黃 燕 李書(shū)芹 劉合代 梁洪享 張 明 黃 騫 袁翠堂 徐菊娣 廖志軍 楊志勇

（上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院崇明分院，上海 202155）

乳腺癌是女性第一位的惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展與多種基因有關(guān)[1]。TBX3 基因是調(diào)節(jié)人體生長(zhǎng)發(fā)育的基因，主要調(diào)控體內(nèi)發(fā)育相關(guān)信號(hào)通路，它與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展及干細(xì)胞分化有關(guān)[2]。前期研究發(fā)現(xiàn)，TBX3 在乳腺癌組織中高表達(dá)，并且與多種臨床病理因素有關(guān)，但它對(duì)乳腺癌的生存因素有無(wú)影響，尚不明確。因此，本研究旨在通過(guò)對(duì)比TBX3 高表達(dá)及低表達(dá)組患者的無(wú)瘤生存期（DFS）率，以進(jìn)一步探討TBX3 對(duì)乳腺癌患者術(shù)后預(yù)后的影響，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院崇明分院2011 年1 月至2013 年12 月手術(shù)切除的乳腺癌患者102 例作為研究對(duì)象，術(shù)前未行放射、化學(xué)或靶向治療，患者病理標(biāo)本保存完好，資料齊全，詳細(xì)記錄臨床病例資料，并隨訪患者的5 年DFS。隨訪時(shí)間從手術(shù)日開(kāi)始計(jì)算至2018 年12 月30 日截止，如出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移或死亡則終止隨訪。門(mén)診隨訪以治療后1 ～2 年每3 個(gè)月1 次，治療后 3 ～ 5 年每 6 個(gè)月 1 次，電話隨訪每月 1 次。102 例患者中，有5 例失訪予以剔除，共收集有效病例97 例。97 例乳腺癌患者均為女性，年齡39 ～88 歲，平均年齡（60.3±5.4）歲。其中年齡≤ 65 歲者 59 例，＞ 65 歲者38 例；月經(jīng)情況，絕經(jīng) 73 例，未絕經(jīng) 24 例；腫塊大小，腫塊≤ 2 cm 者 53 例，腫塊＞ 2 cm 者 44 例；29 例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，68 例無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；分期情況，Ⅰ期44 例，Ⅱ期33 例，Ⅲ期 20 例；免疫組化，P53（+）49 例，P53（-）48 例。選擇22 例同期行手術(shù)的良性乳腺腫瘤組織作為對(duì)照組。

1.2 TBX3 檢測(cè)及結(jié)果判定

試劑采用Abcam 公司生產(chǎn)的TBX3 多克隆抗體，免疫組化二步法染色，采用高壓修復(fù)法抗原修復(fù)，PBS 磷酸緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。免疫組化評(píng)判方法：光鏡下隨機(jī)觀察4 ～5 個(gè)不重疊的高倍（×200）視野，計(jì)數(shù)100 ～200 個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞染色陽(yáng)性表達(dá)為境界清晰，突出于背景的棕黃色或棕褐色顆粒，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和著色強(qiáng)度進(jìn)行半定量分析，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)0 分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占1%～30%計(jì)1 分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占31%～70%計(jì)2 分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占71%～100%計(jì)3 分；不著色為0 分；著淺棕色為1 分，棕黃色為2 分，棕揭色為3 分；2 項(xiàng)分?jǐn)?shù)累計(jì)：0 分為陰性（-），1、2 分為弱陽(yáng)性（+），3、4 分為陽(yáng)性（++），5、6 分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++），結(jié)果分為 TBX3 低表達(dá)組（0 ～+）及高表達(dá)組（++～+++）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。乳腺癌不同的臨床因素下TBX3 表達(dá)率的差異均采用χ2檢驗(yàn)（或確切概率法）；Kaplan-Meier 法估計(jì)不同臨床病理學(xué)特征患者的DFS 率；Log-rank 檢驗(yàn)用于不同臨床病理特征下患者5 年DFS 率差異的比較。P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TBX3 在乳腺癌與乳腺良性腫瘤中表達(dá)的差異

TBX3 主要定位于細(xì)胞核，其陽(yáng)性表達(dá)為境界清晰、突出于背景的黃色或棕黃色。乳腺癌組織TBX3 高表達(dá)率高于乳腺良性腫瘤，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.018），見(jiàn)表1。

表1 乳腺癌與乳腺良性腫瘤組織中TBX3 的表達(dá)[例（%）]

2.2 乳腺癌患者術(shù)后5 年DFS 的影響因素

單因素分析顯示，TBX3 表達(dá)及腫瘤分期是影響患者5 年 DFS 的因素（P ＜ 0.05），TBX3 低表達(dá)、分期早的患者術(shù)后5 年 DFS 率更高，見(jiàn)表2。

3 討論

TBX 基因家族也稱T-box，在人體生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，它主要通過(guò)與靶基因的啟動(dòng)子特定的序列相結(jié)合形成半位結(jié)合體起調(diào)控作用，因結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子不同而發(fā)揮不同的作用，TBX3 過(guò)度表達(dá)與多種癌癥相關(guān)，它通過(guò)信號(hào)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、腫瘤形成、轉(zhuǎn)移，還可促進(jìn)干細(xì)胞的自我更新和分化[3-5]。

前期的研究表明，TBX3 在乳腺癌組織中高表達(dá)，而且其表達(dá)程度與乳腺癌的分期、ER、Ki-67 的狀態(tài)、分子亞型有關(guān)[6]。何力等[7]的研究發(fā)現(xiàn)，miR-183 在乳腺癌中起抑癌基因作用，可以下調(diào)TBX3 的表達(dá)，通過(guò)PTEN 通路抑制乳腺癌細(xì)胞侵襲和遷移能力，由此推斷TBX3 基因與乳腺癌關(guān)系密切。本研究顯示乳腺癌組織TBX3 的表達(dá)率明顯高于乳腺良性腫瘤。TBX3 與乳腺癌關(guān)系密切，但它對(duì)乳腺癌患者預(yù)后的影響尚不明確。本研究通過(guò)隨訪乳腺癌患者術(shù)后5 年DFS，發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中TBX3 的表達(dá)對(duì)患者的預(yù)后有影響，TBX3 高表達(dá)患者5 年生存率明顯低于低表達(dá)者，因此考慮TBX3 是影響乳腺癌術(shù)后預(yù)后的因素之一。目前有關(guān)TBX3 與腫瘤預(yù)后的臨床研究報(bào)道較少，Li Zhian 等[8]在肝癌中的研究中也發(fā)現(xiàn)，TBX3 蛋白的表達(dá)是肝癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，而且高表達(dá)TBX3 蛋白的肝癌患者5 年生存率明顯低于低表達(dá)組，考慮腫瘤切除術(shù)后肝細(xì)胞癌組織中TBX3 的表達(dá)與腫瘤分化程度、轉(zhuǎn)移、血清AFP 水平呈正相關(guān)，而且可能影響肝癌手術(shù)切除患者的生存時(shí)間。因此，我們推斷TBX3 是乳腺癌預(yù)后不佳的危險(xiǎn)因素。

表2 乳腺癌5 年DFS 的影響因素[例（%）]

綜上所述，TBX3 在乳腺癌組織中高表達(dá)，是影響乳腺癌患者術(shù)后預(yù)后的危險(xiǎn)因素，但它在腫瘤中過(guò)度表達(dá)的因素卻知之甚少，它調(diào)節(jié)的信號(hào)通路目標(biāo)基因亦不明確，因此總的來(lái)說(shuō)，TBX3 在癌癥中的作用機(jī)制、調(diào)控信號(hào)以及對(duì)腫瘤預(yù)后的影響尚待更多深入的研究。