陳華　關(guān)穎麗

【摘要】 目的：分析比較不同提取方式對(duì)刺五加嫩葉中黃酮類成分含量的影響.方法：以刺五加嫩葉為原料，用微波提取法和超聲提取法分別提取其中總黃酮，并利用HPLC法測(cè)定其含量.結(jié)果：超聲提取法所得蘆丁的含量為0.3905mg/g，微波提取所得蘆丁的含量為0.3822mg/g.結(jié)論：超聲提取法更有利于蘆丁的提取，本方法操作簡(jiǎn)便易行、準(zhǔn)確.

【關(guān)鍵詞】 刺五加嫩葉;不同提取方法;蘆丁

【中圖分類號(hào)】R9 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號(hào)】1005-0019（2020）12-099-02

本文旨在利用HPLC法對(duì)刺五加嫩葉中總黃酮的含量進(jìn)行測(cè)定，并比較不同提取方式對(duì)其含量的影響，為此后進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)刺五加嫩葉的藥用價(jià)值奠定基礎(chǔ)[1]。

1 材料、儀器和試劑

刺五加，采自吉林省通化市地區(qū)，摘取刺五加嫩葉部分，粉碎，備用。

Agilent-G1322A型高效液相色譜儀，ACStation色譜工作站（華譜科儀北京科技有限公司）;JA2003P電子分析天平（上海越平科學(xué)儀器有限公司）; KQ-500超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;G70D.20CNIP-D2型微波儀（廣東蘭仕-微波生活電器制造有限公司）等。

蘆丁對(duì)照品（購(gòu)置國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)F20090702，純度98%）;95%乙醇;石油醚;水為娃哈哈純凈水;甲醇;乙腈。所用試劑為分析純或色譜純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters Symmetry-C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）;流動(dòng)相：乙腈-0.3%磷酸（17：83），流速：0.8 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)：300nm;柱溫：常溫;進(jìn)樣量：20μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱定蘆丁對(duì)照品粉末3.3mg，加入合適量甲醇，制備成濃度為0.1042mg·mL-1的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，備用。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 微波提取[2]

精密稱取2g刺五加嫩葉，浸泡于石油醚中，室溫下靜置2h，過(guò)濾，濾去浸提液，重復(fù)操作數(shù)次，至浸提液無(wú)色以除去葉綠素。將處理后的藥材置于通風(fēng)處干燥后，加入60mL 70%乙醇，放入微波爐中，微波功率為500 W，提取時(shí)間為65s，取出放至室溫，定容至50mL，備用。

2.3.2 超聲提取[3]

精密稱定1g刺五加嫩葉，加入10mL甲醇溶液浸泡30min，加甲醇溶液定容至50mL。精密稱定，記錄質(zhì)量。60℃超聲提取兩次，每次30min，抽濾，合并濾液，稱重，加入甲醇溶液至超聲前的質(zhì)量，備用。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取上述對(duì)照品溶液，依照上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣量依次為4μL、8μL、10μL、15μL、20μL，得色譜圖。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線。所得回歸方程如下：y=14.909x-29.303，R=0.9997。研究表明，蘆丁在4.168×10-4mg ～ 2.084×10-3mg范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液，連續(xù)分別進(jìn)樣5次，進(jìn)樣量為10μL，記錄峰面積，測(cè)定其峰面積的RSD值為2.94%。結(jié)果表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別精密吸取兩種方法制備的供試品溶液，分別于0、2、4、8、12h的時(shí)間間隔，進(jìn)樣20μL，記錄測(cè)定出的峰面積，據(jù)此測(cè)定RSD值，計(jì)算得出超聲提取的RSD值為2.82%，微波提取的RSD值為1.14%，說(shuō)明在12小時(shí)內(nèi)供試品溶液的穩(wěn)定性較好。

2.7 加樣回收試驗(yàn)

2.7.1 微波提取法加樣回收試驗(yàn)

分別精密稱取6份已知含量的刺五加嫩葉粉末各2.0g，精密加入蘆丁對(duì)照品溶液，根據(jù)2.3.1項(xiàng)下制備供試品溶液，得色譜圖，并據(jù)此計(jì)算加樣回收率。得出微波提取法所得蘆丁的平均回收率為98.2%，RSD值為2.21%，結(jié)果表明加樣回收良好。

2.7.2 超聲提取法加樣回收試驗(yàn)

根據(jù)2.7.1項(xiàng)及2.3.2項(xiàng)下制備供試品溶液，得出超聲提取法所得蘆丁的平均回收率為98.5%，RSD值為2.10%，結(jié)果表明加樣回收良好。

2.8 樣品含量測(cè)定

分別精密吸取微波提取法和超聲提取法制備的供試品溶液，各20μL，進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，得色譜圖，計(jì)算峰面積，得出樣品含量。其中保留時(shí)間在19min左右的為蘆丁的峰信號(hào)。如圖1～3所示。

3 結(jié)果

微波提取法中測(cè)得刺五加嫩葉中蘆丁的含量為0.3822mg/g，超聲提取法中測(cè)得刺五加嫩葉中蘆丁的含量為0.3905mg/g。

4 討論

刺五加嫩葉中黃酮類成份蘆丁的提取方式有較多，本文主要研究了超聲提取法和微波提取法這兩種方法對(duì)提取刺五加嫩葉中蘆丁含量的影響。對(duì)比兩種方法的提取效果，微波提取法相較超聲提取法省時(shí)，但是通過(guò)數(shù)據(jù)顯示超聲提取法提取的蘆丁含量較高，微波提取法提取的蘆丁含量較低。因此綜合各因素，建議采用超聲提取法作為刺五加嫩葉中蘆丁提取的方法。

參考文獻(xiàn)

[1]白雪，胡文忠，姜愛(ài)麗，等.刺五加活性成分的研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技，2016，4（37）：378-381

[2]劉忠英，晏國(guó)全，胡秀麗，等.中藥刺五加中總皂苷的微波輔助提取方法研究[J].藥物分析雜志，2007，27（1）：25-28.

[3]羅虎捷，楊宜婷，黃壽根，等.超聲提取法與索氏提取法提取陳皮黃酮類有效成分的分析比較[J].中藥材，2016， 39（2）：371-374.

基金項(xiàng)目：吉林省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)項(xiàng)目（201710202093）

通訊作者：關(guān)穎麗（1974-9），女，漢族，吉林通化人，副教授，碩士，主要從事中藥化學(xué)成分的活性研究，郵編134002。