吳增波， 秘雙燕， 晏燕**

(1.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院， 四川 南充 637000； 2.珠海拜博口腔醫(yī)院， 廣東 珠海 519000)

鱗狀細(xì)胞癌又稱為表皮癌，是發(fā)生在表皮或附屬器細(xì)胞的惡性腫瘤，且癌細(xì)胞具有不同程度角化[1]。臨床研究表明鱗狀細(xì)胞癌好發(fā)于上皮覆蓋部位，如口腔、皮膚、陰道及子宮等部位[2]。國(guó)內(nèi)學(xué)者研究表明，鱗狀細(xì)胞癌與種族有關(guān)，且免疫抑制者發(fā)生率亦相對(duì)較高[3]。近年來(lái)，口腔鱗癌發(fā)生率呈上升趨勢(shì)，影響患者的健康和生活。目前，臨床上常見(jiàn)的口腔癌包括舌癌、頜骨癌及口咽癌等，且多數(shù)患者屬于鱗狀上皮細(xì)胞癌，患者發(fā)病早期臨床癥狀缺乏典型性，導(dǎo)致臨床診斷難度較大[4]。口腔鱗癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素過(guò)程，常受到細(xì)胞因子的調(diào)控[5]。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)是細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中重要組成部分，主要由巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞因子產(chǎn)生，屬于是一種促炎細(xì)胞因子，能直接參與正常炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)[6]，但是臨床上TNF-α在口腔鱗癌中的表達(dá)及價(jià)值研究較少。因此，本研究以口腔鱗癌患者作為對(duì)象，探討TNF-α在口腔鱗癌組織中的表達(dá)及臨床意義，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1標(biāo)本來(lái)源 選擇2017年5月—2019年4月收治的口腔鱗癌患者，要求符合口腔鱗癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]且經(jīng)病理組織檢查確診，完成TNF-α檢查適應(yīng)癥且均可耐受。排除合并其他部位惡性腫瘤、入院資料不全者或伴有自身免疫系統(tǒng)疾病者，排除合并肝腎異常、精神異常或給予放化療者。共納入患者78例，男48例、女30例，年齡36～79歲、平均(57.00±6.00)歲，舌癌24例、牙齦癌22例、口底癌17例及頰癌25例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移49例、未轉(zhuǎn)移27例，高分化32例、中分化27例及低分化17例，臨床分期Ⅰ～Ⅱ期48例、Ⅲ～Ⅳ期28例。所有患者入院均行手術(shù)治療，取癌組織(78份病灶標(biāo)本)及癌旁組織(78份癌旁組織標(biāo)本)(距離癌組織≥3 cm)作為標(biāo)本。

1.1.2主要試劑和儀器 0.25%胰蛋白酶購(gòu)自美國(guó)Gibco公司，胎牛血清、TNF-α兔抗人單克隆抗體及TNF-α兔抗人二抗購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司，甲醇雙氧水和磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffer saline，PBS)購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司，超凈工作臺(tái)購(gòu)自蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司，酶標(biāo)儀和免疫組織化學(xué)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司。

1.2 方法

1.2.1檢測(cè)TNF-α的陽(yáng)性表達(dá) 向制備的標(biāo)本切片中加入濃度3%甲醇雙氧水、持續(xù)處理10 min封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，PBS連續(xù)洗滌5 min，連續(xù)3次；加入PBS調(diào)整整體溶液pH為6.0，加檸檬酸鹽緩沖液，緩慢加熱，完成缺損蛋白修復(fù)。向獲得的標(biāo)本中加入TNF-α兔抗人單克隆抗體，工作濃度為1 ∶100，抗原熱修復(fù)，4 ℃過(guò)夜，加TNF-α兔抗人二抗，常溫孵育10 min，利用二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine，DAB)顯色后進(jìn)行蘇木素染色，利用中性樹膠常規(guī)封固；免疫組織化學(xué)染色下隨機(jī)取10個(gè)非重疊視野，計(jì)算細(xì)胞陽(yáng)性比例[8]。

1.2.2臨床資料 收集患者性別、年齡，腫瘤直徑、病理類型、分化程度，腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床資料。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 18.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料采用n(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Logistic分析TNF-α表達(dá)的影響因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TNF-α表達(dá)

免疫組織化學(xué)顯示，癌組織中TNF-α陽(yáng)性主要分布在細(xì)胞的胞質(zhì)，少數(shù)包膜亦有表達(dá)，呈棕黃色/棕褐色，細(xì)胞核內(nèi)無(wú)表達(dá)；癌旁組織中TNF-α陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)較少或無(wú)表達(dá)(圖1)?？谇击[癌組織TNF-α陽(yáng)性表達(dá)率57.69%(45/78)高于癌旁組織和12.82%(10/78)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.942，P=0.025)。

癌旁組織 癌組織圖1 口腔鱗癌患者癌組織及癌旁組織中TNF-α表達(dá)(免疫組織化學(xué)，×100)Fig.1 Expression of TNF-α in different tissues in oral squamous cell carcinoma(immunochemistry，×100)

2.2 TNF-α表達(dá)與臨床病理特征

口腔鱗癌患者癌組織中TNF-α的陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤直徑、分化程度、分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與性別、年齡及病理類型差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同臨床病理特征患者組織中TNF-α表達(dá)Tab.1 Comparison of TNF-α expression in tissues of patients with different clinicopathological features

2.3 Logistic回歸分析口腔鱗癌組織TNF-α表達(dá)的影響因素

以口腔鱗癌組織中TNF-α陽(yáng)性表達(dá)作為因變量，以腫瘤直徑、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的因素作為自變量，進(jìn)行多因素Logistic分析。結(jié)果表明，腫瘤直徑、分化程度、分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是口腔鱗癌組織TNF-α陽(yáng)性表達(dá)的影響因素(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 口腔鱗癌組織中TNF-α陽(yáng)性表達(dá)的多因素Logistic分析Tab.2 Multivariate Logistic analysis of positive expression of TNF-α in oral squamous cell carcinoma

3 討論

口腔鱗癌是臨床上常見(jiàn)的惡性腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展多涉及腫瘤細(xì)胞自身與宿主之間錯(cuò)綜復(fù)雜的關(guān)系，亦受到多種細(xì)胞因子調(diào)控[9-10]。臨床研究表明，心血管的形成在細(xì)胞組織、組織結(jié)構(gòu)及功能上存在明顯的差異性，能直接參與疾病的發(fā)展、發(fā)展[11-12]。TNF-α屬于是一種Ⅱ型跨膜蛋白，通常由活化的單核巨噬細(xì)胞分泌產(chǎn)生，并形成多多功能細(xì)胞因子，廣泛存在于人體組織中[13-14]。臨床研究表明，TNF-α能直接參與口腔鱗癌的發(fā)生[15-16]。本研究中，口腔鱗癌組織TNF-α陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。免疫組化顯示：TNF-α陽(yáng)性主要分布在細(xì)胞的胞質(zhì)，少數(shù)包膜亦有表達(dá)，且呈棕黃色/棕褐色，細(xì)胞核內(nèi)無(wú)表達(dá)；癌旁組織中TNF-α陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)較少或無(wú)表達(dá)，說(shuō)明TNF-α在口腔鱗癌組織中呈高表達(dá)，在疾病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用。

既往研究表明，TNF-α主要由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，是一種多肽細(xì)胞因子，能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，發(fā)揮炎癥介質(zhì)、免疫調(diào)節(jié)作用[17]。同時(shí)，TNF-α亦具有腫瘤細(xì)胞毒作用，其表達(dá)水平能反映疾病嚴(yán)重程度[18]。國(guó)內(nèi)學(xué)者進(jìn)行的研究結(jié)果表明，TNF-α在在前列腺癌、腎癌及卵巢癌等腫瘤組織中呈高表達(dá)，能通過(guò)多種機(jī)制參與其發(fā)生、發(fā)展。臨床研究表明，在惡性腫瘤組織中浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞中TNF-α亦呈高表達(dá)，能發(fā)揮拮抗外源性TNF-α的細(xì)胞毒性，是腫瘤組織產(chǎn)生內(nèi)源性TNF-α生物學(xué)特點(diǎn)、外源性TNF-α的重要差異原因[19]。同時(shí)，內(nèi)源性TNF-α具有拮抗由白細(xì)胞產(chǎn)生的外源性TNF-α的細(xì)胞毒性，發(fā)揮抵抗化療等作用[20]。TNF-α在口腔鱗癌轉(zhuǎn)移、生長(zhǎng)中機(jī)體機(jī)制如下：(1)TNF-α與腫瘤免疫有關(guān)。對(duì)于口腔鱗癌患者持續(xù)的應(yīng)激反應(yīng)能引起機(jī)體免疫紊亂，造成TNF-α水平持續(xù)升高，從而能抑制IgG、IgM的產(chǎn)生，影響機(jī)體T淋巴細(xì)胞的分化；(2)TNF-α能直接參與腫瘤血管的生成，能從宿主中向腫瘤細(xì)胞提供更多的氧與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，為腫瘤的生長(zhǎng)創(chuàng)造條件；(3)TNF-α能與腫瘤中的巨噬細(xì)胞相互作用，從而能產(chǎn)生更多的TNF-α并形成惡性循環(huán)[21]。從本研究結(jié)果看出，口腔癌組織中TNF-α檢驗(yàn)值與口腔癌患者的腫瘤直徑、分化程度、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)，進(jìn)一步說(shuō)明TNF-α在口腔鱗癌組織中呈高表達(dá)，其表達(dá)水平能反映患者疾病嚴(yán)重程度。因此，加強(qiáng)口腔鱗癌患者TNF-α動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)可幫助患者確診，指導(dǎo)臨床治療，亦可評(píng)估患者預(yù)后。

綜上所述，TNF-α檢驗(yàn)值在口腔鱗癌組織中呈高表達(dá)，其表達(dá)水平能反映患者疾病嚴(yán)重程度，能指導(dǎo)臨床治療，有望成為口腔鱗癌治療新靶點(diǎn)。