李曉娟 -

(株洲千金藥業(yè)股份有限公司，湖南 株洲 412007)

諾麗(MorindacitrifoliaLinn)是一種生長(zhǎng)于熱帶、亞熱帶沿海地區(qū)的茜草科藥用植物[1]，其葉、莖、根、花、果實(shí)均能入藥[2]，含有多酚、黃酮、多糖、環(huán)烯醚萜、生物堿、礦物質(zhì)和維生素等營(yíng)養(yǎng)活性成分[3-5]，具有清除自由基、抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、抗炎癥等功效[6]，能顯著調(diào)理高血脂、高血壓、糖尿病等疾病[7]，促進(jìn)高脂肪和高膽固醇飲食中的心臟保護(hù)作用[8]。

目前，高血脂病具有膽固醇過(guò)高、甘油三脂過(guò)高等臨床表現(xiàn)[9-11]，他汀類等化學(xué)藥物可降低人體血清膽固醇，但伴有明顯的副反應(yīng)[12]。因此，開(kāi)辟新的生物降脂途徑是當(dāng)前醫(yī)藥研究者迫切需要解決的熱點(diǎn)難題[8]。諾麗酒是對(duì)純諾麗果果汁進(jìn)行自然發(fā)酵[13]而得，而有關(guān)諾麗酒及諾麗降血脂功能的相關(guān)報(bào)道較少[14]。研究擬通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)對(duì)諾麗酒的降血脂功能進(jìn)行評(píng)價(jià)，為諾麗在高血脂癥患者飲食輔助治療中的應(yīng)用提供依據(jù)，對(duì)控制高血脂癥的發(fā)病率和促進(jìn)諾麗果資源精深加工具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料與試劑

C57/6小鼠：80只，4周齡，體重(11.81±0.36) g，上海斯萊克試驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，江南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼喂；

諾麗酒：具體理化指標(biāo)見(jiàn)表1，株洲千金藥業(yè)股份有限公司；

表1 諾麗酒的理化指標(biāo)

鹽酸、葡萄糖、次甲基藍(lán)、五水硫酸銅、四合水酒石酸鉀鈉、氫氧化鈉、福林酚試劑、碳酸鈉、DNS顯色劑、沒(méi)食子酸：分析純，阿拉丁試劑有限公司；

RPMI 1640細(xì)胞培養(yǎng)基、高密度脂蛋白(HDL-C)試劑盒、低密度脂蛋白(LDL-C)試劑盒、甘油三酯(TG)試劑盒、膽固醇(TC)試劑盒：南京建成生物工程研究所。

1.1.2 主要儀器設(shè)備

全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀：BioTek Epoch型，美國(guó)Biotek公司；

氣相色譜儀：7890B型，安捷倫公司；

糖度儀：DZS706型，日本愛(ài)拓科學(xué)儀器有限公司；

流式細(xì)胞儀：FACSCalibur型，美國(guó)BD公司；

pH計(jì)：PAL-1型，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；

離心機(jī)：5804R型，德國(guó)Eppendorf公司；

電子天平：AL204型，梅特勒—托利多儀器有限公司；

細(xì)胞培養(yǎng)箱：BBD6220型，美國(guó)Thermo Fisher 公司；

高通量快速實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀：7900型，美國(guó)ABI公司。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組 80只C57/6小鼠隨機(jī)按每10只為一組進(jìn)行分組。① 正常組(低脂對(duì)照組，LFD)，飼喂低脂日糧(10%能量來(lái)源于脂肪)；② 低脂+低/中/高劑量諾麗酒組(LFD+LN/MN/HN)，飼喂低脂日糧和添加低/中/高劑量諾麗酒的飲用水；③ 高脂組(HFD)，飼喂高脂日糧(45%能量來(lái)源于脂肪)；④ 高脂+低/中/高劑量諾麗酒組(HFD+LN/MN/HN)，飼喂高脂日糧和添加低/中/高劑量諾麗酒的飲用水。其中低劑量諾麗酒組(10 mL/kg·體重)、中劑量諾麗酒組(20 mL/kg·體重)、高劑量諾麗酒組(40 mL/kg·體重)。低脂日糧與高脂日糧為AIN93小鼠日糧加以改進(jìn)，詳細(xì)配方見(jiàn)表2，所有試驗(yàn)組飲用水均調(diào)至與原產(chǎn)品酒基相同的9%乙醇含量，試驗(yàn)周期為90 d，所有動(dòng)物自由進(jìn)食、飲水并記錄采食量和飲水量。第84天每組小鼠進(jìn)行試驗(yàn)動(dòng)物代謝系統(tǒng)(CLAMS)監(jiān)測(cè)，處死采樣。

表2 低脂日糧和高脂日糧配方

1.2.2 指標(biāo)測(cè)定

(1) 酒精度：參照GB/T 15038—2006中的氣相色譜法。

(2) 總糖：參照GB/T 15038—2006中的斐林試劑滴定法。

(3) 總酸及揮發(fā)酸含量：參照GB/T 15038—2006中的指示劑法。

(4) pH值：pH計(jì)法。

(5) 可溶固形物含量：折光儀法。

(6) 雜醇油含量：參照GB/T 5009.48—2003中的氣相色譜法。

(7) 黃酮：紫外分光光度法[15]。

(8) 總酚：福林酚法[16]。

(9) 降血脂功能：采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清中的總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。

(10) 呼吸交換率(RER)：CPET測(cè)定系統(tǒng)。

1.2.3 小鼠體質(zhì)量及臟器指數(shù) 末次用藥后禁食12 h，稱量體重后頸部脫臼處死、解剖，快速去除脾臟、胸腺并稱重。按式(1)、(2)分別計(jì)算臟器指數(shù)和脂重指數(shù)。

(1)

式中：

c1——臟器指數(shù)，%；

m1——臟器質(zhì)量，g；

m2——體質(zhì)量，g。

(2)

式中：

c2——脂重指數(shù)，%；

m3——脂肪質(zhì)量，g；

m4——體重，g。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS Statistics 23軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼喂劑量對(duì)小鼠體重、采食量、飲水量的影響

由圖1和表3可知，3個(gè)劑量諾麗酒飼喂正常日糧小鼠，除高劑量組飲水量顯著提高外，各組的體重、體增重和采食量均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。高脂日糧飼喂小鼠5～13周，其體重均顯著高于正常(低脂)日糧小鼠(P<0.05)，表明試驗(yàn)成功建立了肥胖動(dòng)物模型。添加低、中、高劑量諾麗酒可有效減低肥胖小鼠體重或體增重，其中高劑量組效果最為顯著，體重由30.09 g降至25.92 g，體增量由12.96 g降至9.02 g，分別下降了13.96%，30.40%，即從飼喂的第3～15周均可顯著降低肥胖小鼠體重(P<0.05)。此外，與HFD組相比，HFD+MN組和HFD+HN組飲水量分別升至4.79，4.76 g/d，飲水量顯著提高(P<0.05)，采食量則無(wú)顯著性差異。

*表示與LFD組相比差異顯著(P<0.05)，#表示與HFD組相比差異顯著(P<0.05)

表3 諾麗酒對(duì)小鼠終體重、體增重、采食量、飲水量的影響?

2.2 飼喂劑量對(duì)小鼠睪脂率、腎脂率、體脂率的影響

由表4可知，中、高劑量諾麗酒飼喂正常日糧小鼠可顯著降低睪脂率或腎脂率(P<0.05)，但對(duì)體脂率無(wú)顯著性影響(P>0.05)。3個(gè)劑量諾麗酒飼喂肥胖小鼠睪脂率由3.64%降至2.13%，腎脂率由1.59%降至0.74%，體脂率由21.75%降至12.52%，可顯著降低睪脂率、腎脂率或體脂率(P<0.05)，其中以高劑量組降脂效果最為顯著，其腹部脂肪沉積可降低至正常水平，說(shuō)明諾麗酒能有效修復(fù)高脂物質(zhì)對(duì)腎臟細(xì)胞所造成的損傷，使其恢復(fù)至正常水平，并隨著諾麗酒濃度的增加，腹部脂肪逐漸降低。

表4 諾麗酒對(duì)小鼠脂肪比率的影響?

2.3 飼喂劑量對(duì)小鼠血脂的影響

由表5可知，3個(gè)劑量諾麗酒飼喂正常小鼠的血脂生化指標(biāo)均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。肥胖小鼠飼喂中、高劑量諾麗酒，其甘油三酯、膽固醇、低密度脂蛋白含量分別下降了28.90%，13.97%，60.34%，說(shuō)明諾麗酒可顯著降低血漿中甘油三酯、膽固醇或低密度脂蛋白水平(P<0.05)；高劑量諾麗酒飼喂小鼠的高密度脂蛋白含量由120.46 mmol/L升至133.03 mmol/L，顯著提高了10.43%(P<0.05)。諾麗中的多酚、黃酮等活性成分能有效防止自由基損害，抗氧化劑是脂質(zhì)過(guò)氧化物酶的重要抑制劑[17]，應(yīng)對(duì)高膽固醇引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)，抑制脂質(zhì)的吸收和分泌；且諾麗酒中富含黃酮和多酚等物質(zhì)會(huì)抑制脂質(zhì)的生物合成，降低脂肪酶活力，減少脂質(zhì)吸收[18-20]，能有效抑制高脂肪或高膽固醇的吸收，保護(hù)組織細(xì)胞[21]。綜上表明，諾麗酒對(duì)肥胖小鼠具有顯著降血脂、降血清甘油三酯和降血清總膽固醇的功能。

表5 血脂生化指標(biāo)?

2.4 飼養(yǎng)劑量對(duì)小鼠呼吸交換率、能量消耗和自主活動(dòng)的影響

呼吸交換率(RER)是一定時(shí)間內(nèi)機(jī)體呼出CO2和吸入O2的比值。加大運(yùn)動(dòng)量，呼出更多CO2，RER值增大，其作為運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的一個(gè)指標(biāo)[22]。休息時(shí)，RER為0.7～1.0，RER值接近1.0，表明機(jī)體以糖代謝為主要供能方式，RER值接近0.7，則以脂代謝為主要供能方式[23]。 由圖2可知，與HFD組相比，HFD+HN組的RER值降低，更接近0.7，表明諾麗酒可在一定程度上促進(jìn)小鼠對(duì)脂肪的消耗。此外，HFD+HN組產(chǎn)熱量和活動(dòng)量顯著提高(P<0.05)，表明諾麗酒主要是通過(guò)提高脂肪利用、增加產(chǎn)熱和活動(dòng)量實(shí)現(xiàn)其降脂減肥功能的。

*表示與LFD組相比差異顯著(P<0.05)，#表示與HFD組相比差異顯著(P<0.05)

3 結(jié)論

以中、低、高劑量的諾麗酒灌胃小鼠90 d。結(jié)果表明，諾麗酒對(duì)正常日糧小鼠體重、體增重和采食量無(wú)顯著性影響(P>0.05)；中、高劑量諾麗酒組可有效降低肥胖小鼠體重或體增量，睪脂率、腎脂率或體脂率的下降均顯著高于空白對(duì)照組與酒基對(duì)照組，且血漿中甘油三酯、膽固醇或低密度脂蛋白含量也顯著低于空白對(duì)照組與酒基對(duì)照組，但血漿中高密度脂蛋白高于對(duì)照組，說(shuō)明中、高劑量的諾麗酒可使肥胖小鼠具有顯著降血脂、降血清甘油三酯和降血清總膽固醇的功能。此外，諾麗酒可在一定程度上促進(jìn)小鼠對(duì)脂肪的消耗，提高小鼠的產(chǎn)熱量和活動(dòng)量，實(shí)現(xiàn)其降脂減肥功能。但諾麗酒降血脂的藥理機(jī)制未完全清晰，后續(xù)可針對(duì)諾麗酒中的生物活性成分和生理功能展開(kāi)更深入的研究。