范軍軍

冷凍切片技術(shù)是由Pieterde Riemer首創(chuàng)，手術(shù)中的新鮮標(biāo)本應(yīng)在最短時(shí)間內(nèi)冷凍，組織變硬后進(jìn)行切片處理。目前冷凍切片技術(shù)在臨床中運(yùn)用廣泛，尤其是對(duì)于腫瘤患者，病理診斷結(jié)果直接影響治療方案[1-2]。為了做出全面完整的術(shù)中快速病理診斷，本實(shí)驗(yàn)以200例患者為分析對(duì)象，探討病理診斷中快速冷凍切片的臨床應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集2017年12月～2018年12月我院存檔的200例組織標(biāo)本，男性92例，女性108例，年齡22～66歲，平均(33.14±7.22)歲；組織標(biāo)本包括50例肝脾腎結(jié)腸等內(nèi)臟組織、60例乳腺組織、20例卵巢組織、4例腦組織、56例甲狀腺組織、10例胃壁組織。所有組織標(biāo)本均分別進(jìn)行冷凍切片與常規(guī)石蠟切片病理診斷。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)中國(guó)科學(xué)院大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法組織標(biāo)本取材以大小1.5 cm×1.5 cm×0.5 cm為宜，部分組織進(jìn)行快速冷凍處理，按照組織類型的不同，冷凍的溫度也不同：腦組織為-16～-18 ℃，乳腺組織為-22～-30 ℃，胃壁與卵巢組織為-20～-22 ℃，甲狀腺組織為-18～20 ℃，冷凍時(shí)間為3～4 min，肝腎、淋巴結(jié)以及甲狀腺組織的冷凍時(shí)間約2 min。冷凍完成后進(jìn)行切片處理，厚度為5～8 μm，將切片組織投入AF固定液約2 min后使用蘇木精染色[3]，水洗后運(yùn)用鹽酸乙醇(1%)分化數(shù)秒之后再次水洗，水中返藍(lán)后加入水溶性伊紅(1%)約5 s，梯度乙醇脫水處理后中性樹(shù)脂封固。另外，部分組織按常規(guī)方法進(jìn)行石蠟切片病理診斷。

2 結(jié)果

在200例組織標(biāo)本中，冷凍切片診斷惡性腫瘤者81例，良性者119例；常規(guī)石蠟切片診斷惡性腫瘤者86例，良性者114例，術(shù)中冷凍切片與常規(guī)石蠟切片診斷一致者195例，符合率為97.50%，冷凍切片的漏診數(shù)為5例，誤診率為5.81%(5/86)?？焖倮鋬銮衅夹g(shù)染色，切片染色鮮艷、質(zhì)量佳，鏡下細(xì)胞形態(tài)清晰、組織結(jié)構(gòu)明確，質(zhì)、核對(duì)比確切(圖1)。

ABCD

3 討論

冷凍切片要求在較短時(shí)間內(nèi)對(duì)病變做出精準(zhǔn)的病理診斷，因此快速制作1張優(yōu)質(zhì)的冷凍切片具有重要意義。在臨床工作中冷凍切片機(jī)應(yīng)保證24 h備用狀態(tài)，取材時(shí)若厚度超過(guò)5 mm時(shí)則需延長(zhǎng)冷凍時(shí)間，若取材厚度低于2 mm，在切片時(shí)切片刀極易切到組織托頭，使切片刀損壞。因此，保證適當(dāng)?shù)那衅穸确浅Ｖ匾猍4]。另一方面，全層凍硬的組織表層通常由于較硬且脆難以切片，操作時(shí)需于室溫下靜置20～30 s后再行切片處理。

人體組織內(nèi)的液體成分為無(wú)機(jī)物與有機(jī)物的混合成分，大多需要在-1～-5 ℃才能將約80%的水分凍結(jié)成冰，該溫度范圍被稱為“最大冰晶生成帶”[5]。細(xì)胞速凍時(shí)組織細(xì)胞內(nèi)外會(huì)形成較多晶核，呈現(xiàn)出細(xì)小針狀結(jié)晶體且均勻分布，組織內(nèi)冰層推進(jìn)速度比水的移動(dòng)速度快，不對(duì)細(xì)胞形成機(jī)械損傷的同時(shí)維持細(xì)胞原本的狀態(tài)結(jié)構(gòu)。若凍結(jié)的速度較慢則會(huì)因較大的冰晶顆粒損傷細(xì)胞。因此，在操作時(shí)要確保組織的驟冷效果，使其在最短時(shí)間內(nèi)以最快的速度通過(guò)最大冰晶生成帶[6]?？焖倮鋬銮衅^(guò)程中所使用的刀片要保證其鋒利性，才能切出高質(zhì)量的片子；同時(shí)適宜的切片厚度可有助于獲得染色鮮明清晰的片子。組織切片貼附于載玻片上，可以沿同一方向輕輕外展，有助于防止出現(xiàn)褶皺。常規(guī)制作過(guò)程中，冷凍切片在完成脫水后需經(jīng)二甲苯處理以確保切片的透明度，然后使用中性樹(shù)膠進(jìn)行封片處理，樹(shù)膠滴加時(shí)需注意適量，樹(shù)膠太濃稠容易溢出玻片，太稀則易出現(xiàn)空泡情況[7]。

冷凍切片的制冷方式分為二氧化碳法、氯乙烷法、半導(dǎo)體制冷法、恒冷箱式冷凍法等。二氧化碳法經(jīng)10%中性福爾馬林加熱煮沸的過(guò)程中組織細(xì)胞會(huì)收縮變形；氯乙烷法中將氯乙烷試劑于標(biāo)本噴射過(guò)程凍結(jié)，由于此試劑已停止生產(chǎn)，因此該方式亦逐漸被淘汰。半導(dǎo)體制冷法是運(yùn)用水循環(huán)將電偶發(fā)熱端熱量帶走后使組織標(biāo)本冷凍制冷的方法，其制冷效果與機(jī)器所設(shè)計(jì)的電流大小有影響。恒冷箱式冷凍法是當(dāng)前運(yùn)用最廣泛的類型，冷凍速度迅速，提供的性能可以完全滿足各類室溫下的切片工作。與常規(guī)的石蠟切片相比，冷凍切片的新鮮標(biāo)本盡管未被固定液完全固定，但通過(guò)物理降溫法可以確保組織標(biāo)本的基本形態(tài)，經(jīng)福爾馬林、乙醇以及冰醋酸固定液的穿透作用，可以使細(xì)胞蛋白質(zhì)得以沉淀，從而有效預(yù)防標(biāo)本組織出現(xiàn)過(guò)渡收縮。切片在固定時(shí)，雖然切片厚度較薄，但有玻片作為支撐依托，因此不易產(chǎn)生變形問(wèn)題，有利于保證組織細(xì)胞在顯微鏡下呈現(xiàn)完整的結(jié)構(gòu)關(guān)系，提高診斷的準(zhǔn)確性。

本組結(jié)果顯示，術(shù)中冷凍切片與常規(guī)石蠟切片診斷一致者195例，符合率為97.50%。快速冷凍切片技術(shù)染色的切片顏色鮮艷、質(zhì)量佳，鏡下細(xì)胞形態(tài)清晰、組織結(jié)構(gòu)明確，核質(zhì)對(duì)比明確，值得臨床推廣使用。