蔡 瑜, 曹成喜, 卓先義, 李紅根, 樊柳蔭

(1. 上海交通大學(xué)學(xué)生創(chuàng)新中心, 上海 200240; 2. 上海交通大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院, 上海 200240; 3. 上海交通大學(xué)電子信息與電氣工程學(xué)院, 上海 200240; 4. 司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所, 上海 200063; 5. 上海交通大學(xué)物理與天文學(xué)院, 上海 200240)

文件形成時(shí)間的鑒定是法庭科學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難點(diǎn)問題[1]。在許多刑事案件或者民事糾紛中都會(huì)涉及文件形成時(shí)間的鑒定,比如在違法犯罪活動(dòng)中,有的偽造早期的文件,以牟取他人的財(cái)物或其他權(quán)益;有的利用早期的或已經(jīng)失效的文件添加、改寫成有效的日期或內(nèi)容,以掩蓋其違法犯罪事實(shí)。在財(cái)產(chǎn)糾紛、合同糾紛、債務(wù)糾紛和詐騙、貪污、瀆職、保險(xiǎn)理賠等案件中,為判斷文件真?zhèn)?對(duì)可疑文件上字跡形成時(shí)間的研究和建立可靠的鑒定方法是十分必要的。

書寫時(shí)間的鑒定分為絕對(duì)書寫時(shí)間鑒定和相對(duì)書寫時(shí)間鑒定[2]。前者是通過檢驗(yàn)確定書寫文件的真實(shí)書寫時(shí)間,后者判斷同一文件上兩種或兩種以上筆跡的時(shí)間是否同時(shí)形成。由于影響書寫字跡的因素很多,判斷書寫絕對(duì)時(shí)間難度非常大,因此,相對(duì)書寫時(shí)間的鑒定比較常用。文件相對(duì)書寫時(shí)間的鑒定技術(shù)主要有擴(kuò)散法[3,4]、色譜法[5-9]、光譜法[10-15]、毛細(xì)管電泳(CE)法[16,17]等,由于在實(shí)際案件中,可疑文件的形成條件和環(huán)境狀況比較復(fù)雜,大多數(shù)檢驗(yàn)方法不可避免地有各種局限性,例如,檢材的取樣量、文件的存放環(huán)境等。如果能尋找一個(gè)不受取樣量等條件影響且能有效反映文件材料隨時(shí)間變化的指標(biāo),并從中找出其變化的規(guī)律就非常有意義。

早在1940年,Rhodes等[18]發(fā)現(xiàn)Fe(Ⅱ)書寫在紙張上容易被氧化成Fe(Ⅲ),因此,筆跡中Fe(Ⅱ)的氧化可能為鑒定文件中字跡的相對(duì)時(shí)間提供一種可能,但由于當(dāng)時(shí)沒有合適的分離方法和樣品提取方法,無法準(zhǔn)確測(cè)定筆跡墨水中Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)的原始含量,也無法準(zhǔn)確鑒定Fe(Ⅱ)的氧化程度,即筆跡的相對(duì)時(shí)間。更重要的是,Rhodes等沒有研究墨水瓶中的Fe(Ⅱ)是否容易被氧化,這對(duì)于字跡相對(duì)時(shí)間的鑒定至關(guān)重要。

本文建立了一種基于CE法鑒定字跡相對(duì)時(shí)間的新方法,通過比較從可疑筆跡中提取的Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)的峰面積比與從整個(gè)文檔中提取出的Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)的峰面積比,就可以判斷整篇文件是否同時(shí)書寫。該方法具有快速、樣品需要量少等特點(diǎn),對(duì)于鑒別可疑文件中偽造插入的字跡,鑒別真?zhèn)喂P跡的相對(duì)年代具有重要的指導(dǎo)意義。

1 實(shí)驗(yàn)原理

鞣酸鐵墨水中含有硫酸亞鐵、鞣酸、沒食子酸,根據(jù)它們之間的顯色反應(yīng),當(dāng)墨水書寫在紙張上暴露在空氣中時(shí),Fe(Ⅱ)及其Fe(Ⅱ)絡(luò)合物氧化成Fe(Ⅲ)。隨著時(shí)間的推移,Fe(Ⅱ)的量不斷減少,Fe(Ⅲ)的量不斷增加。因此,墨水中Fe(Ⅱ)的氧化程度可以成為鑒定墨水字跡相對(duì)時(shí)間的依據(jù)。如果可以準(zhǔn)確地測(cè)定其濃度,那么就可以確定墨水字跡的相對(duì)時(shí)間。

實(shí)驗(yàn)中選擇鄰菲羅啉(1,10-phen)和反式-1,2-環(huán)己二胺四乙酸(CDTA)兩種不同特異性結(jié)合的絡(luò)合劑,1,10-phen特異性絡(luò)合Fe(Ⅱ),形成[Fe(Ⅱ)-(phen)3]2+; CDTA特異性絡(luò)合鐵離子,形成[Fe (Ⅲ)-CDTA]-。然后用毛細(xì)管區(qū)帶電泳分離檢測(cè)并通過兩種絡(luò)合物峰面積的比值(R)作為評(píng)判Fe(Ⅱ)氧化程度的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),即字跡相對(duì)時(shí)間的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn),評(píng)判公式如下:

(1)

式中,A[Fe(Ⅱ)-(phen)3]2+為[Fe(Ⅱ)-(phen)3]2+的峰面積,A[Fe(Ⅲ)-(CDTA)]-為[Fe (Ⅲ)-CDTA]-的峰面積,R為兩者比值。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器、試劑與材料

P/ACETMMDQ型毛細(xì)管電泳系統(tǒng)(Beckman Coulter Co.,美國(guó)),該系統(tǒng)配有32 Karat軟件分析系統(tǒng)、紫外檢測(cè)儀、液態(tài)恒溫裝置以及自動(dòng)進(jìn)樣器,可以提供高至30 kV的電壓。CE檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置為254 nm。所有的實(shí)驗(yàn)溫度均控制在25 ℃。未涂層熔融石英毛細(xì)管柱,內(nèi)徑75 μm(外徑375 μm),總長(zhǎng)40.2 cm,有效長(zhǎng)度30 cm(河北永年光導(dǎo)纖維廠),超純水裝置(Millipore,美國(guó)), 320 pH酸度計(jì)(Mettler Toledo,瑞士),高速臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠), DHG-9070A電熱常溫干燥箱(易盛科學(xué)技術(shù)有限公司,上海), HS-120D超聲波清洗儀(Scientz生物科技有限公司,寧波)。

硫酸亞鐵銨((NH4)2SO4·FeSO4·6H2O,純度99%),氯化鐵(FeCl3·6H2O,純度99%),苯甲酸(C7H8O2,純度99.5%),四硼酸鈉(Na2B4O7·10H2O,純度99.5%),硼酸(H3BO3,純度≥99.5%),抗壞血酸(C6H8O6,純度99%)試劑購(gòu)自上海化學(xué)試劑公司,CDTA(C14H22N2O8,純度99%),1,10-phen(C12H8N2·H2O,純度99%)試劑購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,藍(lán)黑墨水購(gòu)于上海墨水廠。

2.2 溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制方法如下:分別配制20 mmol/L的CDTA和5 mmol/L的1,10-phen標(biāo)準(zhǔn)溶液并室溫保存。每天使用前新鮮配制10 mmol/L的硫酸亞鐵銨溶液,每周配制10 mmol/L的氯化鐵溶液。配制的溶液于4 ℃低溫保存。

本實(shí)驗(yàn)選用Na2B4O7-H3BO3作為背景緩沖液,緩沖液的配制方法如下:首先分別配制100 mmol/L的Na2B4O7溶液和100 mmol/L的H3BO3溶液,然后用100 mmol/L H3BO3溶液將100 mmol/L的Na2B4O7溶液pH調(diào)至9.2,并在緩沖液中加入少量的CDTA和1,10-phen絡(luò)合劑。

2.3 樣品前處理?xiàng)l件

剪取1 cm長(zhǎng)的墨水跡線,剪碎后放入2 mL的EP管中,然后加入0.5 mL 5 mmol/L的1,10-phen萃取1 min,然后再加入0.5 mL 20 mmol/L的CDTA并用渦旋混勻儀振動(dòng)10 min,最后,以10 000 r/min轉(zhuǎn)速離心15 min,取上清液用于CE分離檢測(cè)。

2.4 CE程序及分離條件

電泳開始前,新的毛細(xì)管用137.9 kPa壓力,按照1.0 mol/L氫氧化鈉沖洗5 min,超純水5 min, 1.0 mol/L鹽酸5 min,超純水5 min,電泳緩沖液5 min的順序進(jìn)行處理和平衡,每次進(jìn)樣前用電泳緩沖液沖洗2 min。

CE條件為:熔融石英毛細(xì)管(40.2 cm×75 μm i.d.,有效長(zhǎng)度30 cm),100 mmol/L硼酸-硼砂緩沖溶液(pH 9.2),分離電壓20 kV,壓力上樣(1.379 kPa,上樣時(shí)間5 s),檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm,分離溫度25 ℃,苯甲酸作為內(nèi)標(biāo)。同時(shí),為了確保[Fe(Ⅱ)-(phen)3]2+和[Fe(Ⅲ)-CDTA]-在分離過程中的穩(wěn)定性,在分離緩沖溶液中加入了一定量1,10-phen和CDTA(濃度為0.1 mmol/L)避免絡(luò)合物解離。

3 結(jié)果與討論

3.1 Fe(Ⅱ)在墨水瓶中氧化速率的研究

要以Fe(Ⅱ)與Fe(Ⅲ)的峰面積比作為鑒定墨水字跡相對(duì)時(shí)間的指標(biāo),首先必須確認(rèn)Fe(Ⅱ)在鋼筆墨盒或墨水瓶中的氧化與在文件字跡中發(fā)生的氧化相比可以忽略不計(jì)。如果鋼筆墨盒或墨水瓶中的Fe(Ⅱ)有明顯的氧化,那么檢測(cè)字跡中Fe(Ⅱ)的氧化對(duì)確定文件中字跡的相對(duì)時(shí)間就沒有意義。

鞣酸鐵墨水儲(chǔ)存在密閉的墨水瓶中,與外界空氣隔絕,局部氧分壓對(duì)Fe(Ⅱ)的氧化影響非常小,且商用墨水的pH值約為2.0,在pH小于3時(shí),Fe(Ⅱ)的氧化速率非常低[19],此外,鞣酸鐵墨水中含有大量的鞣酸、沒食子酸,這些物質(zhì)可以與Fe(Ⅱ)形成絡(luò)合物有效延緩Fe(Ⅱ)的氧化,從理論上講,Fe(Ⅱ)在墨水瓶中的氧化可以忽略,為了證實(shí)此假設(shè),我們對(duì)鋼筆墨盒和墨水瓶中可能存在的Fe(Ⅱ)的氧化進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn):首先,每隔幾天,從墨水瓶中取出50 μL墨水,經(jīng)絡(luò)合劑處理后經(jīng)CE檢測(cè),持續(xù)3個(gè)月,Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)的峰面積比R如圖1所示,在大約兩個(gè)月的時(shí)間里,R值從0.3略微下降到0.27,從兩個(gè)月到3個(gè)月甚至更多的時(shí)間里,R值幾乎保持不變。這意味著Fe(Ⅱ)在墨水瓶中的氧化速率確實(shí)較慢,尤其是在使用新墨水兩個(gè)月后。

圖 1 Fe(Ⅱ)在墨水瓶中的氧化Fig. 1 Oxidation of ferrous ions in the gall ink bottle

然而,當(dāng)墨水暴露在紙張上時(shí),墨水中的硫酸會(huì)逐漸被紙張的纖維素所消耗,從而導(dǎo)致Fe(Ⅱ)在紙張中被逐漸氧化,因此,可以通過檢測(cè)Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)的峰面積比R來估計(jì)墨水字跡的相對(duì)時(shí)間。

3.2 CE分離檢測(cè)Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)

3.2.1Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)與絡(luò)合劑的特異性絡(luò)合

Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)無紫外吸收,因此無法直接用紫外進(jìn)行檢測(cè)。需要在鐵離子溶液中加入絡(luò)合劑生成具有紫外吸收的絡(luò)合物。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,1,10-phen可以特異性地結(jié)合Fe(Ⅱ)(Fe(Ⅱ)與1,10-phen的穩(wěn)定常數(shù)為21.3,與CDTA的穩(wěn)定常數(shù)為18.2), CDTA可以特異性地結(jié)合Fe(Ⅲ)(Fe(Ⅲ)與CDTA的穩(wěn)定常數(shù)為29.3,與1,10-phen的穩(wěn)定常數(shù)為14.1),本研究采取1,10-phen和CDTA為絡(luò)合劑與兩種金屬離子進(jìn)行絡(luò)合后進(jìn)行CE分離檢測(cè)。

運(yùn)用CE分離金屬離子絡(luò)合物,絡(luò)合劑的選擇無疑是實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中非常重要的部分,絡(luò)合劑必須要與待測(cè)金屬離子具有絕對(duì)的特異性和高度的結(jié)合穩(wěn)定性,避免在毛細(xì)管分離過程中解離。因此,需要對(duì)兩種絡(luò)合劑與Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)的特異性結(jié)合進(jìn)行研究。首先,將1,10-phen和CDTA的混合溶液加入Fe(Ⅱ)標(biāo)準(zhǔn)溶液中,實(shí)驗(yàn)過程中為了避免Fe(Ⅱ)被氧化,Fe(Ⅱ)溶液中加入抗壞血酸抑制氧化,加入苯甲酸作為內(nèi)標(biāo),然后進(jìn)行CE分離檢測(cè),結(jié)果見圖2a,從圖中可以看出,只出現(xiàn)Fe(Ⅱ)與1,10-phen絡(luò)合物的峰,而不出現(xiàn)Fe(Ⅱ)與CDTA的絡(luò)合峰,說明在兩種絡(luò)合劑同時(shí)出現(xiàn)時(shí),Fe(Ⅱ)首先與1,10-phen特異性絡(luò)合。然后將1,10-phen和CDTA的混合溶液加入Fe(Ⅲ)標(biāo)準(zhǔn)溶液中進(jìn)行CE分離,結(jié)果如圖2b所示,只出現(xiàn)Fe(Ⅲ)和CDTA絡(luò)合物的峰,而不出現(xiàn)Fe(Ⅱ)與1,10-phen的絡(luò)合物峰,說明在兩種絡(luò)合劑同時(shí)存在時(shí),Fe(Ⅲ)與CDTA特異性絡(luò)合。

圖 2 兩種絡(luò)合劑與Fe(Ⅱ)、Fe(Ⅲ)的特異性結(jié)合Fig. 2 Specific binding between two complexing agents and Fe(Ⅱ), Fe(Ⅲ) ions a. 1,10-phen and Fe(Ⅱ): 40 μL of 10 mmol/L standard Fe(Ⅱ) solution with a small amount of ascorbic acid (antioxidant) with the simultaneous addition of 1.0 mL of 5.0 mmol/L 1,10-phen and 1.0 mL of 10 mmol/L CDTA; b. CDTA and Fe(Ⅲ): 50 μL of 10 mmol/L standard Fe(Ⅲ) solution with the simultaneous addition of 1.0 mL of 5.0 mmol/L 1,10-phen and 1.0 mL of 10 mmol/L CDTA. Conditions: 40.2 cm (effective length 30 cm)×75 μm i.d. (375 μm o.d.) capillary; 100 mmol/L pH 9.2 sodium borate acid buffer; voltage, 20 kV; injection, 1.379 kPa 5 s; detection wavelength, 254 nm; temperature, 25 ℃. Peak identifications: 1. [Fe(phen)3]2+; 2. free 1,10-phen; 3. [Fe(Ⅲ)-CDTA]-; 4. benzoic acid; 5. ascorbic acid.

圖 3 1,10-phen和CDTA的添加順序?qū)j(luò)合效果的影響Fig. 3 Influence of addition order of 1,10-phen and CDTA on the complexation of Fe(Ⅱ) and Fe(Ⅲ) a. Addition of 1.0 mL of 10 mmol/L CDTA to the mixture of Fe(Ⅱ) and Fe(Ⅲ) (solution A); b. subsequent addition of 1.0 mL of 5.0 mmol/L 1,10-phen to solution A; c. addition of 1,10-phen, followed by CDTA. Conditions: mixed standard solution: 40 μL of 10 mmol/L Fe(Ⅱ) and 50 μL of 10 mmol/L Fe(Ⅲ); other conditions are the same as those in Fig. 2. Peak identifications: 1. [Fe(phen)3]2+; 2. free 1,10-phen; 3. [Fe(Ⅲ)-CDTA]-; 4. benzoic acid.

3.2.2絡(luò)合劑添加順序?qū)j(luò)合效果的影響

絡(luò)合劑的加入會(huì)影響Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)之間的平衡,因此絡(luò)合劑的添加順序有可能對(duì)絡(luò)合選擇性有一定影響,為此,我們對(duì)Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中絡(luò)合劑的添加順序進(jìn)行了研究。將CDTA加入鐵離子和Fe(Ⅱ)的混合溶液,然后進(jìn)行CE分離,電泳圖譜如圖3a所示,結(jié)果只出現(xiàn)[Fe(Ⅲ)-CDTA]-的峰,之后在此溶液中加入1,10-phen后再進(jìn)行電泳分離,結(jié)果如圖3b所示,出現(xiàn)[Fe(Ⅲ)-CDTA]-的峰和1,10-phen的峰,但并未出現(xiàn)[Fe(Ⅱ)-(phen)3]2+的峰,說明溶液中Fe(Ⅱ)都被氧化成Fe(Ⅲ)。如果在Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)標(biāo)準(zhǔn)混合液中先加入1,10-phen,然后再加入CDTA進(jìn)行CE分離檢測(cè),結(jié)果如圖3c,出現(xiàn)了[Fe(Ⅱ)-(phen)3]2+, 1,10-phen和[Fe(Ⅲ)-CDTA]-的峰及內(nèi)標(biāo)峰。

將1,10-phen加入Fe(Ⅲ)和Fe(Ⅱ)的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液,然后進(jìn)行CE分離檢測(cè),結(jié)果如圖4a,只出現(xiàn)Fe(Ⅱ)和1,10-phen的絡(luò)合物[Fe(Ⅱ)-(phen)3]2+的峰,然后再在圖4a的樣品溶液中加入CDTA,則會(huì)出現(xiàn)Fe(Ⅱ)和1,10-phen的絡(luò)合物[Fe(Ⅱ)-(phen)3]2+的峰以及Fe(Ⅲ)與CDTA的絡(luò)合物[Fe(Ⅲ)-CDTA]-的峰。圖4說明在同時(shí)存在兩種價(jià)態(tài)鐵離子時(shí),1,10-phen首先絡(luò)合Fe(Ⅱ)。

圖 4 1,10-phen和CDTA的添加順序?qū)e(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)絡(luò)合效果的影響Fig. 4 Influence of addition order of 1,10-phen and CDTAon the complexation of Fe(Ⅱ) and Fe(Ⅲ) a. Addition of 0.5 mL of 5 mmol/L 1,10-phen to the mixture standard solution of Fe(Ⅱ) and Fe(Ⅲ) (20 μL of 10 mmol/L Fe(Ⅱ) and 40 μL of 10 mmol/L Fe(Ⅲ), solution A); b. subsequent addition of 1.0 mL of 10 mmol/L CDTA to solution A. The separation conditions are the same as those in Fig. 2. Peak identifications: 1. [Fe(Ⅱ)-(phen)3]2+; 2. free 1,10-phen; 3. [Fe(Ⅲ)-CDTA]-; 4. benzoic acid.

圖3和圖4結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了1,10-phen和CDTA對(duì)Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)的特異性絡(luò)合。此外,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,兩種絡(luò)合劑的添加順序?qū)煞N鐵離子的檢測(cè)有較大的影響。可能是因?yàn)榻j(luò)合劑的加入會(huì)影響Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)之間的動(dòng)態(tài)平衡,先加入CDTA可能會(huì)導(dǎo)致Fe(Ⅱ)的反應(yīng)向氧化方向進(jìn)行。

3.2.3兩種絡(luò)合劑添加時(shí)間間隔對(duì)絡(luò)合效果的影響

既然絡(luò)合劑添加順序?qū)煞N鐵離子的平衡會(huì)有影響,那么添加的時(shí)間間隔是否會(huì)對(duì)反應(yīng)平衡有影響?為此,本研究選取了10、30、60、180和300 s 5個(gè)不同的時(shí)間區(qū)間,考察了兩種絡(luò)合劑加入的時(shí)間間隔對(duì)兩種鐵離子測(cè)定的影響。從表1可以看出,隨著時(shí)間間隔的逐漸延長(zhǎng),A1/A2(A1、A2分別為[Fe(Ⅱ)-(phen)3]2+和[Fe(Ⅲ)-CDTA]-的峰面積)的值逐漸緩慢增加。結(jié)果表明,先用1,10-phen處理后再用CDTA處理的樣品確實(shí)使平衡向Fe(Ⅲ)還原的方向移動(dòng),但移動(dòng)速度要慢得多。由表1進(jìn)一步可以看出,當(dāng)時(shí)間間隔設(shè)置在60 s以內(nèi)時(shí),時(shí)間間隔對(duì)A1/A2比值的影響很小。然而,如果間隔設(shè)置為180 s以上,影響就會(huì)變得非常強(qiáng)。因此,兩種絡(luò)合劑添加的時(shí)間間隔控制在60 s。

表 1 絡(luò)合劑添加時(shí)間間隔對(duì)絡(luò)合平衡的影響(n=3)

3.3 實(shí)際樣品分析

為了評(píng)價(jià)所建立方法的適用性,本研究對(duì)兩種鞣酸鐵墨水字跡中的Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)進(jìn)行了檢測(cè)。圖5為CE分離譜圖,可以看出:用該方法可以檢測(cè)到兩種鐵離子的絡(luò)合物[Fe(Ⅱ)-(phen)3]2+和[Fe(Ⅲ)- (CDTA)]-的峰,并且隨著書寫時(shí)間的延長(zhǎng),A1/A2的比值變小,證實(shí)了Fe(Ⅱ)逐漸被氧化成Fe(Ⅲ),墨水1和墨水2的A1/A2分別從1.79降到0.45和從2.67降到0.3。兩種墨水從書寫到書寫后75天A1/A2的變化證實(shí)所建立的方法可以用于鞣酸鐵墨水字跡相對(duì)時(shí)間的鑒定,墨水1和墨水2中兩種鐵離子峰面積比值不同的原因可能是兩種墨水的成分不同。圖5的結(jié)果簡(jiǎn)單地證明了本研究所建方法可以用于鞣酸鐵墨水字跡相對(duì)時(shí)間的鑒定。

圖 5 兩種墨水字跡的電泳譜圖Fig. 5 Electropherograms of two gall ink handwriting samples a. sample of gall ink handwriting written on 26th Sept., 2018; b: sample of gall ink handwriting written on 10th Dec., 2018. The conditions are the same as those in Fig. 2. Peak identifications: 1. [Fe(Ⅱ)-(phen)3]2+; 2. [Fe(Ⅲ)-(CDTA)]-.

4 結(jié)論

本文建立了一種簡(jiǎn)便、快速測(cè)定鞣酸鐵墨水字跡中Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)的CE技術(shù)。通過比較從可疑筆跡中提取的Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)峰面積的比值與從整個(gè)文檔中提取出的Fe(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)峰面積的比值,就可以判斷整篇文字是否同時(shí)書寫,對(duì)于鑒別可疑文件中偽造插入的字跡,鑒別真?zhèn)喂P跡的相對(duì)年代具有重要的指導(dǎo)意義。如果能進(jìn)一步研究字跡相對(duì)時(shí)間的曲線及其影響因素,例如環(huán)境溫度、濕度、光線等,便可以測(cè)定不同文件字跡的相對(duì)時(shí)間,相關(guān)研究正在進(jìn)行中。