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        WNT10B在肺鱗癌組織中表達(dá)升高

        2020-10-22 06:50:48顧藝荀徐興祥閔凌峰陳彥亮王霄霖
        基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床 2020年10期
        關(guān)鍵詞:鱗癌免疫組化染色

        路 琳,顧藝荀,徐興祥,閔凌峰,陳彥亮,王霄霖,陳 勇*

        (蘇北人民醫(yī)院 1.腫瘤科;3.呼吸與重癥內(nèi)科; 4.胸外科, 江蘇 揚(yáng)州 225001;2.大連醫(yī)科大學(xué), 遼寧 大連 116044)

        肺癌是全世界范圍內(nèi)發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤[1],肺癌組織學(xué)類型中肺鱗癌約占全部肺癌的30%。由于肺鱗癌的基因型更復(fù)雜、EGFR突變率低[2-3],靶向治療并沒有為肺鱗癌患者帶來治療療效上的突破[4]。WNT信號(hào)傳導(dǎo)途徑是由配體蛋白WNT和膜蛋白受體結(jié)合激發(fā)的一組多下游通道的信號(hào)傳導(dǎo)途徑,對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖分化、侵襲和凋亡起著重要作用。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種WNT蛋白,本研究通過檢測(cè)肺鱗癌患者腫瘤組織標(biāo)本中WNT10B的表達(dá)狀況,分析WNT10B與臨床病理特征之間的關(guān)系,分析WNT10B的表達(dá)與肺鱗癌患者預(yù)后的聯(lián)系。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 標(biāo)本來源:肺鱗癌標(biāo)本組織芯片(HLug-Squ150Sur-01)(上海芯超生物科技有限公司肺癌組織芯片庫(kù)),包含75例肺鱗癌組織及與之配對(duì)的癌旁正常肺組織,組織芯片的每個(gè)點(diǎn)都經(jīng)過病理診斷,手術(shù)時(shí)間為2004年7月至2007年11月,隨訪截至2012-07-31。所有患者術(shù)前均未接受放化療或其他抗腫瘤治療,所有臨床病理資料及隨訪數(shù)據(jù)均來自上海芯超生物科技有限公司?;颊咧心?0例,女5例。年齡36~78歲,中位年齡64歲,其中<70歲48例,≥70歲26例,無法判斷1例。T1期17例,T2期39例,T3期12例,T4期6例,無法判斷1例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例,無轉(zhuǎn)移40例,無法判斷5例。無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移73例,有轉(zhuǎn)移2例。組織學(xué)分級(jí)為Ⅰ級(jí)13例,Ⅱ級(jí)40例,Ⅲ級(jí)22例。根據(jù)UICC第7版TNM 分期標(biāo)準(zhǔn),Ⅰ期27例,Ⅱ~Ⅳ期46例,無法分期2例。

        1.1.2 試劑:小鼠抗人WNT10B 單克隆抗體(5A7)(Abcam公司),羊抗鼠HRP二抗及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。

        1.2 免疫組化染色檢測(cè)蛋白表達(dá)

        采用二步法進(jìn)行免疫組化染色,嚴(yán)格按照試劑操作說明進(jìn)行,組織芯片先經(jīng)脫蠟水化,經(jīng)乙二胺四乙酸(EDTA)抗原修復(fù)液修復(fù),一抗孵育(WNT10B鼠抗人單克隆抗體,1∶5 000稀釋),4 ℃過夜,加羊抗鼠HRP二抗,37 ℃孵育1 h, DAB顯色,蘇木精復(fù)染,梯度乙醇脫水后封片。WNT10B蛋白陽(yáng)性染色為細(xì)胞質(zhì)呈黃色至棕黃色。在雙盲情況下,由兩名病理科醫(yī)師對(duì)每個(gè)標(biāo)本進(jìn)行染色結(jié)果判斷及評(píng)分:細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃色至棕褐色顆粒狀物視為陽(yáng)性,未出現(xiàn)視為陰性。陽(yáng)性染色強(qiáng)度計(jì)分:無陽(yáng)性染色,弱陽(yáng)性(+);黃褐色,陽(yáng)性(++);深棕褐色,強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。陰性及弱陽(yáng)性表達(dá)納入低表達(dá)組;陽(yáng)性及強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)納入高表達(dá)組。

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

        采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)。Kaplan-Meier 生存分析和log-rank檢驗(yàn)以及Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析WNT10B蛋白表達(dá)與肺鱗癌預(yù)后的相關(guān)性。

        2 結(jié)果

        2.1 WNT10B在肺鱗癌組織中的表達(dá)

        整個(gè)組織芯片有5例癌組織脫片無法評(píng)價(jià),癌旁有1例組織脫片無法評(píng)價(jià),WNT10B主要表達(dá)于肺鱗癌細(xì)胞質(zhì)中,WNT10B在癌旁正常肺組織中低表達(dá)(圖1,2)。WNT10B在肺鱗癌組織的表達(dá)明顯高于癌旁正常肺組織(P<0.05)(表1)。

        表1 肺鱗癌與癌旁組織中WNT10B蛋白的表達(dá)Table 1 Expression of WNT10B protein in lung squamous cell carcinoma and adjacent tissues

        圖1 肺鱗癌組織芯片的HE及WNT10B免疫組化染色結(jié)果Fig 1 HE staining and WNT10B immunohistochemical staining of lung squamous cell carcinoma tissue chips

        from top to bottom were 0,+,++,+++圖2 肺鱗癌及癌旁正常組織中WNT10B的表達(dá)Fig 2 Expression of WNT10B in adjacent normal tissues and lung squamous cell carcinoma (×200)

        2.2 WNT10B表達(dá)與肺鱗癌患者臨床病理特征關(guān)系

        T3~T4期腫瘤的WNT10B表達(dá)顯著高于T1~T2期腫瘤 (P<0.05);WNT10B的表達(dá)與腫瘤組織的分化程度顯著相關(guān),分化越差,WNT10B表達(dá)越高 (P<0.05)(表2)。

        表2 WNT10B表達(dá)與肺鱗癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系Table 2 Relationship between WNT10B expression and clinicopathological characteristics of patients with lung squamous cell carcinoma

        2.3 WNT10B表達(dá)與肺鱗癌患者預(yù)后之間的關(guān)系

        癌組織中WNT10B低表達(dá)者預(yù)后顯著優(yōu)于WNT10B 高表達(dá)者(P<0.05)(圖3)。性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和WNT10B的表達(dá)是肺鱗癌的獨(dú)立預(yù)后影響因素(表3)。

        圖3 不同表達(dá)WNT10B水平肺鱗癌患者的生存曲線Table 3 Survival curves of patients with lung squamous cell carcinoma with different expression of WNT10B

        表3 Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)肺鱗癌預(yù)后相關(guān)因素Table 3 Cox proportional hazard model analyzes prognostic factors of lung squamous cell carcinoma

        3 討論

        WNT/β-catenin信號(hào)通路在生物體的發(fā)育中起重要作用[5],而異常激活與腫瘤的發(fā)生發(fā)展緊密相關(guān)[6]。WNT家族至少包括19種WNT蛋白,其中WNT10B在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用[7-11]。在胃癌中,抑制細(xì)胞WNT10B的表達(dá)導(dǎo)致了胃癌細(xì)胞的增殖侵襲能力下降[7]。在胰腺癌中,降低細(xì)胞WNT10B的表達(dá)能夠抑制胰腺癌細(xì)胞BxPC-3的侵襲和轉(zhuǎn)移[8]。在結(jié)直腸癌組織中WNT10B低表達(dá),WNT10B低表達(dá)患者的預(yù)后優(yōu)于WNT10B高表達(dá)患者[11]。在子宮內(nèi)膜癌中,癌組織WNT10B的表達(dá)較正常組織高,但是隨著組織學(xué)分化越來越差,WNT10B的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸降低,并且WNT10B高表達(dá)組患者的預(yù)后好于低表達(dá)組[12]。本研究運(yùn)用肺鱗癌組織芯片分析 WNT10B在肺鱗癌組織和癌旁組織的表達(dá)情況,結(jié)果表明WNT10B在肺鱗癌組織中高表達(dá),而在癌旁組織中低表達(dá),這一結(jié)果與既往研究結(jié)果一致[7-8]。通過臨床資料分析發(fā)現(xiàn),WNT10B高表達(dá)者T分期越晚,分化程度越差。既往研究顯示W(wǎng)NT10B還參與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[7, 11],但本研究未發(fā)現(xiàn)WNT10B的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),可能與病例數(shù)少以及部分?jǐn)?shù)據(jù)缺失有關(guān)。通過隨訪觀察,發(fā)現(xiàn)WNT10B表達(dá)和性別均是獨(dú)立的預(yù)后影響因素,但由于本組患者中僅有5例女性患者,所有本研究有關(guān)性別的結(jié)果還需要大樣本數(shù)據(jù)的進(jìn)一步的驗(yàn)證。本研究缺少肺部非腫瘤疾病的標(biāo)本,同時(shí)未進(jìn)行半定量分析,這些將會(huì)繼續(xù)予以改進(jìn)。

        綜上所述, WNT10B在肺鱗癌組織中表達(dá)增高,并與臨床病理因素及預(yù)后密切相關(guān),WNT10B有望成為肺鱗癌的一個(gè)新的腫瘤標(biāo)志物和預(yù)后指標(biāo)。同時(shí),WNT10B在肺鱗癌中發(fā)生發(fā)展的具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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