姚玉芳 張福波 徐鑫

【摘 要】目的：血漿外泌體miRNAs是否可作為帕金森?。≒D）的生物標(biāo)志物，探索其在PD診斷中的潛在價值。方法：將52例帕金森?。≒D）患者納入研究組;48例健康成人作為對照組。采集所有受試者血樣，從血樣中提取外泌體miRNAs進(jìn)行比較。結(jié)果：研究組外泌體miR-331-5p和miR-505與對照組相比有明顯差異，即miR-331-5p顯著增高，miR-505顯著減低，且差異有統(tǒng)計學(xué)差意義。結(jié)論：外泌體miR-331-5p和miR-505極可能可以作為帕金森病的生物標(biāo)志物。

【關(guān)鍵詞】外泌體miRNA;帕金森病;生物標(biāo)志物

【中圖分類號】R730. 45 ? ? ? ? ? ?【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】1002-8714（2020）09-0078-01

帕金森病的臨床特征是運動遲緩、靜止性震顫和肌強直[1]。帕金森病至今仍難以診斷，主要由臨床癥狀主觀判斷，臨床診斷可能晚于疾病發(fā)生幾年。因此，尋找有潛力的生物學(xué)標(biāo)記對早期PD的診斷價值較為緊迫。外泌體是一種轉(zhuǎn)運蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、DNA、 mRNA和micro-RNA （miRNA）等物質(zhì)的離子體，在許多疾病中是被公認(rèn)為是必不可少的交通工具。miRNA的核苷酸的長度為18-25，通過它們的相互作用進(jìn)行翻譯非編碼區(qū)目標(biāo)基因從而調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)。據(jù)很多報道表明，PD患者血漿miRNA表達(dá)顯著高于或低于健康人[2]。例如，來自PD患者的血漿miR-626和miR-505降低，而miR-331-5p， miR-193a-p， miR-137升高。

方法：研究組52例PD患者，對照組48例健康人均來自滄州市中心醫(yī)院;PD患者的診斷依據(jù)為英國帕金森病學(xué)會診斷標(biāo)準(zhǔn);所有 患者M(jìn)MSE得分> 24，并且帕金森病藥物治療至少2周。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）缺血性、出血性卒中或嚴(yán)重頭部外傷;（2） 認(rèn)知功能評MMSE得分等于或者小于24分;（3）攝入抗氧化劑或維生素補充劑大于6個月;（4） 有惡性腫瘤、糖尿病、肺部疾病、肝臟或血液系統(tǒng)疾病、或需要透析的慢性腎功能衰竭。所有病人都簽署了知情同意書。本研究通過滄州市中心醫(yī)院倫理委員會的審查。

1.1 標(biāo)本采集：使用10ml EDTA管采集所有受試者外周靜脈血，然后離心收集血漿上清液1.5 ml;在血清中提取外泌體，然后使用外泌體RNA試劑盒提取外分泌體miRNA;同時使用試劑盒提取血漿miRNA。將血漿及外泌體miRNA 進(jìn)行RT-qPCR（ 使用德國miScript工具包）分析和定量。分析兩組血漿及外泌體miRNA的表達(dá)，包括 miR-505、miR-331-5p，、miR-454、miR-137等。

1.2 統(tǒng)計學(xué)方法：

使用 SPSS 22分析兩組血漿及外分泌體不同miRNAs的差異性，如果 p < 0.05. 差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果：研究顯示100例受試者：包括52例PD研究組和48例健康對照組的臨床特征（年齡、性別、體重指數(shù)、MMSE得分等）無顯著性差異（P>0.05）。如圖兩組血漿miRNA的表達(dá)兩組無顯著差異（P>0.05）。然而， 兩組外泌體miRNAs有顯著差異，研究組中外泌體miR331-5-p明顯高于對照組，而miR505在外泌體中幾乎不表達(dá)，明顯低于對照組（P<0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

討論：有研究表明循環(huán)外泌體miRNA對于阿爾茲海默病有診斷價值[3]， 目前尚無相關(guān)研究報道其在PD中的作用。根據(jù)先前的證據(jù)，PD患者與健康人我們進(jìn)行了一次幾種外泌體miRNA的分析。我們發(fā)現(xiàn)兩組miR-331-5p和miR-505均在外分泌體中有顯著差異，而在血漿中無明顯差異。我們邏輯上猜測miR-331-5p可能通過外泌體轉(zhuǎn)運給PD相關(guān)細(xì)胞，因此他可能參與PD的病理過程。Khoo等人報道m(xù)iR-505在PD發(fā)生中有一定作用[4]，而我們研究發(fā)現(xiàn)PD患者外泌體miR-505是顯著降低的。我們推測miR-505可能不是通過外泌體傳遞給PD相關(guān)細(xì)胞。

我們結(jié)論：本研究證明外泌體miR-331-5p和miR-505可能對于帕金森?。≒D）的診斷具有重要的診斷價值。

參考文獻(xiàn)

[1] Oertel WH. Recent advances in treating Parkinsons disease. F1000Res.2017; 6： 260.

[2] Viswambharan V， Thanseem I， Vasu MM， Poovathinal SA， Anitha A. miRNAs as biomarkers of neurodegenerative disorders. Biomark Med 2017; 11： 151- 167.

[3] Liu CG， Song J， Zhang YQ， Wang PC. MicroRNA-193b is a regulator of amyloid precursor protein in the blood and cerebrospinal fluid derived exosomal microRNA-193b is a biomarker of Alzheimers disease. Mol Med Rep 2014; 10： 2395- 2400.