葛靜微，王建軍，沈瑩萍，杜喜利，李 銘

（甘肅省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，甘肅蘭州 730050）

胡麻屬亞麻科（Linaceae） 亞麻屬（Linum） 一年生或多年生草本植物，我國(guó)栽培的為一年生亞麻[1]，是世界十大油料作物之一，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極高[2]，在我國(guó)西北及華北地區(qū)廣泛種植[3]。胡麻油中含有大量的飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸[4-5]，其中不飽和脂肪酸高達(dá)80%以上，富含α - 亞麻酸、維E、類黃酮[6]，α - 亞麻酸含量高達(dá)65%[7-9]，具有調(diào)節(jié)血脂、降低膽固醇[10]、降低血壓[11]、抑制炎癥及過敏反應(yīng)[12-13]、提升皮膚細(xì)胞的水合和保濕、減少表皮水分的損失[14]等作用。

苯并（α） 芘是一種多環(huán)芳烴化合物，屬于高活性間接致癌物，對(duì)人體各器官均有致癌性[15]、致畸性和致突變性[16-17]。大量研究表明，食用油中苯并（α）芘的污染主要來源于環(huán)境帶入、原料的蒸炒/焙炒、高溫壓榨、溶劑帶入、高溫脫臭等環(huán)節(jié)[18]，其對(duì)植物油的污染已經(jīng)引起廣泛關(guān)注。歐盟規(guī)定其食用油中最大限量為2 μg/kg，我國(guó)GB 2762—2017《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中污染物限量》標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定油脂及其制品中苯并（α） 芘的限量為10 μg/kg。

不確定度評(píng)估是表示檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的重要方式，能夠表明結(jié)果的可信賴程度，是衡量測(cè)量結(jié)果的重要指標(biāo)[19-20]。因此，不確定度的分析評(píng)定在日常檢測(cè)工作中極為重要，對(duì)于胡麻油中苯并（α） 芘不確定度評(píng)定具有重要意義。

目前，胡麻油中苯并（α） 芘不確定度評(píng)定尚未見報(bào)道，采用GB 5009.27—2016 中苯并（α） 芘分子印跡柱凈化法進(jìn)行樣品前處理，高液相色譜- 熒光法進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)JJF 1059.1—2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》[21]、JJG 196—2006《常用玻璃量器檢定規(guī)程》[22]及其他不確定度評(píng)定方法對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行不確定度分析評(píng)定，可為胡麻油中苯并（α） 芘含量檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室評(píng)定不確定度提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀，U3000 型液相色譜儀配熒光檢測(cè)器和Chromeleon 7 色譜工作站，美國(guó)Thermo 公司產(chǎn)品。

苯并（α） 芘標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)GBW（E） 082505（100 μg/mL），壇墨標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心提供；乙腈、正己烷、二氯甲烷、色譜純，德國(guó)默克公司提供；超純水（電阻率18.2 mΩ·cm-1），Millipore 純水儀制備；苯并（α） 芘分子印跡柱（500 mg，6 mL），天津博納艾杰爾提供。

1.2 試驗(yàn)方法

參考GB 5009.27—2016 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯并（α） 芘的測(cè)定》。

1.2.1 樣品前處理

稱取0.4 g 試樣，加入5 mL 正己烷，渦旋混合0.5 min，待凈化。采用苯并（α） 芘分子印跡柱，依次用5 mL 二氯甲烷、5 mL 正己烷活化柱子。將待凈化液轉(zhuǎn)移進(jìn)柱子，待液面降至柱床時(shí)，用6 mL正己烷淋洗柱子，棄去流出液。用6 mL 二氯甲烷洗脫并收集凈化液到試管中。將凈化液在40 ℃下氮?dú)獯蹈?，?zhǔn)確吸取1mL 乙腈渦旋復(fù)溶0.5 min，過0.22 μm 微孔濾膜后供液相色譜測(cè)定。

1.2.2 色譜條件

色譜柱：C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈- 水（體積比為88∶12），流速為1.0 mL/min，等度洗脫；熒光檢測(cè)器：激發(fā)波長(zhǎng)為384 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為406 nm。

1.2.3 定量方法

用質(zhì)量濃度為100 μg/mL 的苯并（α） 芘標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液逐級(jí)稀釋，配成質(zhì)量濃度分別為0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0 ng/mL 的校準(zhǔn)曲線溶液，外標(biāo)法定量。

1.2.4 苯并（α） 芘含量的計(jì)算公式

按照下式計(jì)算苯并（α） 芘的含量：

式中：X——試樣中苯并（α） 芘含量，μg/kg；

C——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的樣品凈化溶液質(zhì)量濃度，ng/mL；

m——試樣質(zhì)量，g；

1 000——由ng/g 換算成μg/kg 的換算因子。

2 結(jié)果與分析

2.1 不確定度及來源分析

不確定度評(píng)定參數(shù)分為A 類和B 類，A 類評(píng)定是指在規(guī)定測(cè)量條件下測(cè)量值用統(tǒng)計(jì)分析的方法進(jìn)行測(cè)量不確定度分量的評(píng)定，B 類評(píng)定是指用不同于測(cè)量不確定度A 類評(píng)定的方法對(duì)測(cè)量不確定度分量進(jìn)行評(píng)定[21，23-24]。

通過對(duì)全過程的分析，苯并（α） 芘不確定度的主要來源有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)量濃度、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合、樣品稱量、樣品定容、重復(fù)性測(cè)定、加標(biāo)回收率等。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不確定度評(píng)定

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)量濃度的不確定度Urel(1)（B 類）

查標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書，苯并（α） 芘質(zhì)量濃度為100 μg/mL，不確定度為3%，按均勻分布計(jì)算，包含因子k=2，由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制的不確定度

（1） 標(biāo)準(zhǔn)中間液配制的不確定度Urel(2)（B 類）。標(biāo)準(zhǔn)中間液配置過程中使用100 μL 的移液器吸取100 μL 的苯并芘標(biāo)準(zhǔn)溶液用乙腈定容至10 mL 容量瓶，100 μL 的移液器容量允許誤差2.0%，按均勻分布考慮，k=，移液器引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度Urel(移液器)為：

根據(jù)《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》[25]，玻璃量器引入的不確定度服從三角分布，包含因子k=，10 mL 容量瓶（A 級(jí)） 最大允許差為±0.020，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

標(biāo)準(zhǔn)中間液配制的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

（2） 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制的不確定度Urel(3)（B類）。用200 μL 移液器分別移200，100，20 μL 標(biāo)準(zhǔn)中間液（1 000 ng/mL） 于10mL 容量瓶中，用乙腈定容，用100 μL 移液器移50 μL 標(biāo)準(zhǔn)中間液（1 000 ng/mL） 于10 mL 容量瓶中，用乙腈定容，再用10 μL 移液器分別移取10，5 μL 標(biāo)準(zhǔn)中間液于10 mL 容量瓶中，用乙腈定容，配成質(zhì)量濃度分別為0.5，1.0，5.0，10.0，20.0 ng/mL 的校準(zhǔn)曲線溶液。該過程涉及容量瓶、移液器引起的不確定度。

10 mL 容量瓶（A 級(jí)） 最大允許差為±0.020，服從三角分布，k=，5 個(gè)容量瓶相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

200 μL 移液器吸取200 μL 時(shí)容量允許誤差±1.5%，吸取100 μL 時(shí)容量允許誤差±2.0%，吸取20 μL 時(shí)容量允許誤差±4.0%，100 μL 移液器吸取50 μL 時(shí)容量允許誤差±3.0%，10 μL 移液器吸取10 μL 和5 μL 時(shí)容量允許誤差±8.0%，按均勻分布，k=，則相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

標(biāo)準(zhǔn)工作液配制的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線擬合引入的相對(duì)不確定度Urel(4)（A 類）

分別測(cè)定質(zhì)量濃度為0.5，1.0，2.0，5.0，10，20 ng/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液1 次，得到相應(yīng)的峰面積Y。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)量濃度- 峰面積結(jié)果見表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)量濃度- 峰面積結(jié)果

以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，擬合得到線性回歸方程及R2。對(duì)樣品進(jìn)行2 次平行測(cè)定，得到樣品質(zhì)量濃度平均值C0=5.682 ng/mL，標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度平均值C=6.417 ng/mL。由標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度

式中：S——標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積殘差的標(biāo)準(zhǔn)偏差，S=10 322.130；

k——標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的斜率，k=61 803.897 8；

p——對(duì)C0的測(cè)定次數(shù)，p=2；

n——標(biāo)準(zhǔn)工作溶液點(diǎn)的測(cè)定次數(shù)，n=6；

由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線擬合引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

2.3 樣品前處理引入的不確定度Urel(5)（B 類）

2.3.1 樣品稱量產(chǎn)生的不確定度

稱取胡麻油0.400 0 g，根據(jù)天平校準(zhǔn)證書，允許誤差u=0.1 mg，按均勻分布計(jì)算，k=，標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.3.2 樣品定容產(chǎn)生的不確定度

樣品經(jīng)凈化、氮?dú)獯蹈?，使? 000 μL 移液器吸取1 000 μL 乙腈定容，1 000 μL 的移液器容量允許誤差1.0%，按均勻分布考慮，k=，由移液器產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

2.4 重復(fù)測(cè)量產(chǎn)生的不確定度Urel(6)（A 類）

對(duì)胡麻油中苯并（α） 芘含量進(jìn)行8 次重復(fù)性測(cè)定，結(jié)果分別為5.257，5.243，5.192，5.433，5.524，5.038，5.104，5.314 μg/kg，平均值X 為5.263 μg/kg，標(biāo)準(zhǔn)偏差標(biāo)準(zhǔn)不確定度由重復(fù)測(cè)量產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

2.5 加標(biāo)回收引入的不確定度Urel(7)

按照1.2.1 試驗(yàn)方法對(duì)樣品進(jìn)行添加回收率試驗(yàn)，在5 ng/mL 添加水平下，進(jìn)行5 次平行試驗(yàn)，添加回收率分別為94.37%，91.66%，93.02%，92.06%，93.78%，平均值為X=92.98%，標(biāo)準(zhǔn)偏差S 為0.011 4，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

2.6 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度及擴(kuò)展不確定度

2.6.1 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

各相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量合成：

2.6.2 擴(kuò)展不確定度

取包含因子k=2，置信概率P=95%，則擴(kuò)展不確定度為：

3 測(cè)量結(jié)果及不確定度報(bào)告

高效液相色譜- 熒光法測(cè)定胡麻油中苯并（α）芘的結(jié)果報(bào)告為：

4 結(jié)論

試驗(yàn)測(cè)得當(dāng)胡麻油中苯并（α） 芘含量為5.682 μg/kg 時(shí)，其測(cè)量不確定度為5.682±0.305 μg/kg（k=2，P=95%）。胡麻油中苯并（α） 芘含量的測(cè)定過程中，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合、樣品稱量、樣品定容、重復(fù)性測(cè)定、加標(biāo)回收率等均會(huì)引入不確定度，通過分析發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合、重復(fù)性測(cè)量、標(biāo)準(zhǔn)溶液配制是測(cè)量不確定度的主要來源。

因此，在實(shí)際檢測(cè)過程中要定期對(duì)設(shè)備進(jìn)行計(jì)量檢定、期間核查與維護(hù)保養(yǎng)工作[26]；嚴(yán)格把控標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制和樣品測(cè)量的過程；加強(qiáng)操作人員的培訓(xùn)，提高操作技能，尤其是標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制過程，使用精密度較高的量具，減少樣品測(cè)量過程中的誤差，保證測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。