劉碩， 饒定齊

(1. 中國科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所昆明動(dòng)物博物館，昆明650223； 2. 中國科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所，昆明650223)

湍蛙屬AmolopsCope， 1865目前包含60個(gè)物種，廣泛分布于喜馬拉雅山脈南部和東部，中國大陸東南部，馬來半島等地區(qū)(Frostetal.，2020)；該屬以蝌蚪口后腹部有吸盤，成體指末端膨大具有吸盤且背面有橫溝而區(qū)別于其他類群(金義文等，2005)?？藲J湍蛙Amolopsafghanus是Günther(1858)描述發(fā)表的，后來被作為西域湍蛙Amolopsmarmoratus的同物異名(Anderson，1871，1879；Boulenger，1882；Mason，1882；Bourret，1942；Dubois，1992)。Dever等(2012)利用在緬甸采集的標(biāo)本經(jīng)過分子及形態(tài)方面與西域湍蛙的對比，在2012年恢復(fù)了克欽湍蛙的有效性并對其重新做了描述。克欽湍蛙的模式產(chǎn)地在原始描述中被記載為阿富汗。后續(xù)的研究者們認(rèn)為這個(gè)模式產(chǎn)地的記載是錯(cuò)誤的(Annandale，1912)，Dever等(2012)認(rèn)為克欽湍蛙模式標(biāo)本的采集地應(yīng)該是在緬甸克欽邦。

中國云南省西部和西藏自治區(qū)墨脫縣有西域湍蛙的分布記錄(楊大同，1991；費(fèi)梁等，2009，2012；李丕鵬等，2010)，Lyu等(2019)提出在云南西部分布的不是西域湍蛙而是Amolopsafghanus，并將其中文名譯為“克欽湍蛙”。

2018年9月，野外考察期間在云南省德宏傣族景頗族自治州采集到一些湍蛙標(biāo)本，分子和形態(tài)分析結(jié)果都表明這些標(biāo)本屬于克欽湍蛙，與Lyu等(2019)的觀點(diǎn)一致。

1 材料與方法

克欽湍蛙雄性成體標(biāo)本4號(KIZL201807、KIZL201813～KIZL201815)，雌性成體標(biāo)本5號(KIZL201808、KIZL201816～KIZL201819)，2018年9月1日采自云南省德宏傣族景頗族自治州盈江縣銅壁關(guān)鄉(xiāng)(97.599 734°E，24.613 565°N， 海拔1 248 m)；雄性成體標(biāo)本5號(KIZL201809、KIZL201810、KIZL201820～KIZL201822)，2018年 9月 30日采自云南省德宏傣族景頗族自治州盈江縣那邦鎮(zhèn)(97.586 110°E，24.714 924°N，海拔290 m)。對標(biāo)本肝臟取樣并97%乙醇保存，取樣后的標(biāo)本75%乙醇保存。所有標(biāo)本均保存于中國科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所昆明動(dòng)物博物館兩棲爬行動(dòng)物標(biāo)本庫(圖1)。

圖1 克欽湍蛙標(biāo)本(A、C： 背面， B、D： 腹面)Fig. 1 Amolops afghanus specimens in preservative (A， C： dorsal view； B， D： ventral view)

擴(kuò)增了來自2個(gè)不同采集地的4號個(gè)體的線粒體基因16SrRNA，使用的引物為：L2188(Matsuietal.，2006)：5’-AAAGTGGGCC-TAAAAGCAGCCA-3’和16H1(Hedges，1994)：5’-CTCCGGTCTGAACTCAGATCACGTAGG-3’。

首先使用lasergene中的sequman對原始序列進(jìn)行剪切，得到長度為850 bp的片段。本實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增了克欽湍蛙序列，并從NCBI網(wǎng)站下載了部分湍蛙屬物種的16SrRNA序列以及花臭蛙Odorronaschmackeri和綠臭蛙Odorronamargaretae的16SrRNA序列作為外群(表1)。使用Clustal X 1.83(Thompsonetal.，1997)進(jìn)行序列比對。物種間的遺傳距離(P-distances)使用MEGA 5計(jì)算(Tamuraetal.，2011)。在MEGA 7(Kumaretal.，2016)中篩選最適合該數(shù)據(jù)集序列演化模型進(jìn)行最大似然法(Maximum Likelihood，ML)分析和貝葉斯分析(Bayesian Inference，BI)。根據(jù)BIC標(biāo)準(zhǔn)，適合本數(shù)據(jù)集的模型為GTR+G。使用MEGA 7構(gòu)建最大似然樹，系統(tǒng)進(jìn)化樹的測試方法為Bootstrap，重復(fù)次數(shù)設(shè)為1 000，進(jìn)化距離模型選擇General Time Reversible Model，Rates among sites 設(shè)置為Gamma Distributed (G)，分支交換算法設(shè)置為SPR level 3。使用MrBayes 3.2(Ronquistetal.，2012)構(gòu)建BI樹，替換模型設(shè)置為GTR模型，位點(diǎn)間差異比率設(shè)為gamma，使用馬爾可夫鏈-蒙特卡羅(MCMC)數(shù)據(jù)模擬技術(shù)來估算后驗(yàn)概率，運(yùn)算2 000 000代，隔1 000代抽樣一次(王勇等，2009)，并通過設(shè)置參數(shù)“diagnosis”來計(jì)算2個(gè)隨機(jī)起始程序的平均標(biāo)準(zhǔn)差，burn-in即為標(biāo)準(zhǔn)差在0.01以前的抽樣數(shù)，BI 樹即根據(jù)剩余樣本構(gòu)建的50%一致樹(consensus tree)。BI 樹上各分支節(jié)點(diǎn)的支持率以后驗(yàn)概率(posterior probability，PP)表示。

表1 本研究中使用的序列信息Table 1 Sequences used in this study

采用電子數(shù)顯游標(biāo)卡尺對14號標(biāo)本進(jìn)行形態(tài)學(xué)測量，精度為0.1 mm(表2)。測量方法參照Dever等(2012)：頭體長(SVL，從吻端到泄殖孔的長度)、頭長(HL，從吻端到下頜后緣的長度)、頭寬(HW，頭部的最大寬度)、鼻間距(IND，鼻孔間的距離)、眶間距(IOD，兩上眼皮間的最小距離)、骨膜徑(TD，橫向的骨膜直徑)、骨膜與眼間距離(TYE，從骨膜的前緣到后眼角的距離)、鼻眼距(DNE，從鼻孔中央到眼的前緣的距離)、眼寬(EW，前后眼角間的距離)、前眼角距(EWF，兩前眼角間的距離)、后眼角距(EWR，兩后眼角間的距離)、眼瞼寬(ELW，上眼瞼的橫向?qū)挾?、前臂長(FLL，從肘部到第三指末端的長度)、手長(HAL，從外掌突基部到第三指末端的長度)、第三指長(FL3，從第三指和第四指間蹼的基部到第三指末端的長度)、第三指吸盤寬(FDW3，第三指吸盤的最大橫向?qū)挾?、腿長(THL，從泄殖孔到膝關(guān)節(jié)的長度)、脛長(TIL，從膝關(guān)節(jié)到踝關(guān)節(jié)的長度)、足長(FL，從內(nèi)蹠突的近端到第四趾末端的長度)、第四趾長(TL4，從第三個(gè)關(guān)節(jié)下瘤近端到第四趾末端的長度)和第四趾吸盤寬(TDW4，第四趾吸盤的最大橫向?qū)挾?，并將測量結(jié)果與Dever等(2012)的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較(表3)。

表2 克欽湍蛙的形態(tài)測量Table 2 Morphometrical measurements of Amolops afghanus

表3 成體克欽湍蛙、西域湍蛙標(biāo)本和本研究采集標(biāo)本的形態(tài)數(shù)據(jù)比較Table 3 Morphometrics of adult specimens of Amolops afghanus， A. marmoratus， and the specimens in this study

2 結(jié)果

2.1 系統(tǒng)發(fā)育分析

BI 樹和ML 樹顯示出相同的結(jié)果(圖2，圖3)：采集標(biāo)本的序列和網(wǎng)上下載的克欽湍蛙的序列聚在一起，和印緬湍蛙AmolopsindoburmanensisDever， Fuiten， Konu and Wilkinson， 2012互為姊妹群后再與西域湍蛙聚在一起。采集標(biāo)本的序列與網(wǎng)上下載的克欽湍蛙序列的平均遺傳距離為0.05%，與印緬湍蛙的平均遺傳距離為12.65%，與西域湍蛙的平均遺傳距離為12.61%(表4)。

表4 基于16S rRNA計(jì)算的湍蛙屬部分物種間的平均遺傳距離(%)Table 4 Average p-distances (%) among Amolops species based on 16S rRNA gene

圖2 基于16S rRNA 構(gòu)建的湍蛙屬部分物種的最大似然系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 2 Maximum likelihood phylogram of Amolops species based on 16S rRNA gene

圖3 基于16S rRNA 構(gòu)建的湍蛙屬部分物種的貝葉斯系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 3 Bayesian phylogram of Amolops species based on 16S rRNA gene

2.2 形態(tài)特征

體型較大，雄性體長46.4～56.5 mm，雌性體長74.7～89.7 mm。頭扁平，頭寬略大于頭長；吻鈍圓，突出于下頜；吻棱顯著；頰部略凹；眼間和額部區(qū)域平；鼻孔位于吻與眼間略偏吻端的位置；鼻間距大于眼間距；眼大，瞳孔橫置；眼間距離大于上瞼寬；鼓膜較明顯，小而圓，直徑小于眼徑之半；犁骨齒發(fā)達(dá)；舌向兩側(cè)擴(kuò)展，后半部游離，后端具“U”形缺刻。

前肢長，前臂及手長大于體長之半；指細(xì)長，所有指端具吸盤，指吸盤均有邊緣溝，第三指端吸盤最大，遠(yuǎn)大于骨膜直徑；指長序?yàn)棰?Ⅱ<Ⅳ<Ⅲ，第三指長小于前臂長。

后肢長，前伸貼體時(shí)脛跗關(guān)節(jié)超過吻端；左、右跟部重疊；脛長略大于體長之半；趾間全蹼，趾端吸盤略小于指端吸盤，趾吸盤均有邊緣溝；趾長序?yàn)棰?Ⅱ<Ⅲ<Ⅴ<Ⅳ。

雄蛙體背、體側(cè)和四肢背面均散以圓疣；雌蛙體背和四肢背面較光滑，體側(cè)和肛門附近有少數(shù)圓疣；顳褶短而厚，從眼延伸到骨膜后方；無背側(cè)褶；雄性第一指基部具婚墊，有1對咽側(cè)下外聲囊。

雄蛙背面橄欖綠色或黃色，有成片的褐色或棕色花斑；雌蛙背面黃色，有塊狀的褐色或棕色花斑；四肢背面有深色橫紋；腹部乳白色，無斑或散有灰色斑(圖4)。

圖4 成體雄性(上)和成體雌性(下)克欽湍蛙Fig. 4 Adult male (top) and adult female (bottom)Amolops afghanus

2.3 生態(tài)特征

克欽湍蛙標(biāo)本于夜間采自云南省德宏傣族景頗族自治州盈江縣、隴川縣和瑞麗市海拔200～1 300 m河流邊的巖石或樹枝上。與克欽湍蛙同生境分布的有圓斑臭蛙O.rotodora、云南臭蛙O.andersonii、隴川大頭蛙Limnonecteslongchuanensis、楊氏原指樹蛙Kurixalusyangi、隴川灌樹蛙Raorchesteslongchuanensis、斑腿泛樹蛙Polypedatesmegacephalus、白頜大樹蛙Zhangixalussmaragdinus、腺角蟾Megophrysglandulosa、費(fèi)氏角蟾M.feii、盈江掌突蟾Leptobrachellayingjiangensis、蚌西擬樹蜥Pseudocaloteskakhienensis和盈江竹葉青蛇Trimeresurusyingjiangensis。成年雌性克欽湍蛙個(gè)體遠(yuǎn)大于雄性，曾見一雌性個(gè)體將一同種雄性個(gè)體吞食，說明個(gè)體較大的克欽湍蛙有捕食個(gè)體較小蛙類甚至同類的習(xí)性。

3 討論

克欽湍蛙Amolopsafghanus曾被認(rèn)為是西域湍蛙Amolopsmarmoratus的同物異名，直到Dever等(2012)恢復(fù)了其有效性。此前眾多中文文獻(xiàn)都在使用Amolopsafghanus和Amolopsmarmoratus這2個(gè)拉丁名，但其對應(yīng)的中文名均為西域湍蛙(田婉淑，江耀明，1986；費(fèi)梁等，1990，2005，2009，2010，2012；楊大同，1991；費(fèi)梁，1999；楊大同，饒定齊，2008)，這些學(xué)者認(rèn)為Amolopsafghanus和Amolopsmarmoratus是同一個(gè)物種即西域湍蛙，由此推測，此期間中國學(xué)者發(fā)表的英文文獻(xiàn)中Amolopsafghanus指的也是西域湍蛙(Liu，1950；Liuetal.，2000)，均認(rèn)為國內(nèi)分布有西域湍蛙?？藲J湍蛙恢復(fù)有效性后，國內(nèi)依然只記載有西域湍蛙分布而沒有記載克欽湍蛙分布，直到Lyu等(2019)將原記錄分布在云南西部的西域湍蛙改訂為克欽湍蛙。

Lyu等(2019)依據(jù)分子數(shù)據(jù)分析認(rèn)為云南西部分布的是克欽湍蛙而不是西域湍蛙，但并未對產(chǎn)自云南西部的克欽湍蛙進(jìn)行形態(tài)描述。本研究綜合了云南德宏湍蛙標(biāo)本的分子及形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)，與Lyu等(2019)的結(jié)論一致。又經(jīng)查閱，中國科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所昆明動(dòng)物博物館兩棲爬行動(dòng)物標(biāo)本庫內(nèi)的“西域湍蛙”標(biāo)本均產(chǎn)自云南省德宏傣族景頗族自治州(盈江縣、隴川縣、瑞麗市)，且全部為克欽湍蛙，因而支持將原記錄分布在云南德宏的西域湍蛙改訂為克欽湍蛙。

至于西域湍蛙在西藏自治區(qū)的記載，最初是Annandale(1912)在墨脫采集到1號標(biāo)本(ZSIC 16950)并描述為Ixalusargus，后來被Boulenger(1920)和Dubois(1974)定為Amolopsafghanus的同物異名，后來又被Dubois(1992)定為Amolopsmarmoratus的同物異名。此后對西藏自治區(qū)有西域湍蛙分布的記載皆來源于此，再無新的記錄。依據(jù)Dever等(2012)的研究，克欽湍蛙分布在緬甸北部，而西域湍蛙則分布在緬甸南部。西藏墨脫較接近于緬甸北部而離緬甸南部甚遠(yuǎn)，由此推測西藏墨脫更可能分布有克欽湍蛙而非西域湍蛙。

結(jié)合Lyu等(2019)的結(jié)果，目前克欽湍蛙在中國的分布范圍包括云南省保山市龍陵縣，德宏傣族景頗族自治州盈江縣、隴川縣和瑞麗市。由于目前尚未采集到且未查閱到西藏墨脫的相關(guān)標(biāo)本，西藏墨脫是否有克欽湍蛙分布還有待進(jìn)一步研究確定。

致謝：感謝歐陽德才和歐陽磊在野外考察時(shí)的協(xié)助；感謝同事們的幫助和建議；感謝審稿人對稿件修改的寶貴意見；感謝中國科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所昆明動(dòng)物博物館李維薇副館長給予考察的支持；在此謹(jǐn)表謝忱！