方四廷
(弋陽縣人民醫(yī)院感染科 江西 上饒 334400)
活動(dòng)性結(jié)核病是臨床常見的傳染性疾病,患者處于活動(dòng)期,有結(jié)核桿菌排出現(xiàn)象?;颊咧饕锌人?、食欲不振、低熱、干咳等癥狀,具有強(qiáng)傳染性。隨著檢驗(yàn)技術(shù)的不斷進(jìn)步,臨床對(duì)活動(dòng)性結(jié)核病診斷方法也明顯增多,包括組織病理學(xué)檢查、抗酸染色、結(jié)核菌素試驗(yàn)、結(jié)核菌培養(yǎng)等[1]。結(jié)核菌培養(yǎng)結(jié)核病診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”,但是測(cè)試時(shí)間長(zhǎng)、檢出率極低,容易延誤病情。T-spot.TB 試驗(yàn)利用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)對(duì)特異性抗原進(jìn)行檢測(cè),可重復(fù)操作,大大提高了診斷效率。本文就結(jié)核菌培養(yǎng)、T-spot.TB 試驗(yàn)對(duì)活動(dòng)性結(jié)核病的診斷價(jià)值進(jìn)行分析。
將選取本院2019 年1 月—2020 年1 月收治的120 例活動(dòng)性結(jié)核病患者進(jìn)行觀察,其中男性患者89 例,女性患者31 例;年齡23 ~70 歲,平均年齡(47.7±5.3)歲;病程0.5 ~9 月,平均病程(5.6±0.9)月;所有患者均符合WHO 關(guān)于活動(dòng)性結(jié)核病診斷標(biāo)準(zhǔn),有結(jié)核親密接觸史,經(jīng)影像學(xué)檢查確診,本次研究獲得本院醫(yī)學(xué)倫理會(huì)審批,患者均知情同意。
結(jié)核菌培養(yǎng):采集患者晨起的第2 或3 口痰的痰液標(biāo)本3~5ml,放置于室溫后進(jìn)行堿處理,接種酸性改良羅氏培養(yǎng)基斜面,8周后觀察菌落生長(zhǎng)情況,菌落超過斜面面積的25%即為陽性。
T-spot.TB 試驗(yàn):采集外周血,采集量為8ml,離心后對(duì)單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行提取,洗滌后對(duì)細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行計(jì)算。結(jié)核特異性抗原PBMCs、ESAT-6 加入預(yù)包被抗體反應(yīng)孔孵育,時(shí)間為18h。向預(yù)包被抗體加入效應(yīng)T 淋巴細(xì)胞釋放因子,洗板后加入二抗,孵育1h 后洗板,加入顯色液,7Min 后用蒸餾水反應(yīng),Elispot進(jìn)行效應(yīng)T 細(xì)胞數(shù)量。陽性:(1)空白對(duì)照孔斑0 ~5 個(gè)點(diǎn),抗原B 或抗原A 孔斑點(diǎn)數(shù)-空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥6;(2)空白對(duì)照孔斑6 ~10 個(gè)點(diǎn),抗原B 或抗原A 孔斑點(diǎn)數(shù)/空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥2。
采用SPSS18.0 處理,計(jì)數(shù)資料用百分比(%)表示,經(jīng)χ2檢驗(yàn),P <0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
T-spot.TB 試驗(yàn)陽性率明顯高于結(jié)核菌培養(yǎng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05),見表1。
表1 兩種檢測(cè)技術(shù)結(jié)果比較[n(%)]
T-spot.TB 試驗(yàn)結(jié)果顯示活動(dòng)性結(jié)核病患者T 細(xì)胞斑點(diǎn)數(shù)的中位數(shù)是69.5(32.0,135.0),T-spot.TB 試驗(yàn)靈敏度、特異度、陰性預(yù)測(cè)值與陽性預(yù)測(cè)值均高于結(jié)核菌培養(yǎng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05),如表2。
表2 兩種檢測(cè)技術(shù)的診斷價(jià)值比較(%)
活動(dòng)性結(jié)核主要因感染結(jié)核分支桿菌引起,具有病程長(zhǎng)、傳染性強(qiáng)、病死率高的特點(diǎn),對(duì)患者及周圍密切接觸者的身心健康均有不良影響[2]。疾病發(fā)生后不僅會(huì)給患者造成持續(xù)不適感,使患者在工作以及生活中均受到影響,由于癥狀反復(fù)發(fā)作因此易導(dǎo)致患者出現(xiàn)負(fù)性情緒,同時(shí)由于結(jié)核分枝病毒具備傳染性,因此患者的照護(hù)者以及周圍人群均存在較大心理壓力,不愿意與患者接觸,周圍人群的疏遠(yuǎn)也會(huì)導(dǎo)致患者的情緒受到打擊,不利于患者生活質(zhì)量改善。因此為使患者的疾病得到有效控制,就需要盡早使疾病得到診斷,并為其開展積極治療。
結(jié)核菌培養(yǎng)出結(jié)核分枝桿菌陽性是臨床診斷結(jié)核病的金標(biāo)準(zhǔn),但是結(jié)核菌培養(yǎng)試驗(yàn)耗時(shí)較長(zhǎng),觀察時(shí)間至少為2 ~6 周,甚至2 個(gè)月,且受實(shí)驗(yàn)室條件、檢驗(yàn)人員技術(shù)、標(biāo)本采集質(zhì)量的影響陽性率較低,不利于結(jié)核病的及時(shí)診治[3]。
結(jié)核分枝桿菌基因中特殊的RDI 序列可生成結(jié)核特異性抗原CFP-10、ESAT-6,從而刺激T 淋巴細(xì)胞生成干致敏T 淋巴細(xì)胞、IFN-γ[4]。T-SPOT.TB 試驗(yàn)利用人體感染結(jié)核桿菌后會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞免疫這一原理,酶聯(lián)顯色后ELISPOTReader 分辨系統(tǒng)計(jì)算斑點(diǎn)數(shù)量,通過效應(yīng)T 細(xì)胞數(shù)量,判定是否感染結(jié)核分枝桿菌。斑點(diǎn)數(shù)量越多或者在短時(shí)間內(nèi)迅速增多,提示結(jié)核病的活動(dòng)程度越高,應(yīng)加大抗結(jié)核藥物使用劑量[5]。本文中T-SPOT.TB 試驗(yàn)陽性率達(dá)到90.%,且診斷特異性、靈敏度均高于結(jié)核菌培養(yǎng)試驗(yàn),大大提高了對(duì)結(jié)核病的準(zhǔn)確檢出率,試驗(yàn)時(shí)間僅需24h,可重復(fù)試驗(yàn),對(duì)實(shí)驗(yàn)室、樣本要求相對(duì)降低,可及時(shí)指導(dǎo)臨床進(jìn)行治療。
綜上所述,T-SPOT.TB 試驗(yàn)是現(xiàn)代免疫學(xué)、基因?qū)W發(fā)展的接觸產(chǎn)物,可快速、準(zhǔn)確進(jìn)行活動(dòng)性結(jié)核病診斷,相較傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)具有明顯優(yōu)勢(shì)。