師振予　郭亦杰　曾嶸　郭建生　李鑫

〔摘要〕 目的 建立腰椎間盤突出癥（lumbar disc herniation，LDH）大鼠模型，對(duì)建模后不同時(shí)間點(diǎn)模型效果進(jìn)行動(dòng)態(tài)比較以期發(fā)現(xiàn)建模后的最佳實(shí)驗(yàn)節(jié)點(diǎn)。方法 將48只Sprague-Dawley（SD）大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（假手術(shù)組）、模型組，采用大鼠自體髓核移植法建立LDH大鼠模型。造模術(shù)后于不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)（第7、14、21、28天）觀察動(dòng)物行為狀態(tài)并隨機(jī)處死動(dòng)物后進(jìn)行血清學(xué)和病理組織學(xué)檢查。通過HE染色觀察大鼠神經(jīng)組織病理學(xué)的改變，采用ELISA法檢測血清腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平。結(jié)果 （1）造模術(shù)后模型組和對(duì)照組（假手術(shù)組）大鼠均有明顯的左后肢無力、跛行癥狀。術(shù)后第7天開始，對(duì)照組癥狀有恢復(fù)的趨勢(shì)，并于第14天后基本恢復(fù)正常;模型組癥狀持續(xù)存在至術(shù)后第28天有好轉(zhuǎn)趨勢(shì)。（2）術(shù)后第7天對(duì)照組（假手術(shù)組）神經(jīng)組織可見出血及炎癥細(xì)胞浸潤，但無神經(jīng)損傷表現(xiàn);模型組除可見出血及炎癥細(xì)胞浸潤還有神經(jīng)受壓表現(xiàn)。術(shù)后第14天開始對(duì)照組出血及炎癥細(xì)胞浸潤明顯好轉(zhuǎn)并于術(shù)后第21天基本恢復(fù)正常;而模型組術(shù)后第21天仍可見明顯炎癥細(xì)胞浸潤、出現(xiàn)粘連及纖維化表現(xiàn)，并于術(shù)后第28天出現(xiàn)較明顯的纖維化表現(xiàn)。（3）對(duì)照組大鼠TNF-α水平隨時(shí)間進(jìn)行明顯下降。與對(duì)照組比較，模型組血清TNF-α水平在術(shù)后各個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)均顯著升高（P<0.05）。結(jié)論 采用自體髓核移植法能有效地模擬建立LDH模型。造模術(shù)后第21天對(duì)照組基本恢復(fù)正常而模型組行為學(xué)表現(xiàn)、病理學(xué)檢查及血清TNF-α水平與對(duì)照組比較均有明顯差異，而在術(shù)后第21天之后模型組有恢復(fù)的趨勢(shì)，說明造模術(shù)后第21天是比較合適的實(shí)驗(yàn)時(shí)間節(jié)點(diǎn)。

〔關(guān)鍵詞〕 腰椎間盤突出癥;大鼠模型;時(shí)間節(jié)點(diǎn);腫瘤壞死因子-α

〔中圖分類號(hào)〕R331;R681.5+3? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2020.01.007

〔Abstract〕 Objective To establish a rat model of lumbar disc herniation （LDH） and dynamically compare the effects of the models at different time points after modeling in order to find the best experimental node after modeling. Methods A total of 48 Sprague-Dawley （SD） rats were randomly divided into a control group （a sham operation group） and a model group. LDH rat model was established by autologous nucleus pulposus transplantation in rats. After modeling， the behavioral status of the animals was observed at different time points （days 7， 14， 21， and 28）， and the animals were randomly sacrificed for serological and pathological examination. The pathological changes of the nerve tissue in rats were observed by HE staining， and the serum tumor necrosis factor-α （TNF-α） levels were measured by ELISA. Results （1） After modeling， the rats in the model group and the control group （the sham operation group） had obvious symptoms of weakness and lameness in the left hind limb. Starting from the 7th day after surgery， the symptoms in the control group showed a tendency to recover， and basically returned to normal after the 14th day. The symptoms in the model group continued to persist until the 28th day after surgery. （2） In the control group （the sham operation group）， bleeding and inflammatory cell infiltration were seen in the control group （the sham operation group） on the 7th day after the operation， but no nerve damage was observed; in the model group， in addition to bleeding and inflammatory cell infiltration， there was nerve compression. On the 14th day after the operation， bleeding and inflammatory cell infiltration in the control group improved significantly and returned to normal on the 21st day after operation; while in the model group， obvious inflammatory cell infiltration， adhesion and fibrosis appeared on the 21st day after operation. On the 28th day after surgery， more obvious fibrosis appeared. （3） Serum TNF-α in the control group decreased significantly over time. Compared with the control group， serum TNF-α level of model group was significantly increased on each time points after modeling （P<0.05）. Conclusion The adoption of autologous nucleus pulposus transplantation can effectively simulate the establishment of LDH model. The control group returned to normal on the 21st day after modeling， and the behavioral performance， pathological examination， and serum TNF-α levels of the model group were significantly different from those of the control group. However， the model group recovered after 21st day， the trend indicates that the 21st day after modeling is a more appropriate experimental time point.

〔Keywords〕 lumbar disc herniation; rat model; time point; tumor necrosis factor-α

腰椎間盤突出癥（lumbar disc herniation，LDH）是一種發(fā)病率高且嚴(yán)重影響中老年人健康和生活質(zhì)量的疾病[1]，目前本病發(fā)生發(fā)展的生物學(xué)機(jī)制尚不明確。要探討治療LDH藥物的作用和作用機(jī)制，復(fù)制與選擇與臨床相符合的動(dòng)物模型至關(guān)重要。由于人類LDH主要是自發(fā)性疾病，是長期受到應(yīng)力損傷或由于椎間盤退化，椎間盤細(xì)胞內(nèi)環(huán)境變化后所逐漸發(fā)展起來的[2]。因此，運(yùn)用損傷性方法建立動(dòng)物模型來探討治療LDH藥物療效與機(jī)制的研究在過去十余年中并未取得十分突出的進(jìn)展。不過由于要獲得人類退化的椎間盤組織十分困難，同時(shí)在體外研究中也幾乎不可能獲得正常的人類椎間盤組織作為對(duì)照，因此，盡管存在一些限制，動(dòng)物模型系統(tǒng)仍然是研究

LDH不可或缺的途徑。本實(shí)驗(yàn)研究旨在建立一種合適的LDH動(dòng)物模型，并對(duì)建模后不同時(shí)間點(diǎn)模型效果進(jìn)行動(dòng)態(tài)比較，以期發(fā)現(xiàn)建模后的最佳實(shí)驗(yàn)節(jié)點(diǎn)。

1 材料

1.1? 動(dòng)物

SPF級(jí)Sprague-Dawley（SD）大鼠，體質(zhì)量（200±20）g，雌雄兼用，共48只。由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（湘）2009-0004。動(dòng)物合格證號(hào)：HNSSLKJ20111549。

1.2? 試劑

10%水合氯醛（天津科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20110303）;腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）檢測試劑盒（深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司，批號(hào)：201103）;注射用青霉素鈉（哈藥集團(tuán)制藥總廠，批號(hào)：A100809310）。

1.3? 儀器

SL系列手術(shù)放大鏡（SLE2542，蘇州捷美醫(yī)療器械有限公司）;MP5001電子天平（上海舜宇恒平有限公司）;LG10-2.4A高速離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠）;RT-6000酶標(biāo)儀（深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司）;LEICA DMLB2雙目顯微鏡（德國LEICA公司）;Shandon325型石蠟切片機(jī)（英國Shandon公司）;Motic B5顯微攝像系統(tǒng)（麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)公司）。

2 方法

2.1? 動(dòng)物分組與模型建立

48只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（假手術(shù)組）及模型組，每組24只，雌雄各半。將模型組大鼠術(shù)前12 h禁食、不禁水，10%水合氯醛3 mL/kg腹腔注射麻醉，于尾根部距肛門約1 cm 處切斷鼠尾并縫合傷口。在切斷鼠尾前用橡皮條結(jié)扎切口的近端以減少出血。無菌條件下于背部正中切開皮膚（長約4 cm）、皮下組織，從左側(cè)棘突上鈍性分離椎旁肌，以雙側(cè)髂棘為定位點(diǎn)，切除髂棘以上兩個(gè)椎體的棘突、左側(cè)椎板和關(guān)節(jié)突。在手術(shù)顯微鏡下暴露左側(cè)的硬脊膜，確認(rèn)出左側(cè)脊神經(jīng)，取切下的鼠尾部的呈膠凍樣椎間盤髓核5個(gè)（約10 mg）輕放于左側(cè)神經(jīng)根背側(cè)周圍，仔細(xì)止血后逐層關(guān)閉切口，術(shù)后再次用碘酒和75%酒精消毒皮膚并單籠喂養(yǎng)12 h后放回原籠。對(duì)照組（假手術(shù)組）僅切斷鼠尾，分離椎旁肌，切除髂棘以上兩個(gè)椎體的棘突、左側(cè)椎板和關(guān)節(jié)突。大鼠術(shù)后連續(xù)3 d腹腔注射青霉素鈉2×105 U/kg，每天1次。

2.2? 標(biāo)本采集

術(shù)后分別于第7、14、21、28天隨機(jī)處死1/4動(dòng)物（每次每組6只，雌雄各半），斷頭取血，在3 000 r/min速度下離心15 min，吸取上清備用。同時(shí)取神經(jīng)節(jié)、神經(jīng)根和脊椎組織，4%中性甲醛固定，5%硝酸脫鈣后對(duì)神經(jīng)節(jié)、神經(jīng)根和脊椎組織按縱和橫2個(gè)面進(jìn)行修塊。

2.3? 大鼠行為學(xué)觀察

采用Siegal T[3]推薦的神經(jīng)功能判斷六級(jí)分法（見表1），分別于造模術(shù)后第3、7、14、21、28天觀察，每天2次。采用神經(jīng)功能分值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析（t檢驗(yàn)），0級(jí)-2分，1級(jí)-4分，2級(jí)-6分，3級(jí)-8分，4級(jí)-10分，5級(jí)-12分。

2.4? 神經(jīng)節(jié)、神經(jīng)根和脊椎組織病理學(xué)檢查

將標(biāo)本浸入10%中性福爾馬林固定液中固定48 h，各級(jí)酒精梯度脫水，石蠟包埋，石蠟切片機(jī)上切成4 μm石蠟切片，將切片置于58 ℃烤箱中烘烤18 h，行HE染色，用Motic B5顯微攝像系統(tǒng)觀察并攝影記錄結(jié)果。

2.5? ELISA法測定血清TNF-α含量

嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書步驟測定兩組大鼠血清TNF-α含量：用RT-6000酶標(biāo)儀于450 nm波長測定血清樣本吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度及對(duì)應(yīng)的吸光度值，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的吸光度值，在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的血清TNF-α含量。

2.6? 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用秩和檢驗(yàn)，計(jì)量資料以“x±s”表示，采用t檢驗(yàn)及方差分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1? 行為學(xué)觀察

麻醉蘇醒后兩組大鼠均有蜷縮，少動(dòng)的表現(xiàn)，但無癱瘓鼠。術(shù)后第3天，兩組均有明顯癥狀，神經(jīng)功能評(píng)分均在3級(jí)以上;術(shù)后第7天，對(duì)照組有恢復(fù)的趨勢(shì)，模型組仍有明顯癥狀;術(shù)后第14天，對(duì)照組明顯好轉(zhuǎn)，模型組稍有好轉(zhuǎn);術(shù)后第21天，對(duì)照組基本恢復(fù)正常而模型組癥狀持續(xù);術(shù)后第28天，對(duì)照組恢復(fù)正常，模型組癥狀好轉(zhuǎn)。術(shù)后第7天開始，與對(duì)照組比較，模型組神經(jīng)功能分值在各個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)均顯著升高（P<0.05）。見表2。

3.2? 神經(jīng)及神經(jīng)節(jié)病理學(xué)改變

造模術(shù)后第7天，對(duì)照組（假手術(shù)組）神經(jīng)節(jié)及神經(jīng)根周圍小血管擴(kuò)張充血，神經(jīng)組織內(nèi)可見小靜脈擴(kuò)張充血，神經(jīng)組織水腫，炎性細(xì)胞浸潤，但未見神經(jīng)束受壓表現(xiàn)。模型組可見出血及炎癥細(xì)胞細(xì)胞浸潤，同時(shí)有神經(jīng)受壓表現(xiàn)。見圖1。

造模術(shù)后第14天時(shí)，對(duì)照組出血及炎癥細(xì)胞細(xì)胞浸潤明顯好轉(zhuǎn)，神經(jīng)元輕度水腫;模型組顯示較明顯的炎性細(xì)胞浸潤，浸潤的炎性細(xì)胞以中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞為主。神經(jīng)組織腫脹明顯、神經(jīng)髓鞘腫脹、碎裂，軸突腫脹或消失，許旺氏細(xì)胞自溶、軟化。見圖2。

造模術(shù)后第21天，對(duì)照組炎癥細(xì)胞細(xì)胞浸潤明顯好轉(zhuǎn)及其他炎癥表現(xiàn)基本恢復(fù)正常，模型組仍顯示較明顯的炎性細(xì)胞浸潤。同時(shí)出現(xiàn)有成纖維細(xì)胞浸潤，神經(jīng)部分纖維化表現(xiàn)。見圖3。

造模術(shù)后第28天，對(duì)照組炎癥細(xì)胞細(xì)胞浸潤明顯好轉(zhuǎn)及其他炎癥表現(xiàn)基本恢復(fù)正常，模型組炎癥細(xì)胞細(xì)胞浸潤減弱，受壓神經(jīng)纖維組織及周圍組織明顯增生，神經(jīng)纖維組織內(nèi)有肉芽組織形成纖維間隙縮小，輕度瘢痕化，受壓神經(jīng)表現(xiàn)出明顯的纖維化。見圖4。

3.3? 大鼠血清TNF-α表達(dá)的變化

對(duì)照組大鼠TNF-α表達(dá)隨時(shí)間進(jìn)行明顯下降。造模術(shù)后第7天開始模型組血清中TNF-α含量高于對(duì)照組。術(shù)后第14天開始，與對(duì)照組比較，模型組血清中TNF-α含量在各個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)均顯著升高（P<0.05）。結(jié)果見表3。

4 討論

研究表明，多種大、小動(dòng)物椎間盤的解剖學(xué)和生物力學(xué)特點(diǎn)都基本與人類相似，并可采取合適的模式模擬人類椎間盤退化的過程[4-5]。大小動(dòng)物在構(gòu)建模型上各有優(yōu)缺點(diǎn)，Beckstein J C[6]詳細(xì)比較了7種哺乳動(dòng)物牛、豬、狒狒、羊、兔、大鼠和小鼠通過壓縮椎間盤造模后出現(xiàn)的椎間盤軸向力學(xué)變化以及椎間盤中蛋白多糖含量的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同動(dòng)物的力學(xué)參數(shù)變化往往并沒有出現(xiàn)顯著差異，同時(shí)椎間盤中蛋白多糖和水含量的變化也表現(xiàn)出相似性，但不同物種出現(xiàn)退變所需的時(shí)間有顯著差異。因此，相較于大動(dòng)物難以飼養(yǎng)且昂貴等缺點(diǎn)，小動(dòng)物造模雖然觀察和取材較困難，但仍具有一定的優(yōu)勢(shì)。

常用的LDH模方法主要有自發(fā)性模型和誘發(fā)性模型兩類。使用自發(fā)性椎間盤突出動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)周期長、動(dòng)物種類少，且難以確切估計(jì)模型成功時(shí)間，故較少應(yīng)用。目前主要使用的模型仍是誘發(fā)性模型，例如從神經(jīng)根受到慢性壓迫的角度進(jìn)行造模研究。此種造模方法能比較好地再現(xiàn)椎間盤突出癥引起神經(jīng)壓迫癥狀的過程，特別是隨著椎間盤突出癥發(fā)病機(jī)制中自身免疫學(xué)說研究的深入，自體髓核移植法造模逐漸成為目前主流的造模方法。自體髓核移植法的基本思路是將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自身的髓核取出，通過注射或手術(shù)等法將其移植至脊神經(jīng)根和硬脊膜之間，從而模擬出LDH所致的癥狀。該法與LDH的病理生理機(jī)制基本吻合，目前廣泛應(yīng)用于LDH的發(fā)病機(jī)制以及神經(jīng)遞質(zhì)和炎癥因子甚至是一些藥物和治療手段作用機(jī)制的研究中[7]。越來越多的研究表明，自身免疫的異常在椎間盤突出癥所致的常見癥狀如腰痛和下肢根性神經(jīng)痛發(fā)生發(fā)展中起著十分重要的作用[8-9]，故采取自體髓核移植法能較好地模擬椎間盤突出癥的病理生理機(jī)制。

自身免疫反應(yīng)活化過程包括抗原捕獲、原型輔助性T（Th）細(xì)胞的活化和最終自身抗體的產(chǎn)生。其中Th細(xì)胞的活化是自身免疫系統(tǒng)激活過程中十分重要的途徑，原型Th細(xì)胞活化后主要分化為產(chǎn)生干擾素-γ（IFN-γ）為主Th-1（I型輔助T細(xì)胞）細(xì)胞和產(chǎn)生白細(xì)胞介素-4（IL-4）為主的Th-2（II型輔助T細(xì)胞）細(xì)胞，Geiss A等[10]在對(duì)自體髓核引起免疫反應(yīng)的研究中發(fā)現(xiàn)，在豬自體髓核突出模型中自體髓核“接觸”免疫系統(tǒng)3周后能夠促使原型Th細(xì)胞主要轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)生IL-4為主的Th-2型細(xì)胞。IL-4是十分重要的細(xì)胞因子，能促使B淋巴細(xì)胞活化并上調(diào)II型主要組織兼容性復(fù)合體（majorhistocompatibility complexII，MHC II）的表達(dá)[11]，同時(shí)IL-4也能促使巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)換為修復(fù)型巨噬細(xì)胞（M2細(xì)胞）從而促進(jìn)與創(chuàng)面修復(fù)和纖維化，此項(xiàng)研究提示自體髓核在暴露于免疫系統(tǒng)后能促使免疫反應(yīng)的發(fā)生從而誘發(fā)炎癥反應(yīng)。同時(shí)研究也發(fā)現(xiàn)在豬皮下植入含自體髓核的鈦囊后，與空白組相比含自體髓核的鈦囊中活化T細(xì)胞（CD4和CD8）比例明顯較高，表達(dá)免疫球蛋白的活化B細(xì)胞也明顯增高，該研究提示自體髓核能促進(jìn)T、B細(xì)胞的活化[12]。李暉等[13]研究也證實(shí)破碎型LDH標(biāo)本中有T淋巴細(xì)胞浸潤和免疫球蛋白IgG、IgM沉積，因而其病理機(jī)制可能是在損傷基礎(chǔ)上的自免疫炎癥反應(yīng)過程，而完整型腰椎間盤突出以髓核退變、軟骨基質(zhì)及纖維環(huán)增生為主要表現(xiàn)，但沒有發(fā)現(xiàn)免疫應(yīng)答反應(yīng)。

因此，本研究采用比較成熟的自體髓核移植法構(gòu)建模型，在手術(shù)顯微鏡下成功將從鼠尾部取出的自體髓核移植至脊神經(jīng)根和硬脊膜之間，成功建立了LDH模型。在造模術(shù)后第3天對(duì)照組（假手術(shù)組）與模型組均有明顯癥狀，但術(shù)后第7天開始假手術(shù)組逐漸恢復(fù)而模型組仍有明顯癥狀并直至術(shù)后第21天仍有明顯癥狀;病理檢查也顯示在植入髓核后對(duì)照組與模型組的病理結(jié)果有顯著性差異，病理學(xué)和行為學(xué)觀察結(jié)果均支持模型效果。同時(shí)，多項(xiàng)研究已證實(shí)TNF-α是髓核突出后引起炎癥反應(yīng)的標(biāo)志性因子，且與炎癥反應(yīng)所致疼痛密切相關(guān)[14-15]。能直接抑制TNF-α的藥物Etanercep已開始應(yīng)用于臨床治療椎間盤突出癥所致癥狀[16]，Horii M等[17]發(fā)現(xiàn)，在直接穿刺損傷大鼠椎間盤后即可出現(xiàn)大鼠背根神經(jīng)節(jié)中降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene-related peptide， CGRP）的表達(dá)增高，而Etanercep能迅速下調(diào)CGRP的表達(dá)，此途徑可能是Etanercep的治療機(jī)制。因此，我們選取測定血清中TNF-α的表達(dá)來驗(yàn)證模型的效果，結(jié)果顯示，對(duì)照組TNF-α的表達(dá)隨時(shí)間進(jìn)行明顯下降而模型組未見此種趨勢(shì)，模型組TNF-α的表達(dá)在各個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)均顯著高于對(duì)照組，說明通過移植自體髓核造模后成功誘導(dǎo)出了自身免疫性炎癥反應(yīng)。

炎性介質(zhì)、細(xì)胞因子既是髓核退變、椎間盤突出后的病理產(chǎn)物，又是進(jìn)一步促進(jìn)退變、導(dǎo)致臨床癥狀的致病因素。從細(xì)胞和分子水平，從細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)表達(dá)、自身免疫調(diào)節(jié)等多角度對(duì)藥物治療椎間盤突出癥的有效性和作用機(jī)制進(jìn)行深入細(xì)致的探討對(duì)豐富傳統(tǒng)中藥治療LDH的科學(xué)依據(jù)具有重要的意義。為了獲得最佳實(shí)驗(yàn)效果，我們?cè)诖舜文Ｐ脱芯恐性O(shè)計(jì)了對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)模型效果的動(dòng)態(tài)觀察，以期獲得建模后的最佳實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)。結(jié)果顯示，在造模術(shù)后第21天對(duì)照組行為學(xué)癥狀和病理檢查基本恢復(fù)正常而模型組在行為學(xué)表現(xiàn)、病理學(xué)檢查及血清TNF-α表達(dá)上與對(duì)照組比較均有較大差異;而此后模型組開始有恢復(fù)的趨勢(shì)。目前國內(nèi)尚未見此類模型效果研究，Souza等[18]在自體髓核誘導(dǎo)的炎癥細(xì)胞因子表達(dá)和痛覺閾值與時(shí)間相關(guān)性的研究中發(fā)現(xiàn)，自體髓核移植后表達(dá)水平最高的細(xì)胞因子是TNF-α、IL-1β和細(xì)胞因子誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞趨化因子-1（cytokine-induced neutrophil chemoattractant-1，CINC-1）且炎癥因子表達(dá)水平和痛閾與植入時(shí)間呈正相關(guān)：植入7 d后大鼠細(xì)胞因子表達(dá)水平及痛閾值與對(duì)照組基本相當(dāng)，但植入21 d細(xì)胞因子表達(dá)水平及痛閾值及顯著高于對(duì)照組。我們的研究結(jié)果與其相似。綜上所述，選取造模術(shù)后第21天作為LDH模型觀察時(shí)間可能是比較藥物療效及機(jī)制比較合適的實(shí)驗(yàn)時(shí)間節(jié)點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)

[1] 王? 峣，徐志杰，李海昕，等.慢性腰痛生物學(xué)治療的研究進(jìn)展[J].中國骨與關(guān)節(jié)雜志，2018，7（6）：449-453.

[2] 蘇少亭，周紅海，梁? 棟，等.腰椎關(guān)節(jié)突關(guān)節(jié)的生物力學(xué)研究進(jìn)展[J].中國脊柱脊髓雜志，2017，27（5）：474-479.

[3] SIEGAL T， SHOHAMI E， SHAPIRA Y， et al. Indomethacin and dexamethasone treatment in experimental neoplastic spinal cord compression[J]. Neurosurgery， 1988， 22（2）：334-339.

[4] OCONNELL G D， VRESILOVIC E J， ELLIOTT D M. Comparison of animals used in disc research to human lumbar disc geometry[J]. Spine， 2007， 32（3）： 328-333.

[5] SHOWALTER B L， BECKSTEIN J C， MARTIN J T， et al. Comparison of animal discs used in disc research to human lumbar disc： torsion mechanics and collagen content[J]. Spine， 2012， 37（15）： E900-907.

[6] BECKSTEIN J C， SEN S， SCHAER T P， et al. Comparison of animal discs used in disc research to human lumbar disc： axial compression mechanics and glycosaminoglycan content[J]. Spine， 2008， 33（6）： E166-173.

[7] 李慧瑩，單志婧，翟志超，等.腰椎間盤突出癥動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J].中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志，2015，21（1）：64-66，68.

[8] 楚福明，董思佳，吳? 忌，等.活血化瘀藥物治療腰椎間盤突出癥免疫機(jī)制研究[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2018，39（7）：34-35.

[9] 劉振剛，盧一生，施建東，等.腰椎間盤突出癥和椎間盤源性疼痛的免疫病理學(xué)研究[J].頸腰痛雜志，2016，37（4）：272-275.

[10] GEISS A， LARSSON K， JUNEVIK K， et al. Autologous nucleus pulposus primes T cells to develop into interleukin-4-producing effector cells： an experimental study on the autoimmune properties of nucleus pulposus[J]. Journal of Orthopaedic Research， 2009， 27（1）： 97-103.

[11] SOKOL C L， BARTON G M， FARR A G， et al. A mechanism for the initiation of allergen-induced T helper type 2 responses[J]. Nature Immunology， 2008，9（3）：310-318.

[12] GEISS A， LARSSON K， RYDEVIK B， et al. Autoimmune properties of nucleus pulposus： an experimental study in pigs[J]. Spine， 2007， 32（2）：168-173.

[13] 李? 暉，馬信龍，王? 沛，等.腰椎間盤突出癥的免疫病理學(xué)研究[J].中華骨科雜志，2007，27（5）：778-780.

[14] 王? 敏，李海燕，蘇仁強(qiáng)，等.腰六俞穴位埋線結(jié)合導(dǎo)引術(shù)和腰腿痹通膠囊對(duì)腰椎間盤突出癥患者血清腫瘤壞死因子-α和一氧化氮的影響[J].湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，18（5）：15-17.

[15] 張瀟瀟，姜? 宏，張志剛，等.腫瘤壞死因子與腰椎間盤退變的相關(guān)性研究進(jìn)展[J].中國中醫(yī)骨傷科雜志，2017，25（12）：79-82.

[16] SINCLAIR S M， SHAMJI M F， CHEN J， et al. Attenuation of inflammatory events in human intervertebral disc cells with a tumor necrosis factor antagonist[J]. Spine， 2011， 36（15）：1190-1196.

[17] HORII M， ORITA S， NAGATA M， et al. Direct application of the tumor necrosis factor-α inhibitor， etanercept， into a punctured intervertebral disc decreases calcitonin gene-related peptide expression in rat dorsal root ganglion neurons[J]. Spine， 2011，36（2）：E80-85.

[18] SOUZA GRAVA A L， FERRARI L F， DEFINO H L. Cytokine inhibition and time-related influence of inflammatory stimuli on the hyperalgesia induced by the nucleus pulposus[J]. European Spine Journal， 2012， 21（3）： 537-545.

（本文編輯? 楊? 瑛）