何華龍, 馮盞盞, 高添桃, 余洛汀*, 奉 強(qiáng)

(1. 四川大學(xué) 化學(xué)工程學(xué)院，四川 成都 610041； 2. 四川大學(xué) 生物治療國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610041； 3. 成都師范學(xué)院 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，四川 成都 611130)

癌癥是當(dāng)前世界上最嚴(yán)重的社會(huì)健康問(wèn)題之一[1]。合成致死是一種非常好的癌癥治療策略[2]。2014年，F(xiàn)DA批準(zhǔn)Olapaib用于治療既往接受過(guò)兩次以上治療且攜帶種系BRCA突變的晚期卵巢癌患者，它是一種靶向聚ADP核糖聚合酶(Poly ADP-ribose Polymerase)的癌癥療法，也是第一種成功利用合成致死(Synthetic Lethality)概念獲得批準(zhǔn)在臨床使用的抗癌藥物[3]。PARP-1主要的生物功能是參與單鏈DNA斷裂(single-strand DNA breaks,SSBs)的損傷修復(fù)過(guò)程[4-8]，Brca1/2主要的生物功能是參與雙鏈DNA斷裂(double-strandDNA breaks， DSBs)的損傷修復(fù)過(guò)程[9]。而當(dāng)兩個(gè)修復(fù)過(guò)程均被抑制時(shí)，DNA修復(fù)過(guò)程會(huì)受到阻滯從而積累更多的斷裂DNA，從而導(dǎo)致染色體畸變最終引起細(xì)胞死亡。

Chart 1

Scheme 1

鄰苯二甲酰亞胺衍生物通常呈現(xiàn)多樣的生物活性，因此近年來(lái)針對(duì)鄰苯二甲酰亞胺分子的結(jié)構(gòu)修飾被廣泛研究[10-13]。酰亞胺氮上取代的衍生物是鄰苯二甲酸酐與伯胺類化合物的縮合分子，他們可以作為新生血管生成抑制劑[14]和免疫調(diào)節(jié)劑[15-16]。PARP-1抑制劑通常是胺甲?；讲㈦s環(huán)衍生物，芳環(huán)甲酰胺是抑制該酶必不可少的活性結(jié)構(gòu)[17]。 NMS-P118是一種有效的、具有口服活性、高度選擇性的PARP-1抑制劑，具有良好的藥物吸收和藥物動(dòng)力學(xué)特性，對(duì)PARP-1的選擇性比對(duì)PARP-2高150倍[18]。因此，我們基于PARP-1抑制劑NMS-P118設(shè)計(jì)以N-取代鄰苯二甲酰亞胺-4-甲酰胺為母核(Chart 1)的一系列化合物。

Brca1/2突變型的癌細(xì)胞系會(huì)對(duì)PARP-1抑制劑非常敏感，這是因?yàn)锽rca1/2缺陷時(shí)同時(shí)抑制PARP-1會(huì)引起合成致死[3]，導(dǎo)致癌細(xì)胞死亡。因此本文采用Brca2突變型胰腺癌細(xì)胞系Capan-1對(duì)化合物的活性進(jìn)行測(cè)試，同時(shí)選取三陰性乳腺癌細(xì)胞系MDA-BA-231作為陽(yáng)性對(duì)照。

N-取代鄰苯二甲酰亞胺-4-甲酰胺母核是作為PARP-1抑制劑一類全新的骨架。以1,2,3-苯三甲酸(1)為原料，在加熱條件下進(jìn)行分子內(nèi)脫水得到3-羧酸鄰苯二甲酸酐(2)；2分別與不同取代伯胺胺解，得到N-取代鄰苯二甲酰亞胺-4-羧酸衍生物(3a～3s)； 后者再與氨發(fā)生酰胺縮合反應(yīng)得到N-取代鄰苯二甲酸亞胺-4-甲酰胺(4a～4s)，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR,13C NMR和HR-MS(ESI-TOF)表征。采用MTT法研究了4對(duì)胰腺癌細(xì)胞系Capan-1和乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231的抗癌活性。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Bruker-400 MHz型核磁共振儀(DMSO-d6為溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo))； MicroTMQ-TOF型高分辨質(zhì)譜儀。

中間體2按文獻(xiàn)[19]方法制備； 其余所用溶劑均為分析純。

1.2 合成

(1)3a～3s的合成(以3a為例)

取21.92 g(10 mmol)、醋酸鉀(10 mmol)、 4-(4-嗎啉基)苯胺1.96 g(11 mmol)溶解于15 mL乙酸中， 120 ℃回流反應(yīng)1.5 h(TLC監(jiān)測(cè))。倒入30 mL冰水中，有固體析出，過(guò)濾，濾餅用甲醇回流2 h。趁熱過(guò)濾，干燥得棕色固體3a0.98 g，收率27%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.71～7.61(m, 2H), 7.52(dd,J=6.7 Hz, 2.1 Hz, 1H), 7.25～7.19(m, 2H), 7.08～7.01(m, 2H), 3.76(t,J=4.8 Hz, 4H), 3.17(t,J=4.8 Hz, 4H)。

(2)4a～4s的合成(以4a為例)

取3a0.35 g(1 mmol), EDCI 0.34 g(1.8 mmol), HOAt 0.24 g(1.8 mmol), NMM 0.5 g(5 mmol)溶解于20 mL 氯仿中，反應(yīng)1 h，加入7 M氨的甲醇溶液1 mL，繼續(xù)攪拌5 h(TLC監(jiān)測(cè))。反應(yīng)液加水30 mL，攪拌15 min后分液，水相用二氯甲烷(2×20 mL)萃取，合并有機(jī)相，依次用水50 mL，飽和食鹽水50 mL洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑得化合物4a粗品，經(jīng)硅膠柱層析(洗脫劑：DCM/MeOH=15/1,V/V)純化得橘黃色固體4a0.12g，收率34.3%。

用類似方法合成4b～4s。

2-(4-嗎啉基苯基)-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4a)： 橘黃色固體，收率34.3%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.51(s, 1H), 8.10(d,J=7.7 Hz, 1H), 8.03(d,J=7.2 Hz, 1H), 7.94(t,J=7.6 Hz, 1H), 7.87(s, 1H), 7.31～7.21(m, 2H), 7.10～7.00(m, 2H), 3.76(t,J=4.7 Hz, 4H), 3.18(t,J=4.8 Hz, 4H)；13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ:168.21, 167.08, 166.80, 138.41, 135.15, 134.55, 134.22, 134.09, 133.61, 130.14, 129.48, 125.22, 120.54, 60.54, 53.92； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C19H17N3O4{[M+H]+}352.1292， found 352.1230。

2-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4b)： 白色固體，收率39.2%；1H NMR(400 MHz, Chloroform-d)δ: 9.98(s, 1H), 8.76(dd,J=8.0 Hz, 1.2 Hz, 1H), 8.13(dd,J=7.3 Hz, 1.2 Hz, 1H), 7.92(t,J=7.7 Hz, 1H), 7.27(d,J=6.9 Hz, 2H), 7.07～7.00(d,J=8.9 Hz, 2H), 6.00(s, 1H), 3.29(t,J=5.1 Hz, 4H), 2.61～2.56(m, 4H), 2.37(s, 3H)；13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ: 168.11, 167.08, 166.88, 138.55, 135.21, 134.57, 134.41, 134.21, 133.68, 130.24, 129.51, 125.42, 120.77, 57.54, 53.92, 44.32； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C20H20N4O3{[M+H]+}365.1608， found 365.1610。

2-[4-(三氟甲氧基)苯基] -1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4c)： 亮黃色固體，收率47.3%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ:8.91(s, 1H), 8.21(d,J=7.7 Hz, 1H), 8.01(d,J=7.3 Hz, 1H), 7.76(t,J=7.6 Hz, 1H), 7.55(s, 1H), 7.49(dd,J=8.9 Hz, 5.1 Hz, 2H), 7.39(dd,J=8.9 Hz, 2H)；13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ: 167.48, 166.79, 166.15, 160.83, 146.27, 135.21, 134.39, 132.29, 130.11, 129.98, 129.69, 128.28, 128.11, 125.65, 116.82, 116.39; HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C16H9N2O4F3{[M+Na]+}373.0412， found 373.0416。

2-[4-(吡咯烷-1-基甲基)苯基]-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4d)： 黃色固體，收率31.5%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 10.89(s, 1H), 8.08(d,J=7.3 Hz, 1H), 7.97(t,J=6.9 Hz, 1H), 7.92(d,J=7.5 Hz, 1H), 7.68(d,J=8.1 Hz, 2H), 7.35(d,J=8.2 Hz, 2H), 3.70(s, 2H), 2.61～2.57(m, 4H), 1.75(q,J=3.8 Hz, 3.3 Hz, 4H)；13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ: 169.64, 169.00, 163.26, 138.26, 134.94, 134.55, 134.11, 134.07, 133.45, 129.74, 129.48, 125.05, 119.93, 59.24, 53.79, 23.49； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C20H19N3O3{[M+H]+}350.1499， found 350.1508。

2-[4-(惡唑-2-基)苯基]-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4e)： 黃色固體，收率31.1%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.50(s, 1H), 8.42(d,J=3.9 Hz, 1H), 8.11(dd,J=7.7 Hz, 1.1 Hz, 1H), 8.07(dd,J=7.5 Hz, 1.1 Hz, 1H), 7.97(t,J=7.6 Hz, 1H), 7.90(d,J=8.6 Hz, 2H), 7.78(s, 1H), 7.58(d,J=8.6 Hz, 2H)；13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ: 167.11, 166.58, 166.20, 152.67, 150.37, 135.17, 135.13, 134.55, 132.38, 132.14, 128.46, 128.14, 127.58, 125.30, 125.03, 123.27； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C18H11N3O4{[M+Na]+}356.0642， found 356.0648。

2-(4-氟苯基)-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4f)： 白色固體，收率45.2%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.45(s, 1H), 8.11(d,J=7.7 Hz, 1H), 8.06(d,J=7.3 Hz, 1H), 7.96(t,J=7.6 Hz, 1H), 7.89(s, 1H), 7.51(dd,J=8.7 Hz, 5.1 Hz, 2H), 7.39(t,J=8.7 Hz, 2H)；13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ: 167.31, 166.69, 166.11, 163.18, 160.74, 135.13, 134.44, 132.42, 130.23, 130.14, 128.39, 128.17, 125.31, 116.46, 116.23; HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C15H9N2O3F{[M+Na]+}307.0495， found 307.054 7。

2-(4-氟-3-硝基苯)-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4g)： 白色固體，收率25.9%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 11.62(s, 1H), 11.20(s, 1H), 8.71～8.58(m, 1H), 8.06(d,J=7.4 Hz, 1H), 7.98(dt,J=10.9 Hz, 5.5 Hz, 3H), 7.64(t,J=10.1 Hz, 1H)；13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ: 169.11, 168.81, 164.18, 152.56, 149.98, 136.90, 135.88, 135.11, 134.24, 133.41, 129.55, 127.43, 125.34, 119.50, 116.48； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C18H8O5F3{[M+K]+}368.0085， found 368.0117。

2-[4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基]-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4h)： 黃色固體，收率32.9%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.45(s, 1H), 8.12(d,J=7.7 Hz, 1H), 8.06(d,J=7.3 Hz, 1H), 7.96(t,J=7.6 Hz, 1H), 7.90(s, 1H), 7.74(d,J=15.4 Hz, 2H), 7.45(d,J=8.8 Hz, 1H), 3.97(s, 3H);13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ: 167.40, 166.73, 166.07, 157.19, 135.15, 135.12, 134.38, 133.94, 132.47, 128.20, 126.63, 126.58, 125.32, 125.08, 124.33, 114.01, 57.0； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C17H11N2O4F3{[M+Na]+}387.0569， found 387.0568。

2-[4-(叔丁基)苯基]-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4i)： 白色固體，收率42.1%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.47(s, 1H), 8.13～8.07(m, 1H), 8.05(dd,J=7.5 Hz, 1.2 Hz, 1H), 7.95(t,J=7.6 Hz, 1H), 7.88(s, 1H), 7.61～7.52(m, 2H), 7.40～7.33(m, 2H), 1.34(s, 9H)；13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ: 167.45, 166.85, 166.17, 151.29, 135.08, 135.06, 134.42, 132.42, 129.51, 128.18, 127.47, 126.19, 125.24, 34.97, 31.56； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C19H18N2O3{[M+Na]+}345. 1215， found 345.1211。

2-(3,5-二甲氧基苯基)-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4j)： 白色固體，收率40.4%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.45(s, 1H), 8.10(d,J=7.7 Hz, 1H), 8.05(d,J=7.3 Hz, 1H), 7.95(t,J=7.6 Hz, 1H), 7.88(s, 1H), 6.67～6.57(m, 3H), 3.77(s, 6H)；13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ: 167.15, 166.53, 166.14, 160.87, 135.09, 134.45, 133.75, 132.39, 128.10, 125.26, 106.56, 100.66, 55.96； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C17H14N2O5{[M+Na]+}349.0800， found 349.0800。

2-(1-乙?；哙?4-基)-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4k)： 白色固體，收率43.4%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.47(s, 1H), 8.03(dd,J=7.7 Hz, 1.2 Hz, 1H), 7.94(dd,J=7.5 Hz, 1.3 Hz, 1H), 7.90～7.82(m, 2H), 4.59～4.45(m, 1H), 4.28(tt,J=12.2 Hz, 4.1 Hz, 1H), 4.00～3.86(m, 1H), 3.13(dd,J=13.7 Hz, 2.6 Hz, 1H), 2.60(td,J=13.0 Hz, 2.7 Hz, 1H), 2.21(qd,J=12.5 Hz, 4.3 Hz, 1H), 2.04(m, 4H), 1.81～1.66(m, 2H)；13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ: 168.52, 168.01, 167.42, 166.14, 134.84, 134.79, 134.09, 132.28, 127.99, 124.83, 48.89, 45.72, 40.87, 29.50, 28.75, 21.73； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C16H17N4O4{[M+Na]+}338.1192， found 338.1117。

2-(1-芐基哌啶-4-基)-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4l)： 白色固體，收率40.4%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.49(s, 1H), 8.04(d,J=7.6 Hz, 1H), 7.94(d,J=7.3 Hz, 1H), 7.90～7.83(m, 2H), 7.44～7.18(m, 5H), 4.02(t,J=12.1 Hz, 1H), 3.53(s, 2H), 2.94(d,J=11.3 Hz, 2H), 2.34(tt,J=12.7 Hz, 7.3 Hz, 2H), 2.06(t,J=11.8 Hz, 2H), 1.72～1.54(m, 2H)；13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ: 168.09, 167.49, 166.14, 138.94, 134.82, 134.75, 134.05, 132.29, 129.21, 128.65, 127.97, 127.37, 124.79, 62.32, 53.09, 49.42, 28.85； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C21H21N3O3{[M+H]+}364.1656， found 364.1661。

2-[1-(4,4-二氟環(huán)己基)哌啶-4-基]-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4m)： 白色固體，收率46.3%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.49(s, 1H), 8.03(dd,J=7.7 Hz, 1.3 Hz, 1H), 7.93(dd,J=7.4 Hz, 1.3 Hz, 1H), 7.90～7.81(m, 2H), 3.97(ddd,J=15.8 Hz, 9.6 Hz, 4.1 Hz, 1H), 2.94(d,J=9.0 Hz, 2H), 2.47～2.55(m, 1H), 2.38～2.17(m, 4H), 2.04(q,J=10.9 Hz, 9.5 Hz, 2H), 1.91～1.72(m, 4H), 1.71～1.61(m, 2H), 1.61～1.46(m, 2H)；13C NMR (101 MHz, DMSO-d6)δ: 168.10, 167.50, 166.14, 134.82, 134.75, 134.04, 132.31, 127.98, 124.79, 60.21, 49.73, 49.02, 32.71, 32.47, 32.24, 29.34, 24.63, 24.54； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C20H23N3O3F2{[M+H]+}392.1780， found 392.1785。

2-(1-苯基哌啶-4-基)-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4n)： 白色固體，收率42.1%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.48(s, 1H), 8.04(d,J=7.5 Hz, 1H), 7.95(d,J=6.9 Hz, 1H), 7.90～7.86(m, 1H), 7.85(s, 1H), 7.27～7.14(m, 2H), 6.98(d,J=8.2 Hz, 2H), 6.77(t,J=7.3 Hz, 1H), 4.21(tt,J=12.1 Hz, 3.8 Hz, 1H), 3.84(d,J=12.5 Hz, 2H), 2.84～2.73(m, 2H), 2.41(qd,J=12.7 Hz, 4.0 Hz, 2H), 1.82～1.69(m, 2H)；13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ: 168.22, 167.55, 166.21, 139.23, 134.91, 134.81, 134.15, 132.40, 129.61, 128.77, 130.01, 127.66, 124.97, 53.16, 49.62, 28.91； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C20H19N3O3{[M+H]+}349.1499， found 350.1571。

2-[(1-甲基磺?；?哌啶-4-基]-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4o)： 白色固體，收率32.7%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.48(s, 1H), 8.05(d,J=7.6 Hz, 1H), 7.95(d,J=7.3 Hz, 1H), 7.92～7.83(m, 2H), 4.18(tt,J=12.4 Hz, 4.0 Hz, 1H), 3.76～3.63(m, 2H), 2.95～2.82(m, 5H), 2.33(qd,J=12.8 Hz, 4.4 Hz, 2H), 1.83(dd,J=13.3 Hz, 3.9 Hz, 2H)；13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ: 167.98, 167.40, 166.12, 134.86, 134.80, 134.07, 132.29, 127.99, 124.86, 48.22, 45.67, 35.15, 28.40； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C15H17N3O5S{[M+Na]+}374.0787， found 374.0860。

2-{(1R)-1-[(1R,3R,5S)-金剛烷-1-基]基}-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4p)： 白色固體，收率35.6%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.52(d,J=19.7 Hz, 1H), 8.03(dd,J=7.1 Hz, 4.8 Hz, 1H), 7.89(ddt,J=19.8 Hz, 17.0 Hz, 10.0 Hz, 3H), 3.92(qd,J=7.3 Hz, 3.9 Hz, 1H), 1.93(s, 4H), 1.60(m, 12H), 1.42(d,J=7.3 Hz, 3H)；13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ: 169.07, 168.46, 166.34, 134.90, 134.68, 134.10, 132.47, 128.19, 124.84, 56.76, 39.36, 37.72, 36.78, 28.27, 11.79； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C21H24N2O3{[M+Na]+}375.1685， found 375.1685。

2-[(1R,3R,5S)-金剛烷-1-基]-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4q)： 白色固體，收率37.6%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 11.58(s, 1H), 8.87(s, 1H), 8.06(m, 1H), 7.89(dd,J=7.5 Hz, 1H), 7.85(d,J=7.4 Hz, 1H), 2.12～2.02(m, 9H), 1.68(d,J=2.8 Hz, 6H)；13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ: 170.42, 168.98, 162.95, 135.01, 134.77, 134.66, 133.52, 129.23, 124.78, 52.17, 41.18, 36.53, 29.30； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C19H20N2O3{[M+Na]+}347.1372， found 347.1376。

2-(環(huán)己基甲基)-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4r)： 白色固體，收率47.2%；1H NMR(400 MHz, Chloroform-d)δ: 10.01(s, 1H), 8.69(dd,J=8.1 Hz, 1.2 Hz, 1H), 8.03(dd,J=7.3 Hz, 1.2 Hz, 1H), 7.86(t,J=7.7 Hz, 1H), 6.07(s, 1H), 3.58(d,J=7.2 Hz, 2H), 1.88～1.60(m, 6H), 1.31～1.13(m, 3H), 1.12～0.96(m, 2H)；13C NMR(101 MHz, Chloroform-d)δ: 170.47, 167.28, 164.31, 137.82, 134.31, 132.44, 131.30, 128.34, 126.47, 44.71, 36.91, 30.79, 26.15, 25.61； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C16H18N2O3{[M+Na]+}309.1287， found 309.1215。

2-[(4-甲基-2-氧-1,2,5,6,7,8-六氫喹啉-3-基)甲基]-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(4s)： 白色固體，收率27.2%；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 11.14(s, 1H), 8.62(s, 1H), 8.05(dt,J=7.6 Hz, 1.7 Hz, 1H), 7.92(dd,J=7.5 Hz, 1.2 Hz, 1H), 7.89～7.84(m, 1H), 7.84(s, 1H), 3.57(s, 2H), 2.42(d,J=5.4 Hz, 2H), 2.35(q,J=6.1 Hz, 2H), 2.13(s, 3H), 1.64(dd,J=8.1 Hz, 4.7 Hz, 4H)；13C NMR(101 MHz, DMSO-d6)δ: 168.03, 166.98, 165.95, 161.40, 150.55, 141.28, 134.88, 134.71, 133.81, 132.55, 128.00, 124.91, 120.05, 112.32, 35.35, 26.96, 24.33, 22.75, 21.45, 15.86； HR-MS(ESI-TOF)m/z： Calcd for C20H19N3O4{[M+Na]+}388.1273， found 388.1277。

1.3 體外抗癌活性測(cè)試

采用MTT法測(cè)試了化合物4a～4s對(duì)Brca2缺陷型胰腺癌細(xì)胞系Capan-1和乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231增殖抑制實(shí)驗(yàn)。收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，將細(xì)胞重懸成濃度為6×103個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，按著每孔100 μL細(xì)胞懸液將細(xì)胞接種到96孔板中，并置于37 ℃、 5%的CO2細(xì)胞孵箱中孵育過(guò)夜。24 h后，按60 μM、 20 μM、 6.66 μM、 2.22 μM、 0.74 μM和0.24 μM 6個(gè)濃度將化合物用細(xì)胞培養(yǎng)基梯度3倍稀釋，稀釋后的藥物按每孔100μL藥液加入到96孔板中，每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。并用含有0.1%的DMSO培養(yǎng)基處理細(xì)胞作為空白對(duì)照。將細(xì)胞培養(yǎng)板在細(xì)胞孵箱中繼續(xù)孵育6 d， 3 d換一次藥。每孔加入20 μL MTT溶液(5 mg/mL)后，在孵箱中繼續(xù)培養(yǎng)2～4 h后終止培養(yǎng)，小心吸棄上清液； 每孔加入150 μL二甲亞砜溶劑，在搖床上輕搖15～20 min，使藍(lán)色結(jié)晶物充分溶解； 設(shè)定波長(zhǎng)為570 nm，利用酶標(biāo)儀測(cè)定每孔的光吸收值，記錄結(jié)果。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次以上，計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。

2 結(jié)果與討論

2.1 合成

(1)2的合成

根據(jù)文獻(xiàn)[19]，這里選擇無(wú)溶劑反應(yīng)。所購(gòu)原料為顆粒狀，也有部分結(jié)成塊，反應(yīng)前需用研缽研均勻。反應(yīng)從毫克級(jí)到克級(jí)均很穩(wěn)定，副產(chǎn)物僅為水，無(wú)需進(jìn)一步后處理，收率基本為100%。

(2)2的結(jié)構(gòu)

從1,2,3-苯三甲酸到中間體2僅脫了一分子水，1H NMR發(fā)現(xiàn)原料與產(chǎn)物譜圖類似，同時(shí)重水交換后發(fā)現(xiàn)羧酸并不顯活性氫，無(wú)法明確判斷二者區(qū)別，這一結(jié)論與文獻(xiàn)[19]一致。因此我們進(jìn)一步表征了13C NMR，發(fā)現(xiàn)1,2,3-苯三甲酸的羰基碳僅在δ169.74處出峰，而反應(yīng)后羰基碳的峰有δ169.92和169.07兩處。

(3)3的合成[20-22]

參考文獻(xiàn)方法，反應(yīng)僅有一個(gè)副產(chǎn)物，即N,2-雙(4-嗎啉基苯基)-1,3-二氧代異吲哚-4-甲酰胺(其他化合物類似)，甲醇回流攪洗即可將其與目標(biāo)產(chǎn)物分離，整體收率為30%～50%。

(4)4的合成

經(jīng)典的伯酰胺合成方法有很多，我們首先選擇了比較溫和的反應(yīng)條件：CDI/濃氨水。結(jié)果發(fā)現(xiàn)N-取代酰亞胺會(huì)在濃堿的水溶液中開環(huán)，破壞反應(yīng)物原有的結(jié)構(gòu)，因此涉及到濃氨水的反應(yīng)我們均不考慮。后期又嘗試了HATU/DIEA/NH4Cl、 EDCI/HOAt/NMM/氨甲醇等體系，發(fā)現(xiàn)以EDCI和HOAt為縮合劑時(shí)效果較好，主副產(chǎn)物更易分離，收率為20%～50%。

表1 化合物的體外抗腫瘤活性

2.2 體外抗癌活性

以MTT法測(cè)定化合物4a～4s體外對(duì)Brca2缺陷型細(xì)胞系Capan-1和乳腺癌細(xì)胞系231的增殖抑制實(shí)驗(yàn)，其IC50結(jié)果見表1。

由表1可知，當(dāng)酰亞胺氮上的取代基為苯環(huán)時(shí)，4f、4h和4j對(duì)Capan-1細(xì)胞有較好的增殖抑制活性，最高達(dá)到1.37 μM(化合物4h)； 當(dāng)酰亞胺氮上的取代基為哌啶基時(shí)，4k、4m、4n和4o對(duì)Capan-1細(xì)胞有較好的增殖抑制活性，最高達(dá)到0.48 μM(4n)； 哌啶基取代整體上活性比苯基取代好。

考慮到金剛烷胺有一定的體外抗癌活性的活性[23]，用金剛烷乙胺和金剛烷胺片段與3-甲酰胺鄰苯二甲酰亞胺母核結(jié)合得到化合物4p和4q，發(fā)現(xiàn)其對(duì)Capan-1細(xì)胞有著較好的活性(3.44 μM和5.95 μM)，但此活性是因?yàn)槟负诉€是金剛烷胺片段我們無(wú)法判斷，因此我們將金剛烷乙胺結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)化，在母核上接上了環(huán)己基乙胺的結(jié)構(gòu)(4r)，發(fā)現(xiàn)對(duì)Capan-1活性有著15倍提升(0.19 μM)，推測(cè)可能是化合物的空間位阻減小所致。

該系列化合物對(duì)Brca2缺失型胰腺癌細(xì)胞系Capan-1有良好的體外增殖抑制活性，最好活性(0.19 μM),比模板化合物NMS-P118活性好，與陽(yáng)性化合物olaparib(0.09 μM)相當(dāng)。但對(duì)無(wú)Brca1/2突變型的乳腺癌細(xì)胞系231基本無(wú)增殖抑制活性，從側(cè)面說(shuō)明了該結(jié)構(gòu)可能與NAD+競(jìng)爭(zhēng)性抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶。

本文合成了19個(gè)全新的以鄰苯二甲酰亞胺為母核腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)抑制劑，主要分為N-苯基取代、N-4-哌啶基取代和N-飽和烷烴取代3類。最終得到了化合物4r， Capan-1半數(shù)抑制濃度為0.19 μM，活性比NMS-P118好，與Olaparib相當(dāng)。該系列化合物同時(shí)表現(xiàn)了對(duì)Brca2突變型細(xì)胞系的抑制作用也表明其作為PARP-1抑制劑具有進(jìn)一步的開發(fā)的價(jià)值。