康軼青，劉 錚，張伯偉

( 河南省紅十字血液中心科研外事科，鄭州 450012)

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是全球分布的重大公共衛(wèi)生健康問題，HBV可以通過血液傳播，因此也是輸血安全研究領(lǐng)域中的重要研究方向。全球有 2.57 億人長期感染HBV，其中15%～25%的 HBV 感染患者最終發(fā)展為肝硬化及肝癌，2015年HBV感染在全球共造成了 88.7 萬人死亡[1]。我國更是乙型肝炎(簡稱乙肝)大國，2015年國家調(diào)查數(shù)據(jù)顯示1～59歲人群中HBsAg感染率為5.2%[2]，雖然健康成年人在受到HBV感染后有90%以上會在半年內(nèi)完全清除病毒并痊愈，但仍有8%～10%會逐漸轉(zhuǎn)為慢性乙肝、肝硬化甚至是肝細胞癌[3]，HBV感染的結(jié)局在很大程度上取決于個體對于病毒的免疫過程。免疫反應(yīng)不同進而出現(xiàn)不同的臨床過程和表型[4-5]，人類白細胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)在人類所有基因組中多態(tài)性最高，最為復(fù)雜,在人類免疫應(yīng)答中的重要作用是提呈抗原以供T細胞識別，已有研究[5]顯示機體對于HBV的易感性或抗性與個體HLA基因有關(guān)，感染后的轉(zhuǎn)歸和結(jié)局也會受到不同程度的影響，但由于全世界不同種族、不同地域人群的HLA等位基因及其單體型分布具有明顯特征性，因此各地的研究結(jié)論也不盡相同。本研究通過分析比較2組研究對象間HLA-A、B等位基因分布差異，進一步研究鄭州地區(qū)獻血者HLA-A、B多態(tài)性和HBV之間的關(guān)聯(lián)性，為針對乙肝開展基因預(yù)防和基因治療提供理論基礎(chǔ)，報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象 選取HBV抗體經(jīng)過2遍酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測均陽性的129名獻血者為乙肝組，并以鄭州地區(qū)3 874名健康造血干細胞志愿者為健康對照組。本研究所有血液標(biāo)本的采集均征得獻血者的同意。2組研究對象的基本資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 2組研究對象基本資料比較[ n(%)]

1.2 方法

1.2.1 HBV抗體檢測 對乙肝組標(biāo)本采用2個廠家的試劑盒(上?？迫A生物工程股份有限公司及北京萬泰生物藥業(yè)有限公司)進行2遍 ELISA平行檢測。實驗操作和判定結(jié)果嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行。

1.2.2 HLA檢測 提取人類基因組DNA均采用TBG全自動DNA提取系統(tǒng)(DNA提取試劑盒購自美國TBG公司)，采用聚合酶鏈-序列特異性寡核苷酸探針(polymerase chain reaction-sequence-specific oligonucleotide,PCR-SS0)技術(shù)對HLA位點在Luminex平臺進行基因分型(SSOP試劑盒購自美國Thermo Fisher公司)。

2 結(jié)果

HLA-A、B位點在2組間有明顯差異的基因頻率，見表2。其中A*11、A*29、A*31、B*56的頻率在乙肝組中高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)，B*07在乙肝組中頻率低于健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.022，OR=0.369)。

表2 HLA-A、B基因型與HBV的關(guān)聯(lián)分析[ n(%)]

表2(續(xù))

3 討論

大多數(shù)人感染HBV后能自動清除，而有些人群感染后卻發(fā)展為肝炎甚至肝癌，表明HBV感染具有個體差異。HBV 病毒的清除依賴于宿主的免疫應(yīng)答差異，而個體的免疫應(yīng)答能力取決于主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex,MHC)[6]，HBV感染初期由NK細胞介導(dǎo)的天然免疫反應(yīng)缺失，宿主依靠MHC分子對HBV的識別并提呈給T細胞或B細胞，因此MHC分子是通過細胞免疫和體液免疫對HBV感染作出清除反應(yīng)的[7-8]。相對于HLA-Ⅱ類基因，HLA-Ⅰ類基因與HBV感染的相關(guān)性研究報道較少，2013年HU等[9-10]通過對 5 181 例HBV感染者與 6 610例健康人之間的基因關(guān)聯(lián)分析研究，發(fā)現(xiàn) HLA-C 相關(guān)明顯增加HBV感染風(fēng)險，并發(fā)現(xiàn)該SNP rs3130542A位點與HBV持續(xù)性感染及增加宮內(nèi) HBV垂直感染均相關(guān)。HLA-A、B基因與HBV感染相關(guān)性研究國內(nèi)較少開展，盧曉敏等[11]對于山東地區(qū)HLA-A基因頻率與HBV感染的相關(guān)性研究中發(fā)現(xiàn)HLA-1101與HBV攜帶者相關(guān)以及劉錚等[12]對于河南地區(qū)的研究結(jié)果中HBV感染患者組HLA-B*07明顯低于對照組，與本研究結(jié)果相近；而梁軍等[13]對于新疆維吾爾族的研究中發(fā)現(xiàn)，HLA-A33與HBV攜帶者相關(guān)，HLA-B52具有較強抗HBV感染能力，與本研究結(jié)果相差較大，可能為不同種族與地區(qū)研究人群HLA多態(tài)性相差較大的原因。

本研究采用PCR-SS0完成乙肝組和健康對照組血液標(biāo)本的HLA-A、B基因分型，分析2組基因頻率是否存在統(tǒng)計學(xué)差異，結(jié)果顯示，A*11、A*29、A*31、B*56等基因型與HBV抗體陽性有顯著正相關(guān)，而B*07則與HBV抗體陽性呈負相關(guān)，2組基因型可能分別為HBV感染的易感基因和保護基因。為深入研究HLA 基因型對人類HBV感染的影響提供了線索，從而達到在基因水平進行HBV的預(yù)防及治療。