、c3、c30～c33、c35、002A、004A2、005A1、f1、f4、f5、s16、s3、s4、y126-2、y13-1、y29），由山西省農(nóng)科院蔬菜研究所提供。

甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、石油醚（沸點(diǎn)60～90 ℃）、氯仿、無(wú)機(jī)鹽等均為分析純；甲醇、乙腈、二氯甲烷均為色譜純；辣椒紅素（98%）、玉米黃質(zhì)素（97%）、β-胡蘿卜素（97%）、辣椒堿（99%）、二氫辣椒堿（98%）、降二氫辣椒堿（98%）均購(gòu)于百靈威科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

WJX-800A型高速多功能粉碎機(jī) 上海緣沃工貿(mào)有限公司；AL204電子分析天平 梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；SB-5200DT型超聲波清洗器 寧波新芝生物科技股份有限公司；1260 Infinity II高效液相色譜儀美國(guó)安捷倫公司。

1.3 方法

1.3.1 三相鹽析萃取體系的構(gòu)建

研究不同無(wú)機(jī)鹽種類與不同極性的有機(jī)溶劑的成相情況。選取K2HPO4、Na2CO3、KH2PO4三種無(wú)機(jī)鹽與極性較大的甲醇、乙腈和丙酮，以及極性較小的二氯甲烷、石油醚和氯仿等有機(jī)溶劑形成三液相萃取體系。發(fā)現(xiàn)KH2PO4與任意2 種有機(jī)溶劑均不能形成三相鹽析體系，Na2CO3可以形成三相體系，但是成相效果差，鹽極易析出形成沉淀。而K2HPO4與上述有機(jī)溶劑均可形成三相鹽析萃取體系，故選擇K2HPO4作為后續(xù)研究鹽析體系的無(wú)機(jī)鹽。

1.3.2 萃取分離

干辣椒洗凈、烘干，粉碎后過(guò)45 目篩。向20 mL的具塞試管中加入0.5 g辣椒粉末和K2HPO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%、乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%、石油醚質(zhì)量分?jǐn)?shù)16%，加蒸餾水至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為100%，充分混勻，45 ℃超聲輔助萃取，待靜置三相分離后，分別讀取上、中相體積，并取兩相萃取液進(jìn)行HPLC分析測(cè)定含量，按下式計(jì)算提取量（Y）：

式中：C為辣椒紅色素或辣椒堿各單組分質(zhì)量濃度/（mg/mL）；V為目標(biāo)物所在相的體積/mL；M為辣椒粉末質(zhì)量/g。

1.3.3 單因素試驗(yàn)

考察超聲溫度（35、40、45、50、55 ℃）、超聲時(shí)間（5、10、15、20、25 min）和萃取方式（1：三相混勻后加入樣品；2：樣品和有機(jī)溶劑混勻后加入鹽；3：鹽和乙腈、樣品混勻后加入石油醚；4：鹽和石油醚、樣品混勻后加入乙腈）對(duì)體系中辣椒紅色素和辣椒堿分離萃取的影響，確定最優(yōu)萃取條件。

1.3.4 響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化萃取分離條件

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以辣椒紅色素提取量和辣椒堿提取量為指標(biāo)，進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化萃取分離工藝條件。試驗(yàn)因素及水平見(jiàn)表1。

表1 Box-Behnken試驗(yàn)因素與水平Table 1Factors and their levels used for Box-Behnken design

1.3.5 HPLC法測(cè)定萃取相中辣椒紅色素和辣椒堿濃度

1.3.5.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備

精密稱取辣椒紅色素各組分標(biāo)準(zhǔn)品和辣椒堿各組分標(biāo)準(zhǔn)品適量，分別用正己烷和乙腈溶解，制成1 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，并用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾后待用。

1.3.5.2 樣品溶液制備

準(zhǔn)確稱取辣椒樣品粉末0.5 g，按1.3.2節(jié)方法進(jìn)行萃取分離，分別取上相和中相萃取液過(guò)0.45 μm微孔濾膜，濾液取10 μL上機(jī)測(cè)定。

1.3.5.3 色譜條件

辣椒紅色素測(cè)定：ZORBAX RX-SIL色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：A為甲醇，B為乙腈，C為二氯甲烷，A-B-C（5∶10∶85，V/V），等度洗脫，流速1 mL/min；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：辣椒紅素為475 nm，β-胡蘿卜素和玉米黃質(zhì)素為450 nm；以峰面積外標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)品溶液與樣品溶液進(jìn)樣量均為10 μL。

辣椒堿測(cè)定：ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（70∶30，V/V），流速1 mL/min；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm；以峰面積外標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)品溶液與樣品溶液進(jìn)樣量均為10 μL。

1.4 數(shù)據(jù)處理

利用Origin軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)、圖形處理，采用Design-Expert V8.0.6軟件進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，利用SPSS 20.0軟件對(duì)33 種辣椒樣品中辣椒紅色素和辣椒堿含量進(jìn)行聚類分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 辣椒紅色素和辣椒堿的標(biāo)準(zhǔn)品曲線

按HPLC條件進(jìn)行測(cè)定，對(duì)一系列辣椒紅色素和辣椒堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行分析，以峰面積（Y）對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液系列質(zhì)量濃度（X）進(jìn)行回歸，β-胡蘿卜素、辣椒紅素和玉米黃質(zhì)素標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度與峰面積的線性回歸方程分別為Y=31 475X＋55.186（R2=0.998 1）、Y=26 296X＋198.22（R2=0.998 5）、Y=31 051X＋42.171（R2=0.996 3）；降二氫辣椒堿、辣椒堿和二氫辣椒堿標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度與峰面積的線性回歸方程分別為Y=2 629.6X＋10.989（R2=0.998 2）、Y=4 305.2X＋15.598（R2=0.997 9）、Y=1 293.5X＋7.835（R2=0.993 6），表明峰面積與待測(cè)物呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系[17]。

2.2 三相鹽析萃取體系的確立

2.2.1 K2HPO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)辣椒紅色素和辣椒堿分離的影響

圖1 K2HPO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)辣椒紅色素和辣椒堿分離的影響Fig.1 Effect of dipotassium phosphate concentration on the separation of capsanthin and capsaicin

當(dāng)乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%、石油醚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為16%時(shí)，考察K2HPO4不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)辣椒紅色素和辣椒堿分配行為及提取量的影響。由圖1可知，隨著K2HPO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增大，辣椒堿提取量逐步上升后略下降，這是因?yàn)殡S著K2HPO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增大，中相極性增大，辣椒堿富集量增大。辣椒紅色素提取量變化不大，在K2HPO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%時(shí)達(dá)到最大值。因此，選擇20%為三相體系的最佳K2HPO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

2.2.2 乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)辣椒紅色素和辣椒堿分離的影響

圖2 乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)辣椒紅色素和辣椒堿分離的影響Fig.2 Effect of acetonitrile concentration on the separation of capsanthin and capsaicin

當(dāng)體系中K2HPO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%、石油醚質(zhì)量分?jǐn)?shù)16%時(shí)，考察乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)辣椒紅色素和辣椒堿分離的影響，如圖2所示。由于辣椒紅色素類物質(zhì)極性較小而辣椒堿極性大[18]，乙腈極性比石油醚大[19]，所以辣椒堿幾乎全部集中于體系中相。隨著乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)增大，辣椒堿提取量先增大后下降，在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為22%時(shí)達(dá)到最大值。同時(shí)，辣椒紅色素提取量先升高后下降，在20%時(shí)取得辣椒紅色素提取量最大值，這是由于乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增大使得上相體積變小，故辣椒紅色素濃度變大。由于辣椒堿提取量在乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%～22%范圍內(nèi)變化不大，故體系選擇乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%進(jìn)行后續(xù)研究。

2.2.3 石油醚質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)辣椒紅色素和辣椒堿分離的影響

圖3 石油醚質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)辣椒紅色素和辣椒堿分離的影響Fig.3 Effect of petroleum ether concentration on the separation of capsanthin and capsaicin

固定K2HPO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%和乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%，考察石油醚質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)辣椒紅色素和辣椒堿提取量的影響。由圖3可知，辣椒堿提取量在石油醚質(zhì)量分?jǐn)?shù)先增大后減小，在20%時(shí)取得最大值，隨后下降，造成該現(xiàn)象的原因可能是隨著石油醚質(zhì)量分?jǐn)?shù)增大，中相辣椒堿濃度變大，但當(dāng)石油醚質(zhì)量分?jǐn)?shù)超過(guò)20%時(shí)，辣椒堿溶出已達(dá)到飽和，所以提取量降低。而辣椒紅色素提取量隨石油醚質(zhì)量分?jǐn)?shù)增大變化不大，但在石油醚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為16%時(shí)達(dá)到最高點(diǎn)，綜合考慮選擇石油醚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為16%。

2.3 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 超聲溫度對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物提取量的影響

圖4 超聲溫度對(duì)辣椒紅色素和辣椒堿分離的影響Fig.4 Effect of temperature on the separation of capsanthin and capsaicin

超聲輔助萃取分離辣椒紅色素和辣椒堿，既能使分子細(xì)胞壁破裂，加速溶劑的浸入，還能產(chǎn)生熱量，加速分子運(yùn)動(dòng)[20]。如圖4所示，隨著超聲溫度升高，辣椒紅色素和辣椒堿的提取量均呈上升趨勢(shì)，且在45 ℃時(shí)兩者提取量均較高，但溫度過(guò)高會(huì)影響色素和堿類物質(zhì)的穩(wěn)定性[21-22]，因此，采用45 ℃作為最佳超聲溫度。

2.3.2 超聲時(shí)間對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物提取量的影響

圖5 超聲時(shí)間對(duì)辣椒紅色素和辣椒堿分離的影響Fig.5 Effect of sonication time on the separation of capsanthin and capsaicin

如圖5所示，隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)，辣椒堿提取量先增大后減小，在5～10 min內(nèi)其提取量增長(zhǎng)迅速，10 min時(shí)辣椒堿提取量達(dá)到最大值，10～15 min提取量趨于穩(wěn)定而后下降。造成這種現(xiàn)象的原因是超聲時(shí)間過(guò)短，不能使物料內(nèi)部細(xì)胞壁破裂。但時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，超聲波的作用會(huì)使目標(biāo)物遭到破壞，也會(huì)使雜質(zhì)過(guò)多溶出。辣椒紅色素提取量在5～15 min范圍內(nèi)也呈現(xiàn)先增后減的趨勢(shì)，但整體范圍內(nèi)變化不大。在10 min時(shí)，辣椒紅色素提取量達(dá)到最大值，且10 min時(shí)辣椒堿提取量與最大值相差不大，故選擇10 min為最適超聲時(shí)間。

2.3.3 萃取方式對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物提取量的影響

圖6 萃取方式對(duì)辣椒紅色素和辣椒堿分離的影響Fig.6 Effects of mixing sequence on the separation of capsanthin and capsaicin

由圖6可知，不同萃取方式下對(duì)辣椒堿和辣椒紅色素提取量的影響不大。萃取方式2條件下辣椒紅色素和辣椒堿提取量均較高，這是因?yàn)闃悠放c有機(jī)溶劑的事先混合，使得目標(biāo)產(chǎn)物能較多地溶出，故選擇先將樣品粉末和乙腈石油醚混合后再加入K2HPO4進(jìn)行鹽析分離。

2.4 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

2.4.1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

運(yùn)用Design-Expert V8.0.6軟件程序?qū)Ρ?數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，擬合后得到超聲溫度、超聲時(shí)間、萃取方式對(duì)辣椒堿提取量和辣椒紅色素提取量的二次回歸模型分別為：辣椒紅色素提取量=0.26＋0.014A＋0.020B－6.400×10－3C＋5.750×10－4AB－0.020AC－2.250×10－3BC－0.042A2－0.02B2－6.453×10－3C2（R2=0.930 8）；辣椒堿提取量=1.56＋0.026A－9.575×10－3B＋0.044C＋59.400×10－3AB－0.054AC＋0.056BC－0.082A2－0.12B2－0.050C2（R2=0.987 0）。說(shuō)明模型擬合良好[23-24]。

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Experimental design and results for response surface analysis

2.4.2 方差分析及響應(yīng)面分析

表3 回歸統(tǒng)計(jì)分析Table 3 Analysis of variance for each term of the fitted regression equations

圖7 各因素交互作用對(duì)辣椒堿（a）和辣椒紅色素（b）提取量影響Fig.7 Response surface plots showing the interactive effects of various extraction conditions on the yields of capsaicin (a) and capsanthin (b)

如表3、圖7所示，響應(yīng)面圖可以直觀地評(píng)價(jià)萃取方式、超聲時(shí)間和超聲溫度間的交互作用及對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物提取量的影響，響應(yīng)面圖曲率越大，這2 個(gè)因素之間的差異就越顯著[25]。對(duì)于辣椒堿提取量模型，萃取方式的影響為極顯著，超聲溫度影響為顯著。同時(shí)，由F值的大小可以推斷，在所選擇的實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)，3 個(gè)因素對(duì)辣椒堿提取量影響的排序?yàn)檩腿》绞剑境暅囟龋境晻r(shí)間，而在辣椒紅色素模型中3 個(gè)影響因素排序?yàn)槌晻r(shí)間＞超聲溫度＞萃取方式。這表明方差分析結(jié)果與響應(yīng)面圖反映結(jié)果一致。

2.4.3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)Design-Expert軟件，對(duì)回歸方程進(jìn)行求解，預(yù)測(cè)出可同時(shí)保證辣椒堿和辣椒紅色素提取量較高的最佳提取條件：超聲溫度47.01 ℃、超聲時(shí)間12.57 min、萃取方式為1（三相溶劑混勻后加入樣品粉末）。此條件下辣椒堿和辣椒紅色素提取量可高達(dá)1.423 mg/g和0.274 mg/g，且模型可信度高?？紤]到實(shí)驗(yàn)條件的限制及操作的方便性，將各因素修正為超聲溫度45 ℃、超聲時(shí)間10 min、萃取方式采用三相溶劑混勻后加入樣品，經(jīng)3 次平行實(shí)驗(yàn)后，辣椒堿和辣椒紅色素提取量為1.412 mg/g和0.263 mg/g，與模型預(yù)測(cè)值無(wú)明顯差異。

2.5 辣椒紅色素和辣椒堿的HPLC測(cè)定

圖8 混合標(biāo)準(zhǔn)品和辣椒樣品的HPLC分析Fig.8 HPLC analysis of mixed standards and capsanthin and capsaicin from chili pepper samples

從圖8可以看出，經(jīng)響應(yīng)面優(yōu)化后的石油醚-乙腈-K2HPO4三相鹽析萃取體系萃取分離后，進(jìn)行HPLC分析。在體系上相，即辣椒紅色素相中沒(méi)有辣椒堿類物質(zhì)。同時(shí)在體系的中相，即辣椒堿相，也幾乎檢測(cè)不到辣椒紅色素的各組分物質(zhì)。表明該三相鹽析體系可用于同時(shí)萃取分離得到辣椒紅色素和辣椒堿。由圖8a、b可知，辣椒紅色素3 個(gè)組分根據(jù)出峰時(shí)間依次為β-胡蘿卜素、辣椒紅素和玉米黃質(zhì)素，樣品中辣椒紅色素各組分出峰時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品一致，樣品中β-胡蘿卜素和辣椒紅素峰形良好但由于2 種物質(zhì)極性相近，較難分離完全[26-27]。圖8d可以看出，辣椒堿各組分標(biāo)準(zhǔn)品從左到右依次為降二氫辣椒堿、辣椒堿和二氫辣椒堿，樣品中3 種辣椒堿單體組分出峰時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品各組分辣椒堿一致，且分離完全、峰形良好。

2.6 辣椒樣品辣椒紅色素和辣椒堿含量檢測(cè)結(jié)果與分析

2.6.1 辣椒樣品中辣椒紅色素和辣椒堿含量檢測(cè)結(jié)果

表4 辣椒樣品中辣椒紅色素和辣椒堿含量Table 4 Contents of capsanthin and capsaicin in chili peppers

如表4所示，辣椒紅色素含量范圍為0.011～0.686 mg/g，c126樣品含量最低；辣椒堿的含量范圍為0.030～4.705 mg/g，c31樣品含量最低。

2.6.2 33 種辣椒樣品中辣椒紅色素和辣椒堿含量的聚類分析

圖9 33 種辣椒樣品中辣椒紅色素（a）和辣椒堿（b）含量的聚類分析Fig.9 Cluster analysis of capsanthin (a) and capsaicin (b) contents in 33 varieties of chili pepper

對(duì)33 種辣椒樣品的辣椒紅色素和辣椒堿含量進(jìn)行聚類分析[28]，采用系統(tǒng)聚類，形成樹狀聚類圖。如圖9a所示，以辣椒紅色素含量為指標(biāo)，歐氏距離為5時(shí)，辣椒品種可以分為三大類。編號(hào)003A和s4的辣椒紅色素含量高，為第1類；c22、s3、c25、c3和005A1為第2類，辣椒紅色素含量在0.260～0.413 mg/g范圍內(nèi)；其余品種辣椒紅色素含量較低，歸為第3類。以辣椒堿含量為聚類變量（圖9b），當(dāng)歐氏距離為5時(shí)，辣椒品種也被分為三大類群。c100和c105的辣椒堿含量最高，聚為一類，分別為4.498 mg/g和4.705 mg/g；第2類（包括003A、c22、c126、c104、c27、y13-1、c3、005A1和s4）辣椒品種的辣椒堿含量平均為2.237 mg/g；第3類包含22 種辣椒品種，其辣椒堿含量均較低。

3 結(jié) 論

采用超聲輔助三相鹽析萃取體系對(duì)辣椒中的辣椒紅色素和辣椒堿進(jìn)行同時(shí)萃取分離，在構(gòu)建最優(yōu)鹽析體系組成的基礎(chǔ)上，考察萃取條件即超聲溫度、超聲時(shí)間和不同萃取方式對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物提取量的影響。運(yùn)用響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化工藝條件，獲得一種較優(yōu)的同時(shí)分離得到辣椒紅色素和辣椒堿的三相萃取方法[29-30]。

三相鹽析體系為44%蒸餾水-20% K2HPO4-20%乙腈-16%石油醚，萃取分離辣椒紅色素和辣椒堿最佳萃取工藝參數(shù)為超聲溫度45 ℃、超聲時(shí)間10 min、萃取方式采用三相溶劑混勻后加入樣品。萃取分離后，將兩萃取相目標(biāo)物經(jīng)高效液相色譜分析測(cè)定。在此條件下，辣椒紅色素和辣椒堿提取量均較高，分別為0.263 mg/g和1.412 mg/g。該法可作為一種溫和簡(jiǎn)便同時(shí)分離得到辣椒紅色素和辣椒堿的有效方法。采用此方法對(duì)33 種辣椒品種的辣椒紅色素和辣椒堿含量進(jìn)行聚類分析，可為今后從植物資源中提取辣椒紅色素和辣椒堿類物質(zhì)及辣椒優(yōu)質(zhì)品種的選擇提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。