一、試驗(yàn)部分

（一）儀器與試劑

1.儀器。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（島津LCMS-8030）;超純水系統(tǒng)（WP-UP-YJ-20，沃特浦）；分析天平（Quintix 2102-1 cN，賽多利斯公司）；旋渦混合器（VORTEX 3，IKA 公司）；恒溫水浴振蕩器（江蘇安普SHA-C）；離心機(jī)（湖南湘儀H-2050R）。

2.試劑。甲醇（色譜純，默克股份兩合公司）；醋酸銨（分析純，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）；2-硝基苯甲醛（色譜純，天津市百世化工有限公司）；二甲基亞砜（分析純，天津市百世化工有限公司）；磷酸氫二鉀（分析純，天津市百世化工有限公司）；乙酸乙酯（分析純，天津市泰興試劑廠）；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均來自農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所（天津）；試驗(yàn)用水為經(jīng)沃特浦超純水系統(tǒng)處理后的超純水。

（二）樣品處理

1.樣品水解與衍生化。準(zhǔn)確稱取樣品2.0 g（精確至 0.01 g）到50 mL 離心管中，加入0.05 mL 的100 ng/mL 混合內(nèi)標(biāo)（AOZ-），旋渦混合50 s，再加入5 mL鹽酸溶液（0.2 mol/L）和0.15 mL 的2-硝基苯甲醛溶液（0.05 mol/L），渦旋振蕩50 s 后，置于恒溫水浴振蕩器中37 ℃避光震蕩16 h。

2.樣品的提取凈化。取出離心管冷卻至室溫，加入3～5 mL 磷酸氫二鉀溶液（1.0 mol/L），調(diào)節(jié)pH 值7.0～7.5，加入4 mL 乙酸乙酯，渦旋振蕩50 s，4000 r/min 離心5 min，取上層清液轉(zhuǎn)移至10 mL 玻璃離心管中；再加入4 mL 乙酸乙酯重復(fù)上述操作，合并上清液于40 ℃下氮?dú)獯蹈伞＜尤?.0 mL 甲醇溶液〔甲醇：水為5：95（V：V）〕渦旋振蕩溶解殘留物，過0.45um 濾膜，待測。

3.溶液配制。分別取上述標(biāo)準(zhǔn)品（100.0 ug/mL 溶液），用甲醇稀釋成 10 ng/mL 和100 ng/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

分別吸取上述標(biāo)準(zhǔn)品10ng/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.010 mL、0.025 mL、0.050 mL、0.10 mL 和100 ng/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.025 mL、0.05 mL、0.10 mL 于7 個(gè)50 mL 離心管中，不加樣品，按照樣品水解與衍生化和樣品的提取凈化步驟操作，按照色譜-質(zhì)譜條件測定。

（三）色譜-質(zhì)譜條件

1.色譜條件。色譜柱：C18 柱（100 mm×2.1 mm，5μm ）；柱溫為40 ℃；進(jìn)樣量為20μL。流動(dòng)相A：0.002 mol/L 的醋酸銨溶液；流動(dòng)相B：甲醇。色譜洗脫條件見表1。

表1 高效液相色譜梯度洗脫條件

2.質(zhì)譜條件。離子源：電噴霧離子源ESI；掃描模式為正離子掃描；霧化氣流量3L/min；干燥氣流量15L/min；加熱塊溫度250 ℃；DL 溫度250 ℃；CID 氣230 kPa；IG 真空度1.9 pa；PG 真空度7.5 pa；檢測方式為多重反應(yīng)監(jiān)測。其他質(zhì)譜參數(shù)見表2。

表2 反應(yīng)監(jiān)測的質(zhì)譜采集參數(shù)

（四）添加回收試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取不含上述藥物的草魚樣品2.0 g，分別以2.5 mg/kg 和4.5 mg/kg 兩個(gè)水平進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，重復(fù)5 次，按照上述試驗(yàn)方法測定，計(jì)算添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

二、結(jié)果與討論

（一）線性回歸方程

AOZ 的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.217 700x-0.000 564 679（r=0.996 987 6，=0.993 984 3）。

（二）方法的準(zhǔn)確度、精密度

在空白草魚中分別進(jìn)行2.5 mg/kg 和4.5 mg/kg 兩個(gè)水平的加標(biāo)回收試驗(yàn)，每個(gè)水平重復(fù)測定5 次，計(jì)算加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。由表 3 可知，在 2.5 mg/kg 和4.5 mg/kg 兩個(gè)添加水平下，AOZ 的平均回收率分別為99.648%和95.63%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為8.43%和6.19%，方法顯示出良好的準(zhǔn)確度和精密度，可以滿足試劑樣品中農(nóng)藥殘留的檢測要求。

表3 AOZ在草魚中的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

（三）實(shí)際樣品分析

用本方法對(duì)市場銷售的2 份草魚進(jìn)行硝基呋喃類代謝物AOZ 檢測，均未檢出。

三、結(jié)論

本研究通過對(duì)樣品前處理方法、質(zhì)譜條件和色譜條件的優(yōu)化，建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定草魚中AOZ 殘留量的分析方法，該方法前處理簡單、快速、回收率高，方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度等均滿足農(nóng)藥殘留分析的要求，適用于大量樣品的快速檢測。