河南省駐馬店
市食品藥品檢驗(yàn)所(463000)葉英劍 李啟彬 劉園園
安神補(bǔ)心丸是對心血不足、虛火內(nèi)擾所引發(fā)的頭暈耳鳴、心悸失眠進(jìn)行治療的常用中成藥丸劑,其可發(fā)揮有效的養(yǎng)心安神作用。有不法分子為獲取高額利潤,開始應(yīng)用第一代H1受體拮抗劑非法加入到安神補(bǔ)心丸中,由于氯苯那敏的購買成本低,因此成為主要的加入藥物[1]。馬來酸氯苯那敏也被稱之為撲爾敏,其不僅可拮抗H1受體從而達(dá)到抗過敏功效,同時還可對中樞神經(jīng)起到一定抑制作用,由此會導(dǎo)致困倦等不良反應(yīng)[2]。本次研究應(yīng)用快速液相-質(zhì)譜串聯(lián)儀開展一級質(zhì)譜掃描,取高響應(yīng)色譜峰經(jīng)由氣相-質(zhì)譜庫開展檢索,對其包含的成分進(jìn)行確認(rèn),與對照品溶液與供試品溶液進(jìn)行比較,探討液相-質(zhì)譜串聯(lián)法檢測安神補(bǔ)心丸中H1抗組胺藥與鎮(zhèn)靜催眠藥的效果。
1.1 研究材料 研究所應(yīng)用的儀器設(shè)備包括Super Sminon5830 Tmpsen快速液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)儀,Super Sminon8255N氣相色譜-質(zhì)譜儀,上海諾威科設(shè)備有限公司生產(chǎn)的DHK單槽式超聲波清洗儀,廣州愛華精密儀器有限公司生產(chǎn)的分析天平。研究所應(yīng)用的試劑包括去離子水、乙腈(色譜純),其余試劑為分析純,生產(chǎn)廠家為江蘇諾美化學(xué)試劑廠。由中國藥品生物制品檢定所取得地西泮對照品(批號172157-2 0 1 8 6 4)、艾司唑侖對照品(批號186059-201820)、氯硝西泮對照品(批號172281-201836)以及馬來酸氯苯那敏對照品(批號193346-201844)。安神補(bǔ)心丸分別購自六個廠家,分別為蘭州佛慈制藥股份有限公司(批號:H2006847)、上海和黃藥業(yè)(批號:H20036541)、廣州藍(lán)天制藥有限責(zé)任公司(批號:H20096651)、江蘇美林制藥集團(tuán)(批號:H20084785)、山西安繼堂制藥有限公司(批號:H20125645)、北京天倫制藥(批號:H20080032)。全部藥物均從藥店隨機(jī)購買。
1.2 研究方法 快速液相色譜所應(yīng)用的色譜柱為ZORBAX MED-C18色譜柱,選用乙酸銨溶液與乙腈混合液作為流動相,二者之間的比例為50∶50,體積流量控制為每分鐘0.3mL,進(jìn)樣量控制為10μL,柱溫為室溫。串聯(lián)質(zhì)譜所應(yīng)用的干燥氣流量控制為每分鐘10L,溫度控制為325℃;霧化氣壓力控制為20psi,鞘流氣流量控制為每分鐘10L,溫度控制為400℃,毛細(xì)管電壓為4000v。一級質(zhì)譜實(shí)施50~1000m/z范圍全掃描。具體掃描條件如附表。
在進(jìn)行混合對照品溶液配制時,分別選取地西泮、艾司唑侖、氯硝西泮對照品,加入流動相,將其進(jìn)行溶解搖勻,然后使其濃度保持為5ng/mL。在對供試品溶液進(jìn)行配制時,采用不同廠家生產(chǎn)的安神補(bǔ)心丸各3丸,將藥物放入研磨中碾碎,然后放入到量瓶中,量瓶容積為100mL,加入60mL流動相,放置在渦旋機(jī)上開展5min渦旋,渦旋完成后放入到超聲機(jī)中進(jìn)行5min超聲處理,冷卻后采用流動相加入至刻度,搖勻后過濾。
干擾試驗(yàn)的開展方法,通過將對照品溶液、供試品溶液進(jìn)行混合后,各進(jìn)樣10μL,供試品色譜中全部未出現(xiàn)和混合對照品中所具備的對照品色譜保留時間一致的色譜峰。但有一批號的供試品溶液在接受一級質(zhì)譜掃描時,掃描圖像中有未知成分色譜峰出現(xiàn),且其具備較高的響應(yīng)度,如附圖。通過在氣相色譜-質(zhì)譜庫中進(jìn)行檢索,同時應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)開展確證,結(jié)果顯示最高峰物質(zhì)為氯苯那敏。
附表 串聯(lián)質(zhì)譜工作條件
附圖 出現(xiàn)高響應(yīng)度未知成分色譜峰的供試品溶液的快速液相-質(zhì)譜總離子流圖
氣相色譜-質(zhì)譜檢查:所選用的毛細(xì)管柱型號為DHK-5kk型,長度為28m,內(nèi)徑為0.25mm,固定液膜厚度確定為0.22μm,體積流量控制為每分鐘1.0mL。將進(jìn)樣口的溫度進(jìn)行調(diào)整,使其保持在280℃,接口的溫度保持在250℃。離子源、四級桿的溫度分別為245℃以及170℃,電子能量控制在80eV;在開展檢查的過程中,初始溫度設(shè)置為45℃,然后每分鐘將溫度升高10℃,直至其達(dá)到225℃,維持時間總共為16min,進(jìn)樣量控制在1μL。
在對供試品溶液進(jìn)行配置時,配置方法為采集液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測出的未知成分峰樣品3丸,將藥物放入研磨中碾碎,然后放入到量瓶中,量瓶容積為100mL,加入60mL甲醇,放置在渦旋機(jī)上開展5min渦旋,渦旋完成后放入到超聲機(jī)中進(jìn)行5min超聲處理,冷卻后采用流動相加入至刻度,搖勻后過濾。在對對照品溶液進(jìn)行配置時,采用馬來酸氯苯那敏對照品,放入到量瓶中,然后向量瓶中加入甲醇使馬來酸氯苯那敏對照品被溶解,將其配置成濃度為60μg/mL的溶液。
有資料報道稱,中成藥成分和輔料的種類較多,因此為了將其他成分和輔料對待檢測物質(zhì)檢測結(jié)果造成的干擾降低,就需要應(yīng)用有機(jī)溶劑開展多步萃取提取[3]。但對于部分制劑而言,其所具備的成分已經(jīng)十分復(fù)雜,同時質(zhì)譜串聯(lián)儀所具備的敏感性極高,因此若開展多步萃取提取,則會導(dǎo)致出現(xiàn)數(shù)量眾多的有機(jī)溶劑峰,從而干擾檢測工作的順利開展,使儀器的損耗程度加重,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的過程變得更為繁瑣,需耗費(fèi)更長的試驗(yàn)時間[4]。而對儀器檢測是否能夠成功造成影響的主要因素為前處理工作是否有效,本研究通過將液質(zhì)串聯(lián)掃描和氣質(zhì)聯(lián)合應(yīng)用,從而有效確定目標(biāo)可測物,降低了供試品溶液的配置難度。
通過本次的研究可知,部分廠家生產(chǎn)的安神補(bǔ)心丸中出現(xiàn)了非法摻偽的情況,通過對NIST譜庫開展檢索,結(jié)果顯示所摻雜的物質(zhì)為氯苯那敏。通過對對照品溶液中氯苯那敏峰和供試品溶液中相應(yīng)峰的碎片所具備的質(zhì)量數(shù)和豐度開展比較,結(jié)果顯示供試品溶液中馬來酸氯苯那敏具備較高的含量,通過開展計算可知,每丸藥物中的馬來酸氯苯那敏含量達(dá)到1.92mg。此外,通過本次研究結(jié)果可知,在部分中成藥物中,有H1抗組胺類藥物被摻雜其中,同時摻雜量較高,其屬于不法分子為獲取利益而為之。因此為保障用藥安全,就需要對中成藥物中化學(xué)藥品的添加情況開展更大力度的檢測工作,從而使中成藥物中的違法添加化學(xué)藥品被有效檢出。建議《中國藥典》等相關(guān)規(guī)章制度中,需要對中成藥物中化學(xué)藥品的添加種類、添加量進(jìn)行明確規(guī)定和限制,由此保障中成藥物在發(fā)揮應(yīng)有藥用價值的同時,用藥安全性也可得到保證。
綜上所述,液相-質(zhì)譜串聯(lián)法可有效檢測安神補(bǔ)心丸中H1抗組胺藥與鎮(zhèn)靜催眠藥加入量。