趙 琳，王慶云，鄒秋萍

（安陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 安陽(yáng)455000）

偽狂犬?。≒R）是由偽狂犬病病毒引起家畜和多種野生動(dòng)物的一種急性傳染病。PR 最早發(fā)生于1813 年美國(guó)的牛群，病牛極度瘙癢，最后死亡。因此該病也被稱為“瘋癢病”。瑞士于1849年首次采用“偽狂犬病”這一名詞，這是因?yàn)椴∨５呐R床診斷癥狀與狂犬病相似。1902年匈牙利學(xué)者Aujeszky證明由病毒引起，故命名為奧耶斯基病。目前，豬、牛及綿羊等動(dòng)物的發(fā)病率逐年增加，山羊感染偽狂犬病比較少見(jiàn)。除豬以外的其他動(dòng)物發(fā)病后通常具有發(fā)熱、奇癢及腦脊髓炎等典型癥狀，均為致死性感染，給養(yǎng)殖戶帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。病豬、帶毒豬以及帶毒鼠類為該病重要傳染源，偽狂犬病毒對(duì)外界抵抗力較強(qiáng)，在污染的豬舍能存活1個(gè)多月。2020年3月，安陽(yáng)市某養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的158只山羊中有4只山羊發(fā)病，均為母羊，且有3只處于懷孕期間，其中已有2 只先后死亡，潛伏期短，病程短，病死率高，疑似為山羊偽狂犬病。

1 臨床診斷

1.1 臨床癥狀

該養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)波爾山羊共158只，當(dāng)日，有4只母山羊發(fā)病，且有3 只處于懷孕期間；發(fā)病羊體溫升高至42 ℃，頭部搖晃，食欲減退，神志不清，出現(xiàn)磨牙等神經(jīng)癥狀，頭頸、尾部因奇癢出現(xiàn)蹭墻，撕咬，呈犬坐姿勢(shì)使勁在地上摩擦，奇癢部位因強(qiáng)烈搔癢而引發(fā)脫毛、水腫，輕微出血；后期，羊只站立不安，最終臥地不起。次日，2只發(fā)病母羊先后死亡，死前口吐白沫。

1.2 病理剖檢

剖檢病死羊，可見(jiàn)心內(nèi)外膜出血，心耳大理石花紋，心臟瓣膜出血，冠狀溝明顯出血，心肌壞死，心包積液；胸腔外膜出血；肺出血壞死，片狀水腫；肝臟點(diǎn)狀壞死灶；小腸輕度脹氣；腎斑狀出血，片狀出血，水腫；腸系膜淋巴出血；脾臟水腫，肌肉水腫。組織變化可見(jiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)呈彌漫性非化膿性腦膜炎和神經(jīng)節(jié)炎，出現(xiàn)明顯膠質(zhì)細(xì)胞壞死，病變部位周圍細(xì)胞可見(jiàn)與神經(jīng)細(xì)胞一樣的核內(nèi)包涵體。

2 實(shí)驗(yàn)室診斷

2.1 細(xì)菌學(xué)檢查

在無(wú)菌條件下采集病羊腦、肝、脾、腎等組織樣品涂片進(jìn)行革蘭氏染色然后鏡檢，并接種營(yíng)養(yǎng)肉湯蛋白胨培養(yǎng)基、血平板培養(yǎng)基在37℃條件下進(jìn)行有氧和厭氧兩種方式培養(yǎng)，48 h后觀察結(jié)果，均未發(fā)現(xiàn)病原菌。

2.2 血清學(xué)檢測(cè)

對(duì)發(fā)病羊只進(jìn)行采血，獲得全血后，于37℃培養(yǎng)箱靜置2 h，再放置4℃冰箱過(guò)夜，次日2 500 r/min 離心5 min，取上清備用。采用偽狂犬病病毒gE抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)采集血清進(jìn)行抗體檢測(cè)，結(jié)果樣品為PRV gE抗體陽(yáng)性。gE抗體的存在表明豬曾感染PRV 的野毒株和/或接種過(guò)含gpI抗原的疫苗。而此養(yǎng)殖戶未給飼養(yǎng)羊只接種過(guò)偽狂犬疫苗，從而判斷受檢羊只為PRV野毒株感染羊只。

表1 偽狂犬gE抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 分子病原學(xué)檢測(cè)

采集病羊扁桃體、淋巴結(jié)等組織病變部與健康部交界處組織，共3份組織，每份組織分別從3個(gè)不同位置剪取樣品1 g左右，放入2 ml離心管內(nèi)，加入研磨專用不銹鋼珠2粒，生理鹽水1.5 ml，放入自動(dòng)研磨儀進(jìn)行研磨，1 min后取出，放入4℃高速冷凍離心機(jī)8 000 r/min 離心2 min，取上清備用。采用核酸提取試劑盒對(duì)樣本進(jìn)行處理后放入核酸自動(dòng)提取儀進(jìn)行核酸提取，提取物按試劑盒方法處理后置于熒光定量PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)增。結(jié)果顯示3 份樣品均為偽狂犬核酸陽(yáng)性。

表2 偽狂犬病毒核酸熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果

3 防控

將發(fā)病羊只全部撲殺，病死羊只全部焚燒進(jìn)行無(wú)害化處理，其余羊只隔離圈養(yǎng)，密切觀察。

用1%～2%氫氧化鈉、10%～20%生石灰對(duì)羊舍及周邊環(huán)境進(jìn)行全方位噴灑消毒，水槽等用具及飼料也進(jìn)行相應(yīng)消毒。

對(duì)暫無(wú)癥狀的羊只使用豬偽狂犬雙基因缺失疫苗按照2頭份/只進(jìn)行偽狂犬疫苗緊急接種，電解多維飲水，提高羊只免疫力。羊群在免疫1 w 內(nèi)禁用其他抗病毒和激素類藥物，確保疫苗抗體的有效產(chǎn)生。

4 討論

該養(yǎng)殖戶的山羊和豬混養(yǎng)，其飼養(yǎng)的豬只和山羊均未免疫過(guò)偽狂犬疫苗，豬只也未見(jiàn)發(fā)病，分析其原因，該養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的山羊可能被攜帶病毒卻未發(fā)病的豬只、老鼠或其排泄物經(jīng)多種途徑感染而發(fā)病。豬只對(duì)該病毒具有一定的抵抗力，部分豬只感染后隱性帶毒成為重要的傳染源，建議山羊與豬分別飼養(yǎng)，豬只和山羊同時(shí)做好偽狂犬疫苗的接種，山羊飼料要定期檢查，避免病毒污染。

此次發(fā)病山羊的病原學(xué)檢測(cè)使用全自動(dòng)核酸提取儀和普通熒光定量PCR儀，儀器操作時(shí)間為2.5 h，快速地診斷了發(fā)病病種，如果使用快速熒光定量PCR儀，1 h內(nèi)就可讀取試驗(yàn)結(jié)果。近年來(lái)，熒光定量PCR技術(shù)已非常成熟，各縣區(qū)動(dòng)物疫病防控機(jī)構(gòu)都已經(jīng)配備熒光定量PCR 儀，相比傳統(tǒng)的PCR，熒光定量PCR 靈敏性特異性有了顯著提高，并且速度快、安全無(wú)污染。這使得我們?cè)谳^短時(shí)間內(nèi)可以安全準(zhǔn)確地確定動(dòng)物發(fā)病原因，快速高效地分析病毒在動(dòng)物體內(nèi)的增殖情況。熒光定量PCR技術(shù)是較為推薦的病原學(xué)檢測(cè)手段。

養(yǎng)殖場(chǎng)戶可定期對(duì)飼養(yǎng)羊只進(jìn)行抗體水平檢測(cè)，確保羊只免疫具有較高的保護(hù)力。采集羊血清，首先使用偽狂犬病毒gE 抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，如果偽狂犬病毒gE 抗體陽(yáng)性，則說(shuō)明羊只遭受野毒感染，可予以淘汰；如果偽狂犬病毒gE 抗體陰性，則使用偽狂犬病毒gB抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，如若使用IDEXX 偽狂犬病毒gB 抗體檢測(cè)試劑盒，檢測(cè)值小于等于0.6，則證明羊只體內(nèi)產(chǎn)生了疫苗免疫抗體，但通過(guò)長(zhǎng)期試驗(yàn)證明，當(dāng)gB 抗體檢測(cè)值小于等于0.2 時(shí)，疫苗免疫保護(hù)力較高，建議gB抗體檢測(cè)值大于0.2時(shí)，對(duì)飼養(yǎng)羊只及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免。