周蓉(南京市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院，江蘇 南京 210000)

0 引言

噁蟲威殺蟲劑是一種氨基甲酸酯類殺蟲劑，具有觸殺和胃毒作用，能夠高效殺蟲，并且殘留率低[1-2]，是一種衛(wèi)生和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)兩用的廣譜殺蟲劑。但由于噁蟲威在堿性介質(zhì)中易分解、難溶于水且具有中等危害毒性[3]，因此可以將噁蟲威殺蟲劑進(jìn)行微膠囊化從而降低毒性，延長其有效期。殺蟲劑分析方法報道的有分光光度法、液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等。目前，對于噁蟲威殺蟲劑及其微膠囊有效含量的測定方法的研究相對較少。本研究采用反相高效液相色譜法，對噁蟲威殺蟲劑及其微膠囊的有效含量進(jìn)行分析研究，并對此方法的有效性進(jìn)行評估。高效液相色譜技術(shù)簡稱HPLC技術(shù)是一種利用高壓泵將極性溶劑泵入裝有填充劑的色譜柱中，經(jīng)進(jìn)樣閥注入的樣品被流動相帶入色譜柱內(nèi)進(jìn)行分離后進(jìn)入檢測器，由記錄儀記錄色譜信號并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理得到分析結(jié)果的一種新型技術(shù)[4-5]。由于HPLC技術(shù)具有響應(yīng)快速、反應(yīng)靈敏、準(zhǔn)確度好、精密度高的優(yōu)點，目前已廣泛使用于農(nóng)藥、氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖、金屬有機(jī)物等物質(zhì)的分析[6]。

1 實驗部分

1.1 實驗儀器與試劑

儀器：920-LC高效液相色譜儀(美國Varian公司)；Millipore Q超純水器(美國Millipore公司)；Inertsil ODS-2色譜柱(島津(上海)實驗器材有限公司)；超聲波清洗機(jī)(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司)；FA1604N分析天平(上海菁海儀器有限公司)；0.22μm有機(jī)相濾膜。試劑：噁蟲威殺蟲劑標(biāo)樣(上海谷研有限公司)；噁蟲威殺蟲劑原藥(某公司)；噁蟲威殺蟲劑微膠囊(自制)；乙腈：色譜純(西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 高效液相色譜檢測條件

①色譜柱：Inertsil ODS-2(4.6×250mm，5μm)；②流動相：乙腈：水=6:4(V:V)；③流速：1.0mL/min；④柱溫：35℃；⑤進(jìn)樣量：20μL；⑥檢測波長：254nm。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

確稱取噁蟲威殺蟲劑標(biāo)樣0.0500g(精確到0.0001g)置于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，搖勻，配制500ppm的噁蟲威標(biāo)樣儲備液。分別移取噁蟲威儲備液1、2、5、10、2、50mL 置于100mL容量瓶中，用乙腈定容，搖勻。測試前用0.22μm的有機(jī)相濾膜過濾。在上述高效液相色譜條件下進(jìn)行測試，以噁蟲威殺蟲劑濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后利用精密度、檢出限和加標(biāo)回收率來對本測試方法進(jìn)行評價。

1.2.3 噁蟲威殺蟲劑微膠囊有效成分提取

準(zhǔn)確稱取0.1000g噁蟲威殺蟲劑微膠囊樣品于樣品瓶中，加入10mL乙腈，室溫下超聲萃取60min，取上清液用0.22μm的有機(jī)相濾膜過濾，待檢。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

在190～400nm的波長范圍內(nèi)，掃描了噁蟲威的吸收光譜。結(jié)果顯示，噁蟲威在254nm處有最大吸收波長，因此選擇254nm作為試驗的檢測波長。根據(jù)噁蟲威的性質(zhì)，選擇乙腈作為有機(jī)溶劑，研究發(fā)現(xiàn)乙腈-水體系不僅溶解度高，且柱壓低，因此選擇乙腈-水作為流動相。經(jīng)測定，選用乙腈：水=6:4作為流動相。當(dāng)流速分別為0.8、1.0、1.5、2.0mL/min，考察不同流速對分離效果的影響。研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)流速達(dá)到1.0mL/min時，有效成分噁蟲威和其他雜質(zhì)能夠很好的分離且峰形對稱完整；柱壓隨著流速的增大而不斷增加。綜合考慮分離效果、峰形、柱壓等因素，選擇流速為1.0mL/min。在上述高效液相色譜條件下對噁蟲威標(biāo)樣和原藥進(jìn)行測定，分別在2.34、2.33min時出峰，保留時間一致。圖1、2中噁蟲威有效成分和雜質(zhì)均能夠有效分離，且峰形對稱完整，基線穩(wěn)定，出峰時間短，能夠準(zhǔn)確高效地進(jìn)行檢測。

圖1 噁蟲威殺蟲劑標(biāo)樣高效液相色譜圖

圖2 噁蟲威殺蟲劑原藥高效液相色譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

定量分析主成分時，要求標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)系數(shù)高于0.999。在上述高效液相色譜檢測條件下，噁蟲威殺蟲劑濃度與峰面積響應(yīng)值線性關(guān)系如圖3所示。標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程為y=2730.7x+13103.3，線性相關(guān)系數(shù)為0.99925，滿足定量分析要求。

圖3 噁蟲威殺蟲劑濃度與峰面積響應(yīng)值線性關(guān)系圖

由于本方法將用于噁蟲威原藥及其微膠囊樣品的定量分析，因此需要通過精密度、檢出限、加標(biāo)回收率來進(jìn)行評價。

2.3 精密度測試

選擇濃度為50ppm的噁蟲威溶液樣品，在上述高效液相色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣7次進(jìn)行相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)計算，用相對標(biāo)準(zhǔn)偏差來表征該方法的精密度。如表1。

對主成分進(jìn)行定量分析時，要求此方法的RSD在0～3%之間。計算得RSD為0.64%，可以達(dá)到定量分析的要求。

2.4 加標(biāo)回收率測試

取濃度為100ppm的噁蟲威溶液樣品0.8mL，加入濃度為100ppm的噁蟲威殺蟲劑/甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2mL中，形成加標(biāo)樣進(jìn)行測定。

表1 精密度分析結(jié)果

計算得到加標(biāo)回收率R=104.1%，符合95%～105%的要求。如表2。

表2 加標(biāo)回收率分析結(jié)果

2.5 噁蟲威殺蟲劑微膠囊有效成分測定

在上述液相色譜條件下，測定噁蟲威殺蟲劑微膠囊有效成分的萃取液，保留時間為2.32min。在相同的高效液相色譜條件下，噁蟲威殺蟲劑標(biāo)樣、原藥與噁蟲威殺蟲劑微膠囊有效成分萃取液二者保留時間一致。

3 結(jié)語

文章建立了一種測定噁蟲威殺蟲劑及其微膠囊有效含量的高效液相色譜方法，采用C18反向色譜柱，以乙腈：水=6:4作為流動相，流速為1.0mL/min，柱溫為35℃，實現(xiàn)了噁蟲威有效成分和其他雜質(zhì)的有效分離。該液相色譜條件有良好的精密度和回收率，能夠高效、準(zhǔn)確地對噁蟲威殺蟲劑及其微膠囊有效成分進(jìn)行定量分析。