周朝霞，楊小紅

（1.湖南師范大學(xué)附屬長沙醫(yī)院/長沙市第四醫(yī)院，長沙 410006；2.湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，長沙 410013）

直接抗人球蛋白實驗（DAT）可以檢測RBC表面有無不完全抗體和補(bǔ)體，對于診斷自身免疫性溶血性貧血（AIHA）、新生兒溶血病（HDN）、冷凝集素綜合癥（CSF）等有重要的臨床意義［1］。以往研究報道，住院患者中DAT陽性率為14.14%［2］，正常人群陽性率為0.1%［3］。目前對于臨床DAT陽性患者的性別、科室、病種分布的研究報道較多，但研究對象大多為未輸血患者，結(jié)果有一定局限性。本研究通過分析我院DAT陽性的輸血患者74例，分析不同DAT陽性患者科室分布和疾病類型，并對抗體或補(bǔ)體類別分型，比較不同DAT凝集強(qiáng)度患者輸血前后Hb、LDH差異和輸血效果之間的差異，結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象2019年01月～2019年12月間來我院輸注RBC患者714例，其中DAT陽性 74例，男性31例，女性43例，對于進(jìn)行多次輸血的DAT陽性患者，采集第一次輸血前后相關(guān)結(jié)果。

1.2 儀器與試劑DAT分型檢測試劑由上海血液生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，抗人球蛋白卡由長春博訊生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，免疫微柱孵育器以及TD-A血型卡專用離心機(jī)有長春博研器械公司生產(chǎn)。血常規(guī)分析儀及其配套試劑由Sysmex公司生產(chǎn)，生化檢測由HITACHI7600完成，檢測前均嚴(yán)格進(jìn)行相關(guān)質(zhì)控與校正，確保儀器檢測質(zhì)量。

1.3 方法

1.3.1 直接抗人球蛋白試驗采集患者EDTA-K2抗凝血2～3mL，3000r/min，離心3min后分離RBC和血漿，低離子液制備0.8%的RBC懸液，取RBC懸液50μL加入抗人球蛋白卡中，TD-A血型卡專用離心機(jī)900r/min離心2min，1500r/min離心3min，取出抗人球卡判讀結(jié)果。

1.3.2 直接抗人球分型試驗取玻璃試管3支，做好相應(yīng)標(biāo)記，分別滴加低離子液（LISS）制備3～5%RBC懸液50uL，再分別滴加抗-IgG+C3d、抗-IgG、抗C3d抗體50uL，Kobat專用血型離心機(jī)離心15s，取出試管輕輕震蕩，觀察凝集強(qiáng)度。

1.3.3 血常規(guī)、生化指標(biāo)的檢測采集患者EDTA-K2抗凝血2～3mL，SysmexXT-4100i檢測患者輸注前后血常規(guī)。干管采集患者靜脈血液，通過HITACHI7600生化分析儀檢測患者輸注前后乳酸脫氫酶（LDH）。

1.3.4 輸血療效判斷顯效：輸注后24h血紅蛋白增加量不低于5（g/L）×60/患者體重。部分有效：輸注后24h血紅蛋白增加量低于5（g/L）×60/患者體重，高于輸注前。無效：輸注后24h血紅蛋白增加量低于輸注前。

1.4 統(tǒng)計分析采用SPSS 16.0軟件建立數(shù)據(jù)庫進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以mean±SD表示，采用配對t檢驗，率的比較采用卡方檢驗，P<0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DAT陽性輸血患者科室、疾病類型分布共統(tǒng)計不同科室需輸血患者714例，DAT陽性患者74例，陽性率10.36%，其中男性31例，女性43例，DAT陽性患者主要集中在血液科（36，48.65%）、風(fēng)濕免疫科（12，16.22%）、感染科（11，14.86%）、腎內(nèi)科（10，13.51%）。疾病類型主要為AIHA（24，32.43%）、尿毒癥（8，10.81%）、淋巴瘤（6，8.11%）、病毒性肝炎（6，8.11%）。不同疾病性別分布上有差異，SLE、干燥綜合征DAT陽性的輸血患者全部為女性，病毒性肝炎DAT陽性的輸血患者大部分為男性（見表1）。

表1 DAT陽性輸血患者科室、疾病類型分布

2.2 直接抗人球分型試驗結(jié)果分析74例DAT陽性標(biāo)本中IgG+C3d陽性46例，占比62.16%，占比最高，單獨IgG陽性19例，占比15.68%，占比次之，單獨C3d陽性9例，占比12.16%，占比最少，各DAT陽性抗體和補(bǔ)體數(shù)量及構(gòu)成比見表2。

2.3 DAT不同凝集強(qiáng)度與Hb、LDH的關(guān)系DAT凝集強(qiáng)度4+時，Hb濃度為53.58±4.27g/L，LDH為447.65±32.57 U/L，凝集強(qiáng)度3+時，Hb濃度為55.55±6.75g/L，LDH為425.55±42.57U/L，凝集強(qiáng)度2+時，Hb濃度為56.74±4.88g/L，LDH為434.64±36.55U/L，凝集強(qiáng)度≤1+時，Hb濃度為59.82±5.12g/L，LDH為417.21±41.27U/L。經(jīng)統(tǒng)計分析表明，DAT凝集強(qiáng)度4+患者輸血前Hb濃度低于凝集強(qiáng)度≤1+患者，各組輸血后Hb濃度均高于輸血前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），各組輸血后LDH水平均數(shù)低于輸血前，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05，見表3）。

表2 直接抗人球蛋白分型試驗結(jié)果

表3 DAT不同凝集強(qiáng)度與Hb、LDH的關(guān)系

2.4 DAT不同凝集強(qiáng)度輸血效果比較74例DAT陽性患者輸血無效7例，輸血有效67例，有效率為90.54%。其中DAT凝集4+患者18例，輸血無效2例，輸血有效16例，有效率為88.89%；DAT凝集3+患者16例，輸血無效1例，輸血有效15例，有效率為93.75%；DAT凝集2+患者17例，輸血無效2例，輸血有效15例，有效率為88.23%；DAT凝集≤1+患者23例，輸血無效2例，輸血有效21例，有效率為91.30%。不同DAT凝集強(qiáng)度的患者輸血有效率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），結(jié)果見表4。

表4 DAT不同凝集度輸血效果比較

3 討論

本研究結(jié)果顯示DAT陽性輸血患者主要集中血液科、風(fēng)濕免疫科、感染科和腎內(nèi)科，主要疾病類型為AIHA、尿毒癥、淋巴瘤、病毒性肝炎等，與程金鳳［4］等結(jié)果有部分相符。AIHA的發(fā)生是因為B淋巴細(xì)胞功能亢進(jìn)而使體內(nèi)產(chǎn)生抗紅細(xì)胞自身抗體［5］，需要長期反復(fù)輸血，機(jī)體容易被同種異體抗原致敏，AIHA患者DAT陽性原因既有自身抗體吸附也有異體RBC輸注后同種抗體吸附導(dǎo)致。尿毒癥患者是因血漿中蛋白質(zhì)包括IgG和補(bǔ)體，非特異性吸附于RBC表面，導(dǎo)致DAT陽性。重癥病毒性肝炎之所以出現(xiàn)DAT陽性是因為免疫復(fù)合物所致，也有部分是因為藥物-抗體復(fù)合物吸附與RBC表面所致［6］。目前認(rèn)為藥物所致的DAT陽性有幾種類型［7］，如半抗原型（青霉素類）、免疫復(fù)合物機(jī)型（奎寧）、自身抗體型（布洛芬、環(huán)孢菌素等）和非特異性吸附型（二、三代頭孢），藥物所致DAT在停藥后DAT可以轉(zhuǎn)成陰性。

DAT分型試驗結(jié)果表明，IgG+C3d陽性占比最高，其次為單獨IgG，單獨C3d陽性患者最少。梅城［8］等研究結(jié)果表明，DAT陽性的分型鑒定除了以上三種外，還有IgA、IgM、C3c等，不同疾病類型與DAT分型結(jié)果之間存在一定相關(guān)性。本研究24例AIHA患者中，IgG+C3d陽性17例，占比70.83%，單純IgG陽性5例，占比20.83%，單純C3d陽性2例，占比8.33%。通過DAT分型可以對AIHA進(jìn)行初步分類，溫抗體型AIHA（WAIHA）分型結(jié)果通常IgG+C3d陽性；冷凝集綜合征（CAS）通常IgG陰性，C3d陽性，免疫球蛋白為IgM型；藥物導(dǎo)致的AIHA通常IgG陽性。以往研究表明DAT陽性紅細(xì)胞生存時間縮短，這是因為IgG致敏RBC的Fc段被巨噬細(xì)胞Fc受體識別結(jié)合，引起RBC被吞噬破壞，導(dǎo)致溶血、貧血的發(fā)生［9］。本研究發(fā)現(xiàn)DAT陽性的輸血人群中，DAT凝集強(qiáng)度與輸血前Hb存在一定相關(guān)性，凝集強(qiáng)度≤1+的患者，Hb水平高于凝集強(qiáng)度4+的患者，兩者間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。LDH是反應(yīng)急性溶血性貧血程度和治療效果的指標(biāo)［10］，本次納入研究的74例患者，LDH水平與參考值比，有不同程度的上升，RBC輸注后均數(shù)較輸血前有不同程度降低，但經(jīng)統(tǒng)計分析表明不同凝集程度DAT陽性患者，LDH差異無統(tǒng)計學(xué)意義，輸血前后差異無統(tǒng)計學(xué)意義。可能因為患者疾病類型不同，LDH在感染、白血病、肝病等疾病時亦有不同程度的升高有關(guān)，有待后續(xù)進(jìn)一步比較同種類型疾病DAT凝集強(qiáng)度與LDH的關(guān)系。74例DAT陽性患者均進(jìn)行了輸血治療，輸血前Hb＜60g/L，符合《內(nèi)科輸血指南》要求［11］，與輸血前比較，各組輸血后Hb均不同程度上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，DAT凝集強(qiáng)度不同患者輸血有效率差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明DAT凝集強(qiáng)度不同不會導(dǎo)致外來RBC急性溶血。

可見，不同疾病導(dǎo)致DAT陽性的機(jī)制不同，通過DAT分型實驗有利于我們能對疾病類型做出初步判斷，從而選擇合適的治療手段。在輸血治療患者中，DAT凝集強(qiáng)度與輸血前Hb有一定相關(guān)性，凝集強(qiáng)度越高，Hb水平越低，因此在工作中，對于DAT凝集強(qiáng)度高的患者提示我們應(yīng)該優(yōu)先進(jìn)行交叉核血，確?；颊吣芗皶r獲得輸血支持。不同凝集強(qiáng)度患者輸注有效率差異無統(tǒng)計學(xué)意義，至于輸入體內(nèi)RBC存活時間長短是否有影響，有待于后續(xù)進(jìn)一步的研究。