張桂普，徐志毅

（常州市第四人民醫(yī)院，常州 213000）

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，且隨著人們生活方式改變，導(dǎo)致疾病發(fā)生率呈上升趨勢，居女性惡性腫瘤首位［1］。但是，由于乳腺并非人體生命活動(dòng)重要的器官，原位乳腺癌并不會(huì)致命［2］。乳腺癌改良根治術(shù)是乳腺癌患者中常用的治療方法，通過手術(shù)能切除病灶組織，延長患者壽命，但是患者術(shù)后由于缺乏有效的預(yù)后評(píng)估指導(dǎo)，導(dǎo)致患者遠(yuǎn)期預(yù)后較差［3，4］。Ki67屬于核增殖標(biāo)志基因，已經(jīng)證實(shí)在肺癌、胃癌等惡性腫瘤中呈高表達(dá)，且除了在G0期的整個(gè)細(xì)胞周期中的表達(dá)，能在有絲分裂后期迅速降解，且患者陽性率越高，預(yù)后越差［5，6］。但是，Ki67在乳腺癌根治術(shù)后中的表達(dá)及與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性及預(yù)后研究較少。因此，本文采用隨機(jī)對(duì)照方法進(jìn)行研究，探討乳腺癌改良根治術(shù)后Ki67表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性及對(duì)患者預(yù)后的價(jià)值，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選擇2014年3月～2018年3月進(jìn)行改良根治術(shù)乳腺癌患者92例作為對(duì)象，設(shè)為觀察組，年齡（30～77）歲，平均（49.50±5.83）歲；腫瘤直徑（1～4.5）cm，平均（2.10±0.57）cm；TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期10例，ⅢA期72例。病理學(xué)類型：浸潤性導(dǎo)管癌60例，浸潤性小葉癌13例，粘液癌9例，導(dǎo)管內(nèi)癌伴微浸潤10例；腋窩淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移：轉(zhuǎn)移57例，未轉(zhuǎn)移35例。選擇同期入院手術(shù)治療的乳腺良性疾病患者58例，設(shè)為對(duì)照組，年齡（18～65）歲，平均（42.12±6.8）歲。疾病類型：纖維囊性乳腺病21例，乳腺纖維腺瘤25例，漿細(xì)胞性乳腺炎4例，乳腺分葉狀腫瘤8例。兩組臨床資料差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 納入、排除標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合乳腺癌、乳腺良性疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］；（2）乳腺癌患者均擬行改良根治術(shù)治療，且患者均能耐受；（3）均能嚴(yán)格執(zhí)行醫(yī)囑完成有關(guān)檢查、診斷。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并妊娠期、哺乳期或伴有明顯精神異常者；（2）觀察組患者手術(shù)前給予放化療、免疫治療者；（3）合并自身免疫系統(tǒng)疾病、凝血功能異?；虬橛衅渌麗盒阅[瘤者。

1.3 方法（1）儀器與試劑。①儀器。Benchmark XT全自動(dòng)免疫組化儀（羅氏Ventana公司）；②試劑。Ventana公司的EZ prep（脫蠟清洗緩沖液）、LCS（封蓋清洗緩沖液）、2XSSC（檸檬酸鈉清洗緩沖液）、Reaction Buffer（清洗緩沖液）、CCI（細(xì)胞前處理清洗緩沖液）、ultraView Universal DAB（DAB染色液）、Hematoxylin（蘇木素染色液）、Bluing Reagent（返藍(lán)染色液）、KI67抗體（北京邁新科技有限公司）（克隆號(hào) MIB-1）。（2）標(biāo)本的采集。觀察組手術(shù)過程中搜集乳腺癌病灶標(biāo)本及癌旁（距離病灶組織>3cm）標(biāo)本，對(duì)照組手術(shù)過程中單純收集切除的病灶標(biāo)本，浸泡在濃度為10.0%福爾馬林中，備用。（3）檢測方法。取兩組病灶組織，放入全自動(dòng)脫水機(jī)，過夜脫水12小時(shí)以上，取出后用石蠟包埋成塊，切成4um厚的切片，置于72℃烤片機(jī)烤片2小時(shí)。編輯儀器程序并保存：Deparaffinization（脫蠟）→Cell Conditioning（Standard）（細(xì)胞前處理）→ Ab Incubation Temperatures（37°c，32min）（抗體孵育）→Counterstain（Hematoxylin 8 min）（蘇木素染色）→Post Counterstain（Bluing Reagent 8 min）（返藍(lán)染色）。其他操作參數(shù)儀器出廠前已經(jīng)給予了預(yù)設(shè)置。接著打印項(xiàng)目標(biāo)簽并貼在已切好的組織切片上，置于烤片機(jī)直至蠟溶解。具體操作程序如下：1）將實(shí)驗(yàn)所需試劑及輔助試劑放在儀器托盤上，并將其置于儀器上。2）將玻片置于儀器卡槽內(nèi)。3）開始運(yùn)行程序。4）完成后取下玻片，洗滌，干燥，封片。（4）判斷方法。采用半定量積分法判斷結(jié)果：陽性細(xì)胞數(shù)≤5.0% 0分，6%～25.0% 1分，25%～50% 2分，50%～75% 3分，≥75%4分、陽性強(qiáng)度（陰性0分，淡黃色1分，黃色2分，棕黃色3分）完成免疫組化染色評(píng)分，兩種積分相乘：0分為陰性（-），1～4分弱陽性（+），5～8分為陽性（++），9～12分為強(qiáng)陽性（+++）。陽性率為各實(shí)驗(yàn)組弱陽性，陽性，強(qiáng)陽性病例數(shù)/該組總病例數(shù)。（5）Ki67表達(dá)影響因素。查閱觀察組患者病歷資料，統(tǒng)計(jì)患者年齡、腫瘤大小、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、預(yù)后情況，記錄不同病理下Ki67蛋白表達(dá)陽性率并進(jìn)行單因素分析。（6）Ki67表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)相關(guān)性。采用SPSSPearson 相關(guān)性分析軟件對(duì)乳腺癌術(shù)后Ki67表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后進(jìn)行相關(guān)性分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 18.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)，采用n（%）表示，計(jì)量資料行t檢驗(yàn)，采用mean±SD表示，采用SPSS Pearson 相關(guān)性分析軟件分析Ki67表達(dá)蛋白表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后的相關(guān)性，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Ki67蛋白陽性表達(dá)率比較觀察組癌旁組織與對(duì)照組Ki67蛋白陽性表達(dá)率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；觀察組病灶組織Ki67蛋白陽性表達(dá)率，均高于癌旁組織（P<0.05），免疫組化結(jié)果表明：Ki67蛋白在乳腺癌中呈高表達(dá)，且主要定位于細(xì)胞核中，但是在癌旁組織、對(duì)照組表達(dá)較低或不表達(dá)，見表1和圖1。

表1 兩組Ki67蛋白陽性表達(dá)率比較［n（%）］

2.2 乳腺癌改良根治術(shù)后不同病理下Ki67蛋白陽性率比較乳腺癌改良根治術(shù)后不同病理下Ki67蛋白陽性率與年齡、病理學(xué)類型無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；乳腺癌改良根治術(shù)后不同病理下Ki67蛋白陽性率與腫瘤大小、腫瘤分期、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與預(yù)后存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

圖1 不同組織Ki67蛋白免疫組化結(jié)果（×200）

表2 乳腺癌改良根治術(shù)后不同病理下Ki67蛋白陽性率比較

2.3 乳腺癌術(shù)后Ki67蛋白表達(dá)陽性率與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后相關(guān)性分析SPSSPearson 相關(guān)性分析結(jié)果表明：乳腺癌術(shù)后Ki67蛋白陽性率與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)性（P<0.05）；乳腺癌術(shù)后Ki67蛋白陽性率與預(yù)后呈負(fù)相關(guān)性（P<0.05），見表3。

表3 乳腺癌術(shù)后Ki67蛋白陽性率與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后相關(guān)性分析

3 討論

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，且臨床上多以改良根治術(shù)治療為主，通過手術(shù)能切除病灶組織，延緩病情發(fā)展［7，8］。但是，部分患者術(shù)后由于缺乏理想的預(yù)后指標(biāo)，導(dǎo)致患者遠(yuǎn)期效果較差，術(shù)后腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較高，難以達(dá)到預(yù)期的治療效果［9］。Ki67是一種存在于增殖細(xì)胞中的核抗原，其表達(dá)水平與染色質(zhì)、細(xì)胞有絲分裂存在緊密的聯(lián)系［10］。臨床研究表明［5，11］：Ki67基因與細(xì)胞的周期存在緊密的聯(lián)系，在G1晚期/S早期表達(dá)水平相對(duì)較低，但是在S期后半期Ki67基因表達(dá)想回迅速升高，且細(xì)胞分裂完畢后Ki67基因則又會(huì)下降。因此，加強(qiáng)Ki67蛋白測定能了解腫瘤的增殖活性。本研究中，觀察組病灶組織Ki67蛋白陽性率，均高于癌旁組織，免疫組化結(jié)果表明：Ki67蛋白在乳腺癌中呈高表達(dá)，且主要定位于胞質(zhì)中，但是在癌旁組織、對(duì)照組表達(dá)較低或不表達(dá)，說明Ki67蛋白在乳腺癌改良根治術(shù)后呈高表達(dá)，能直接參與疾病的發(fā)生、發(fā)展。國外學(xué)者研究表明［12］：雖然Ki67抗原的免疫組織化學(xué)檢測已用于評(píng)估癌癥增殖多年，但是否適用于乳腺癌的臨床管理中常規(guī)標(biāo)志物還存在爭議。目前Ki67評(píng)估主要用于評(píng)估預(yù)后并指導(dǎo)關(guān)于輔助治療選擇的決定，以及預(yù)測ER +/ HER2-乳腺癌中新輔助治療的反應(yīng)。本研究中，乳腺癌改良根治術(shù)后不同病理下Ki67蛋白陽性率與腫瘤大小、腫瘤分期、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與預(yù)后存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示Ki67可以用于評(píng)估乳腺癌改良根治術(shù)后的療效，進(jìn)而可以更好的指導(dǎo)臨床。Ki67蛋白在乳腺癌改良根治術(shù)后表達(dá)受到的影響因素較多，可能直接參與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展。臨床研究表明［13，14］：增殖細(xì)胞中Ki67蛋白表達(dá)與細(xì)胞周期存在緊密的聯(lián)系，但是在G0中并不表達(dá)，能作用腫瘤增殖活性可靠的指標(biāo)，能反應(yīng)細(xì)胞的增殖速率。Ki67蛋白表達(dá)陽性率越高，腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率越高，患者治療預(yù)后越差。本研究中，SPSSPearson 相關(guān)性分析結(jié)果表明：乳腺癌術(shù)后Ki67表達(dá)蛋白陽性率與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)性；乳腺癌術(shù)后Ki67表達(dá)蛋白陽性率與預(yù)后呈負(fù)相關(guān)性。因此，乳腺癌改良根治術(shù)后應(yīng)增加Ki67蛋白陽性率檢測，可以根據(jù)其表達(dá)水平評(píng)估患者預(yù)后，對(duì)于Ki67蛋白陽性率較高者則應(yīng)考慮進(jìn)行放化療，進(jìn)一步鞏固手術(shù)效果，促進(jìn)患者早期恢復(fù)。

可見，乳腺癌改良根治術(shù)后Ki67蛋白陽性率呈高表達(dá)，且與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成正相關(guān)性，能評(píng)估患者預(yù)后，值得推廣應(yīng)用。