孟 冉，張振凌，陳晶晶，黃亞森，張江山

（1.河南中醫(yī)藥大學(xué)，河南 鄭州 450046；2.洛陽市中醫(yī)院，河南 洛陽 471000；3.河南省特色炮制工程技術(shù)中心，河南 鄭州 450046）

麩炒又稱“麩皮炒”“麥麩炒”，是一種傳統(tǒng)的中藥炮制工藝［1-2］。麩炒中的輔料麥麩為禾本科植物小麥Triticum aestivumL.麥粒結(jié)構(gòu)中的外種皮和糊粉層，在麥粒實際制粉工藝中，將提取胚芽和胚乳后的殘留物統(tǒng)稱為麩皮，約占小麥籽粒的22%～25%［3］。據(jù)統(tǒng)計，在小麥整個生長過程中，小麥對各類農(nóng)藥的需求量呈上升趨勢［4］。由于生長環(huán)境，如土壤、水、大氣和化肥農(nóng)藥的施用亦會導(dǎo)致其重金屬污染。麥麩作為炮制輔料，在儲存過程中，易出現(xiàn)發(fā)霉、蟲蛀等變質(zhì)現(xiàn)象，其農(nóng)藥殘留量、重金屬及有害元素含有量、霉菌總數(shù)超標，與中藥飲片共制將影響炮制品質(zhì)量，危害人體健康。因此，輔料麥麩的質(zhì)量也是影響炮制品質(zhì)量的重要因素。沈燕［5］、毛應(yīng)明等［6］研究發(fā)現(xiàn)，至小麥成熟期，殘留的樂果和毒死蜱主要分布在穎殼和籽粒的麩皮中。至小麥收獲期，殘留的多菌靈主要分布在葉片、穎殼和穗軸中。課題組對炮制輔料麥麩中毒死蜱、樂果、多菌靈的農(nóng)藥殘留量、5 種常見重金屬及有害元素鉛（Pb）、鎘（Cd）、汞（Hg）、砷（As）、銅（Cu）、霉菌總數(shù)進行檢測與分析，并制定其限量標準，控制輔料麥麩的質(zhì)量，保證中藥飲片的安全性和有效性，以期為輔料麥麩質(zhì)量標準的制定提供參考。

1 材料

1.1 儀器 FW200 高速萬能粉碎機（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；KQ-500DV 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BSA224S-CW 型天平（萬分之一，賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）；BT25S 電子分析天平（十萬分之一，德國賽多利斯公司）；iCAPQc 電感耦合等離子體質(zhì)譜（美國賽默飛世爾公司）；EHD-40 趕酸儀、MARS 6 微波消解儀（美國培安科技有限公司）；ZHPW-70 恒溫振蕩培養(yǎng)箱、HWS-250 型恒溫恒濕培養(yǎng)箱（天津市萊玻特瑞儀器設(shè)備有限公司）；LDZX-75KBS 型立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）；SW-CJ-1F 型單人雙面凈化工作臺（上海蘇凈實業(yè)有限公司）。

1.2 材料 蒸餾水；超純水；70%硝酸（北京化學(xué)試劑研究所）；30%過氧化氫（優(yōu)級純，天津市致遠化學(xué)試劑有限公司）；0.9% 氯化鈉生理鹽水（撫州市鑫健源生物科技有限公司）。As（GBS 04 -1714 -2004）、Cu（GSB 04-1725 -2004）、Hg（GBS 04 -1729 -2004）、Pb（GBS 04-1742-2004）、Cd（GBS 04 -1721 -2004）、Au（GBS 04 -1734-2004）單元素標準溶液（1 000 μg/mL）（國家有色金屬及電子材料分析測試中心）。孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基（北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司）。10 批不同產(chǎn)地麥麩樣品信息見表1，經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥炮制教研室張振凌教授鑒定為禾本科植物小麥Tciticum aestivumL.的種子經(jīng)磨面粉后的種皮。

表1 樣品信息Tab.1 Information of samples

2 方法與結(jié)果

2.1 農(nóng)藥殘留量測定 按照《GB/T5009.145 植物性食品中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多種殘留的測定》［7］氣相色譜法測定毒死蜱、樂果殘留量，《GB/T20770 糧谷中486 種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》［8］液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定多菌靈殘留量。由河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院（第三方權(quán)威檢測機構(gòu)）進行樣品檢測，檢測報告編號2017-2174 至2017-2183。農(nóng)藥殘留量測定指標3項檢測結(jié)果見表2。

2.2 重金屬及有害元素含有量測定

2.2.1 分析條件 等離子體RF 功率1 550 W；載氣體積流量0.8 L/min；霧化器體積流量1.122 9L/min；霧化室溫度2.7 ℃；分析時間0.6 s；測量次數(shù)3次；掃描方式跳峰；測量模式低濃度使用標準（Standard，STD）模式，高濃度使用動能歧視（KineticEnergy Discrimination，KED）模式。

表2 中藥炮制輔料麥麩3 種農(nóng)藥殘留量測定結(jié)果（n=2，mg/kg）Tab.2 Determination results of residues of three pesticides in wheat bran（n=2，mg/kg）

2.2.2 溶液制備

2.2.2.1 標準溶液 取Pb、Cd、As、Cu 各單元素標準溶液適量，各置于100 mL 塑料瓶中，用2%硝酸定容至100 g，混勻，即得質(zhì)量濃度為10 000 μg/L各元素標準品貯備液。取各元素標準貯備液適量，共置于100 mL 塑料瓶中，用2% 硝酸配制成各元素質(zhì)量濃度均為100 μg/L 的混合標準品溶液。并依次稀釋為各元素質(zhì)量濃度均分別為100、50、10、5、1 μg/L 的系列混合標準品溶液。

2.2.2.2 Hg 單元素標準溶液 取單元素標準溶液Au 1 mL 和Hg 5 μL 于50 mL 量瓶中，用2%硝酸定容至50 g，混勻，即得質(zhì)量濃度為100 μg/L 的Hg 標準溶液，然后用2% 硝酸依次稀釋為2、1、0.5、0.1、0.05 μg/L 的標準系列溶液。

2.2.3 供試品溶液制備 精密稱取樣品粉末0.2 g，置聚四氟乙烯消解管中，加入6 mL 硝酸及2 mL 過氧化氫，放置過夜。將消解管放入趕酸儀中，120 ℃預(yù)消解15 min，冷卻至室溫。將消解管放入電熱套中，置微波消解儀內(nèi)，按消解程序進行，消解程序見表3，消解完畢后，將消解管從電熱套中取出，將蓋子打開，放入趕酸儀中120 ℃趕酸，至黃色煙霧散盡，冷卻至室溫。將消解液全部轉(zhuǎn)移至100 mL 塑料量瓶中，用超純水定容至刻度，搖勻，過0.22 μm 微孔濾膜，即得。同法制備空白溶液。

2.2.4 線性關(guān)系考察 取“2.2.2.1”項下混合標準溶液適量，在“2.2.1”項條件下測定，計算線性回歸方程。同時測定8 份空白樣品溶液，以其響應(yīng)值的3 倍所對應(yīng)的元素濃度作為檢出限。結(jié)果見表4，可知各元素在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表3 微波消解儀工作條件Tab.3 Working parameters of microwave digestion

表4 各元素線性關(guān)系Tab.4 Linear relationships of various elements

2.2.5 重復(fù)性試驗 精密稱取6 份TL07 麥麩樣品，每份0.2 g，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，在“2.2.1”項條件下進樣，測得5 種元素含有量RSD 為1.38%～4.22%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.6 精密度試驗 取同一Pb、Cd、As、Cu 混合標準溶液及Hg 單元素標準溶液，在“2.2.1”項條件下進樣6 次，測得5 種元素含有量RSD 為0.23%～3.56%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 加樣回收率試驗 稱取已知含有量的TL06麥麩樣品0.1 g，分別加入其相同含有量的50%、100%、150%標準溶液，即分為高、中、低3 組樣品，每組樣品做3 組平行試驗，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，在“2.2.1”項條件下進樣，測得各元素的平均回收率為98.67%～100.67%，RSD 為3.34%～4.46%，結(jié)果見表5。

2.2.8 樣品含有量測定 按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，在“2.2.1”項條件下，依次對混合標準系列溶液、試劑空白和樣品溶液分別進行測定，由ICP-MS 工作站軟件分析數(shù)據(jù)，自動繪制出各元素的標準曲線，并計算出樣品中各對應(yīng)元素的含有量。結(jié)果見表6。

表5 各元素加樣回收率試驗結(jié)果（mg/kg，n=9）Tab.5 Results of recovery tests for various elements（mg/kg，n=9）

2.3 霉菌總數(shù)測定 無菌操作下，稱取樣品5 g，置滅菌的錐形瓶中，加入45 mL 滅菌氯化鈉注射液，置于搖床中，以100 r/min 振搖30 min，即為1∶10 的稀釋液。用移液槍吸取1∶10 稀釋液1 mL，加入含有9 mL 滅菌氯化鈉注射液的試管中，充分漩渦震蕩，混和均勻，即為1∶100 的稀釋液。按上述操作方法，作10 倍遞增稀釋液。分別吸取10、100、1 000倍的稀釋液1 mL 加入各無菌平皿中，每個稀釋度作2 個培養(yǎng)皿。同時分別吸取1 mL 滅菌氯化鈉注射液加入2 個無菌平皿中作為空白對照。分別在培養(yǎng)皿中及時加入冷卻至約45 ℃的RBC 培養(yǎng)基約15 mL，小心轉(zhuǎn)動平皿，使其充分混勻，恒溫培養(yǎng)箱中28 ℃培養(yǎng)。培養(yǎng)48 h后開始觀察，每24 h 觀察1 次，直至數(shù)據(jù)穩(wěn)定。結(jié)果見表6。

表6 中藥炮制輔料麥麩各元素含有量、霉菌總數(shù)測定結(jié)果（mg/kg，n=2）Tab.6 Determination results of various elements and total fungi in wheat bran（mg/kg，n=2）

3 輔料麥麩有害物質(zhì)限量標準制定

3.1 農(nóng)藥殘留量標準制定 麥麩作為食品被部分國家收載在其國家標準中，但也有國家或地區(qū)并未將麥麩收載在國家標準中，其國際化程度有待提高。由于麥麩是小麥的副產(chǎn)品，課題組以日本、韓國、美國及歐盟對小麥或麥麩中毒死蜱、樂果、多菌靈3 種農(nóng)藥殘留限量標準為對比標準，各國對小麥或麥麩的上述3 種農(nóng)藥殘留限量情況見表7。

毒死蜱對水稻、小麥、棉花、果樹、蔬菜、茶樹上多種咀嚼式和刺吸式口器害蟲均具有較好防治效果。樂果對多種害蟲特別是刺吸口器害蟲，具有更高的毒效，殺蟲范圍廣，能防治蚜蟲、紅蜘蛛、潛葉蠅、薊馬、果實蠅、葉蜂、飛虱、葉蟬、介殼蟲。多菌靈對多種作物由真菌（如半知菌、多子囊菌）引起的病害有防治效果，可以有效防治由真菌引起的多種作物病害，在我國的使用范圍廣泛。三者均是常用農(nóng)藥。本實驗10 批麥麩中，TL08 山東臨沂麥麩被檢出毒死蜱含有量為0.056 mg/kg，其余樣品3 種農(nóng)藥殘留均未被檢出。由于我國不同地區(qū)自然條件、種植業(yè)結(jié)構(gòu)及耕作制度差異較大，農(nóng)藥使用情況隨地域分布，差異較大。根據(jù)我國農(nóng)藥使用情況，制定麥麩3 種農(nóng)藥殘留量標準與GB2763—2016 《食品國家安全標準 食品中農(nóng)藥最大殘留量》［13］“小麥”項下一致。建議毒死蜱殘留量不得超過0.5 mg/kg，樂果殘留量不得超過0.05 mg/kg，多菌靈殘留量不得超過0.5 mg/kg。

表7 小麥或麥麩毒死蜱、樂果、多菌靈殘留限量標準Tab.7 Limit standards for chlorpyrifos，dimethoate and carbendazim residues in wheat or wheat bran

3.2 重金屬及有害元素限量標準制定 本實驗重金屬含有量測定結(jié)果顯示，10 批麥麩中Pb、Cd、Hg、As、Cu 平均值分別為0.84、0.06、0.005、0.06、7.86 mg/kg。由于現(xiàn)行標準缺少對麥麩質(zhì)量標準的規(guī)定，課題組整理相關(guān)標準對“谷物及其制品”“飼料原料”“糧食”等包含麥麩的品種，關(guān)于5 種有害元素的限量規(guī)定，作為參考。見表8。

表8 麥麩5 種重金屬及有害元素相關(guān)標準Tab.8 Relevant standards for five heavy metals and hazardous elements in wheat bran

GB 13078—2017［14］規(guī)定Pb 含有量不得超過5 mg/kg，10 批麥麩Pb 含有量雖未超標，但樣品之間含有量差異較大，Pb 含有量最小值為0.26 mg/kg，最大值為2.40 mg/kg，二者Pb 含有量幾乎相差10 倍，可能與地域分布、土壤和水質(zhì)環(huán)境及小麥種植情況有關(guān)。GB 2762—2017［15］規(guī)定Cd 含有量不超得過0.1 mg/kg，其中TL05 四川內(nèi)江麥麩Cd 含有量超標。中藥炮制輔料麥麩重金屬含有量超標應(yīng)引起足夠重視，加強控制，以保證中藥飲片的安全性及有效性。GB 2762—2017［15］規(guī)定Hg 含有量不得超過0.02 mg/kg，As 含有量不得超過0.5 mg/kg，10 批麥麩Hg、As 含有量均未超標。GB 15199—1994［16］規(guī)定 Cu 含有量不得超過10 mg/kg，10 批麥麩 Cu 含有量平均值為7.86 mg/kg，其中TL04 江蘇鹽城麥麩Cu 含有量為9.34 mg/kg，雖未超標，但已接近國標限量值，應(yīng)加強控制。由于我國地域廣闊，土壤及水質(zhì)環(huán)境、小麥種植情況的差異，各產(chǎn)地麥麩重金屬含有量差異較大。麥麩作為中藥炮制輔料，應(yīng)加強對重金屬含有量的控制以保證臨床用藥安全有效。因此，建議制定中藥炮制輔料麥麩中5 種重金屬及有害元素限量與表8 參考國家標準一致。

3.3 霉菌總數(shù)限量標準制定 麥麩作為炮制輔料，在儲存過程中，易出現(xiàn)發(fā)霉、蟲蛀等變質(zhì)現(xiàn)象。10批麥麩霉菌總數(shù)平均值1 277 個/g，最小值10 個/g，最大值9 600 個/g，樣品之間差異較大?，F(xiàn)行各省中藥飲片炮制規(guī)范，僅2009 年版《陜西省中藥飲片標準》［17］附錄Ⅲ規(guī)定麥麩作為炮制輔料，其霉菌總數(shù)不得過40 000 個/g。10 批麥麩雖遠未超出上述規(guī)定限量，實驗結(jié)果提示亦應(yīng)為麥麩提供適宜的儲存條件，避免其發(fā)霉變質(zhì)，進而保證臨床用藥安全。綜上，建議制定霉菌總數(shù)限量標準，麥麩霉菌總數(shù)不得過20 000 個/g，該標準嚴于《陜西省中藥飲片標準》［17］，隨著輔料麥麩使用的規(guī)范化，為保證中醫(yī)臨床用藥的安全性及有效性，該限度標準在今后仍需提高。

4 討論

麥麩作為一種重要的中藥炮制輔料，目前尚無統(tǒng)一的質(zhì)量標準。由于缺少炮制用輔料的質(zhì)量標準體系的約束，全國中藥飲片廠使用的炮制輔料既不受食品、農(nóng)副產(chǎn)品等行業(yè)管理，也不受中藥行業(yè)約束，應(yīng)用較為混亂［18］。其質(zhì)量好壞直接影響中藥炮制品的品質(zhì)，使用質(zhì)量差的麥麩有時非但起不到減毒增效的作用，還會使中藥炮制品的外觀性狀受到破壞，甚至造成重金屬含有量、微生物限量和農(nóng)藥殘留量超標，產(chǎn)生負面影響［19］。本實驗針對小麥的生長特性及麥麩的儲存條件，對麥麩中有害物質(zhì)進行限度檢查。10 批麥麩中除山東麥麩被檢出毒死蜱殘留量為0.056 mg/kg，其余樣品的3 種農(nóng)藥殘留均未檢出?？赡苁怯捎谏鲜? 種農(nóng)藥使用量不大，且小麥收獲后經(jīng)過一段時間的放置和加工，制成麥麩，農(nóng)藥有所降解。采用ICP-MS 測定了10批麥麩中5 種重金屬及有害元素的含有量，該方法簡便、快速、準確。其霉菌總數(shù)測定結(jié)果反映麥麩儲存環(huán)境對其質(zhì)量的影響，提示應(yīng)嚴格控制其儲存條件。同時，參照相關(guān)標準對輔料麥麩中有害物質(zhì)做出了合理的限度規(guī)定。其中，3 種農(nóng)藥殘留、5種重金屬及有害元素限度標準均與現(xiàn)行相關(guān)標準持平，霉菌總數(shù)標準嚴于《陜西省中藥飲片標準》。麥麩質(zhì)量對中藥炮制品質(zhì)量的相關(guān)研究較少，僅鄧旭坤等［20］探討了麥麩粒徑對麩炒山藥外觀性狀的影響，吳慧等［21］探討了不同麥麩對白術(shù)炮制品質(zhì)量的影響，張琳等［22］研究了不同麥麩對枳殼不同炮制品質(zhì)量的影響。本課題應(yīng)進一步深入研究麥麩有害物質(zhì)殘留量對中藥炮制品內(nèi)在質(zhì)量的影響，同時擴大樣本量，收集全國大批次的麥麩樣品，對其進行上述3 種有害物質(zhì)的含有量測定，并進一步完善該限度標準，使其既能夠在適宜程度內(nèi)約束該標準執(zhí)行者，又能夠滿足市場需求，有效地規(guī)范麥麩的使用。建議加強炮制輔料麥麩的源頭控制，并提供適宜的儲存條件，進一步完善其質(zhì)量評價體系，控制輔料麥麩的質(zhì)量，以保證中藥飲片的安全性及有效性，實現(xiàn)合理科學(xué)的綠色炮制，以期為炮制輔料標準的制定提供參考。