王成材，郝 鵬

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

泌尿系結(jié)石是一種嚴(yán)重危害人類健康的疾病，其形成也是復(fù)雜而多變的過(guò)程[1]，眾多患者受其困擾，正是因?yàn)槠洳∫虻膹?fù)雜性及高復(fù)發(fā)性，現(xiàn)已成為泌尿外科挑戰(zhàn)性的問(wèn)題。其中最常見(jiàn)的類型是草酸鈣結(jié)石，肝臟生成草酸的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的活性氧自由基，文獻(xiàn)上表示草酸鈣與自由基過(guò)度產(chǎn)生及氧化應(yīng)激損傷是草酸鈣結(jié)石產(chǎn)生的重要原因。自由基導(dǎo)致的氧化應(yīng)激因子相應(yīng)的增高已經(jīng)在腎結(jié)石患者中得到了證實(shí)[2]。黃酮類化合物具有豐富的生物活性、抗氧化功效及自由基消除作用，白藜蘆醇屬于黃酮類化合物之一，其分子量為228.243，結(jié)構(gòu)式是C14H12O3，價(jià)格低廉，在紅葡萄酒、紅葡萄皮、葡萄汁中含量很高，還兼?zhèn)淇寡住㈩A(yù)防血栓、糾正過(guò)敏、改善心肌缺血再灌注等功效[3]，但國(guó)內(nèi)目前還沒(méi)有關(guān)于白藜蘆醇對(duì)于乙二醇所致大鼠腎結(jié)石影響的報(bào)道，為了探討白藜蘆醇對(duì)于乙二醇所致大鼠腎結(jié)石的影響，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)給予大鼠灌胃乙二醇造石液，構(gòu)建大鼠腎結(jié)石模型，通過(guò)不同濃度的白藜蘆醇對(duì)于腎結(jié)石大鼠模型的干預(yù)，觀察并討論其對(duì)大鼠腎功能及結(jié)石形成可能存在的影響機(jī)制，為臨床了解腎結(jié)石的形成因素和預(yù)防腎結(jié)石形成提供參考。

1 材料與方

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

佳木斯大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購(gòu)得適齡SD雄性大鼠40只，重量180～210g。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及相關(guān)試劑

白藜蘆醇(純度98%)購(gòu)買(mǎi)自四川軒禾康生物科技有限公司；乙二醇(分析純)購(gòu)買(mǎi)自昆山惠爾眾化工有限公司；SOD酶及MDA酶聯(lián)免疫試劑盒于上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司采購(gòu)。

1.2 方法

1.2.1 分組、干預(yù)

將40只大鼠隨機(jī)分為4組(A、B、C、D)，每組10只，均普通飼料喂養(yǎng)；A組飲用水，B、C、D組均行1%乙二醇灌胃2mL/d，另外C組給予濃度為5mg/kg白藜蘆醇灌胃干預(yù)，D組給予濃度為10mg/kg白藜蘆醇灌胃干預(yù)。每周稱重，相應(yīng)調(diào)整白藜蘆醇劑量。

1.2.2 動(dòng)物取材

上述方法處理四周后，于大鼠眼球取血約6mL，離心后獲得血清，留以備用，將大鼠處死后，摘取大鼠腎臟，于冠狀面將腎臟平分兩半，用以測(cè)得相應(yīng)檢測(cè)指標(biāo)和腎組織HE染色。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)、檢測(cè)方法

大鼠血清測(cè)定肌酐、尿素氮含量(全自動(dòng)生化儀)；ELISA法檢測(cè)腎組織中MDA含量水平及SOD酶活性。

1.2.4 光鏡下腎組織改變?cè)u(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

將腎組織標(biāo)本石蠟切片、HE染色，顯微鏡下觀察，并對(duì)觀察的腎小球損傷及結(jié)晶形成情況進(jìn)行評(píng)判。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 白藜蘆醇對(duì)大鼠腎功能指標(biāo)的影響

B組大鼠血清肌酐、尿素氮含量水平均高于A組(P<0.05);在不同濃度白藜蘆醇處理后，測(cè)得C、D二組大鼠血清肌酐、尿素氮含量均低于B組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠腎功能指標(biāo)

2.2 大鼠腎組織中的SOD酶活性及MDA含量

B組大鼠SOD酶活性低于A組，而MDA含量水平高于A組(P<0.05);在被不同濃度白藜蘆醇處理后，測(cè)得C、D二組大鼠SOD酶活性均高于B組，MDA含量均低于B組(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠氧化還原指標(biāo)

2.3 大鼠腎組織病理變化及結(jié)晶

將切片置于光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)A組大鼠均為正常組織改變，未見(jiàn)明顯異常，幾乎沒(méi)有結(jié)晶產(chǎn)生；而B(niǎo)組大鼠可見(jiàn)腎小球血管不同程度的充血、腫脹，其周圍充滿大量單核細(xì)胞，腎小管擴(kuò)張，尤其遠(yuǎn)端腎小管明顯擴(kuò)張，大量結(jié)晶沉積，大部分結(jié)晶沉積在腎小管中；實(shí)驗(yàn)組C組，只觀察到少量結(jié)晶形成現(xiàn)，并且僅輕微腎小管擴(kuò)張的表；實(shí)驗(yàn)組D組，僅出現(xiàn)少量草酸鈣結(jié)晶，而腎小管結(jié)構(gòu)正常。見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠病理切片(×200)

3 討論

腎結(jié)石是泌尿外科最常見(jiàn)的疾病之一[4]，雖然腎結(jié)石屬于良性病變，但其亦可引起尿路梗阻，造成腎絞痛、腎積水，嚴(yán)重者甚至可以導(dǎo)致尿毒癥、感染性休克、反復(fù)的刺激發(fā)生腫瘤，均威脅到患者的生命健康。雖然外科手術(shù)已經(jīng)能夠解決大部分泌尿系結(jié)石問(wèn)題，但對(duì)于新結(jié)石的形成仍是無(wú)法預(yù)防的，據(jù)報(bào)道，未經(jīng)藥物治療的草酸鈣結(jié)石的復(fù)發(fā)率在1年為10%，5年為35%，10年為50%[5]，結(jié)石的高復(fù)發(fā)性和復(fù)雜性給患者帶來(lái)多次痛苦，多國(guó)學(xué)者致力于揭示腎結(jié)石的病因，希望能夠針對(duì)性的治療腎結(jié)石的復(fù)發(fā)，因此尋求一種新型、有效、價(jià)格低廉、無(wú)毒性、可長(zhǎng)期服用的防治腎結(jié)石的藥物，在未來(lái)可能會(huì)有廣闊的前景，成為未來(lái)研究的方向，故本實(shí)驗(yàn)選用價(jià)格低廉、無(wú)毒無(wú)公害的白藜蘆醇作為實(shí)驗(yàn)材料。

草酸鈣結(jié)石是其最常見(jiàn)的結(jié)石類型，而高草酸尿是草酸鈣結(jié)石形成的主要危險(xiǎn)因素[6]，草酸大部分是在肝臟中生成，是人體自然代謝的產(chǎn)物，一般情況下，對(duì)人體是無(wú)害的，然而當(dāng)尿中草酸的濃度過(guò)高，會(huì)導(dǎo)致尿pH的改變，并可以導(dǎo)致草酸鈣晶體在腎組織中的堆積，這些晶體無(wú)疑會(huì)破壞細(xì)胞功能，一旦細(xì)胞出現(xiàn)損害，會(huì)成為草酸鈣結(jié)晶黏附的一個(gè)位點(diǎn)，更多的草酸鈣結(jié)晶于此匯聚，形成惡性循環(huán)，甚至?xí)钄嗄I小管導(dǎo)致細(xì)胞死亡。乙二醇是人體內(nèi)形成草酸的前體物質(zhì)，乙二醇大鼠腎結(jié)石模型就是通過(guò)增加大鼠尿中草酸的濃度，使草酸鹽達(dá)到過(guò)飽和狀態(tài)，促使其析出形成草酸鈣結(jié)晶[7]。Thamilselvan等的研究發(fā)現(xiàn)腎小管上皮細(xì)胞處于高濃度草酸鹽的環(huán)境中更易產(chǎn)生活性氧(reactive oxygen species,ROS)[8]，因此乙二醇法成功造模的腎結(jié)石大鼠會(huì)出現(xiàn)全身性的ROS增加，ROS會(huì)通過(guò)血液循環(huán)，匯聚于腎組織，生物體內(nèi)是存在適量的抗氧化物質(zhì)，用于維持著生物體內(nèi)氧化還原的平衡，SOD酶是體內(nèi)一種重要的氧自由基清除劑，能夠第一時(shí)間清除過(guò)多的ROS，因此其活性強(qiáng)弱是機(jī)體對(duì)過(guò)氧化防御的重要體現(xiàn)。當(dāng)體內(nèi)ROS增多時(shí)，抗氧化物質(zhì)與其中和而消耗性的減少，當(dāng)ROS增多過(guò)度導(dǎo)致氧化還原平衡失調(diào)，就會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性，使包膜脂質(zhì)過(guò)氧化，產(chǎn)生丙二醛(MDA)，MDA 則是反映體內(nèi)過(guò)氧化嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)[9]。本研究用乙二醇法構(gòu)建大鼠草酸鈣結(jié)石模型，發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇干預(yù)后，MDA的含量下降，SOD酶活性升高，草酸鈣結(jié)晶減少，說(shuō)明白藜蘆醇可能通過(guò)使大鼠體內(nèi)外源性的抗氧化物質(zhì)增多，中和大鼠體內(nèi)過(guò)多的ROS，抑制了腎結(jié)石大鼠體內(nèi)過(guò)氧化反應(yīng)，調(diào)節(jié)和恢復(fù)其體內(nèi)氧化還原平衡，從而減少脂質(zhì)過(guò)氧化，因此抑制了結(jié)石的形成，同時(shí)被白藜蘆醇干預(yù)的大鼠，血清肌酐、尿素氮均明顯下降及腎小管的損傷程度明顯減少，這表示白藜蘆醇對(duì)腎結(jié)石模型大鼠的腎功能有一定保護(hù)作用。

綜上所述，白藜蘆醇可能通過(guò)抗氧化應(yīng)激作用減輕大鼠草酸鈣結(jié)石形成過(guò)程中的過(guò)氧化損傷，減輕大鼠腎小管的損害及結(jié)石的形成，并對(duì)腎功能有一定的保護(hù)作用；同時(shí)氧化應(yīng)激只是大鼠腎結(jié)石形成眾多途徑中的一條，由于本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)的局限性，可能忽略掉一些其他因素的影響，仍需后續(xù)研究。