武 煒，李成會，鄭素玲，朱蓮英，朱粉俠

（1. 唐山師范學院 生命科學系，河北 唐山 063000；2. 唐山華聞飼料有限公司，河北 唐山 063000）

硒元素在動物體內(nèi)發(fā)揮多種重要的生理功能，可消除體內(nèi)自由基，有效抑制過氧化物的產(chǎn)生，清除體內(nèi)有毒重金屬，從而提高機體抗氧化能力，增強機體免疫能力[1]。中國是缺硒國家，2/3 以上地區(qū)飼料和牧草中硒的含量小于0.05 mg/kg，不能滿足動物的正常生理需要。與無機硒相比，有機硒具有吸收率高、生物活性強、毒性低等特點，是硒在動物體內(nèi)發(fā)揮作用的主要形式，高效有機硒源的開發(fā)與應(yīng)用是國內(nèi)外動物營養(yǎng)學的研究熱點之一[2]。CCl4所致急性肝損傷是外源性氧化損傷的最佳動物模型。以往研究表明硒對CCl4所致小鼠急性肝損傷有一定治療效果，但富硒花生、富硒大豆、富硒大麥對其作用均未見報道。試驗研究不同富硒產(chǎn)物對小鼠CCl4急性肝損傷的保護作用，為開發(fā)多種富硒產(chǎn)品提供理論支持。

1 材料

1.1 試驗動物

70 只清潔級雄性昆明小鼠，體重22±2 g，購自華北理工大學試驗動物中心。

1.2 富硒產(chǎn)物

富硒大麥、富硒大豆、富硒花生，唐山師范學院動物飼料與營養(yǎng)實驗室提供。分別用亞硒酸鈉溶液浸種并在發(fā)芽前期間歇短時噴淋，種子發(fā)芽一定時間后，干燥、粉碎后過60 目篩，得到富硒大麥粉、富硒大豆粉、富硒花生粉，經(jīng)氫化物原子熒光光譜法檢測，硒含量分別為135.0，29.0，36.1 mg/kg。

1.3 試劑

亞硒酸鈉（分析純），鄭州誠旺化工有限公司提供；橄欖油（分析純），河北省固安縣海雅有限公司提供；四氯化碳（分析純），北京五洲世紀紅星化工有限公司提供；谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶試劑盒、超氧化物酶試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒、丙二醛試劑盒，南京建成生物工程研究所提供。

1.4 儀器

722N 型紫外可見分光光度計，濟南上地電子科技有限公司產(chǎn)品；HH-8 型數(shù)顯恒溫水浴鍋，金壇市醫(yī)療儀器廠產(chǎn)品；WT603T 型電子天平，常州萬泰天平儀器有限公司產(chǎn)品。

2 方法

2.1 試驗動物分組與給藥

選擇70 只雄性昆明小鼠隨機分成7 組（對照組、模型組、亞硒酸鈉組、富硒花生組、富硒大豆組、富硒大麥組、復(fù)合富硒組），每組10 只。對照組及模型組飼喂普通鼠糧，其他組飼喂在普通鼠糧中分別添加一定比例的亞硒酸鈉、富硒花生、富硒大豆、富硒大麥、復(fù)合富硒產(chǎn)物（富硒大豆粉、富硒花生粉、富硒大麥粉按照2.40∶2.40∶2.32 比例混合） 制成的富硒鼠糧（硒含量均為0.4 mg/kg）。飼喂28 d 后，模型組及各試驗組小鼠腹腔注射0.2% CCl4橄欖油溶液（10 mL/kg），對照組腹腔注射等體積橄欖油溶液。

2.2 指標測定

末次注射后，禁食、不禁水16 h，摘眼球取血，靜置1 h，以轉(zhuǎn)速3 000 r/min 離心10 min，采集血清。處死小鼠，采集肝臟，制備10%勻漿液，以轉(zhuǎn)速3 000 r/min 離心10 min，取上清液。按試劑盒說明書檢測血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST） 活性，肝勻漿超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX） 的活性及丙二醛（MDA） 含量。

2.3 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 21.0 軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，試驗數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標準誤”表示，采用LSD 法進行多重比較，p<0.05 表示差異顯著，p<0.01 表示差異極顯著。

3 結(jié)果與分析

小鼠血清中ALT、AST 活性及肝組織中SOD、GSH-PX活性、MDA 含量比較見表1。

由表1 可知，與對照組相比，模型組小鼠血清ALT、AST 活性極顯著升高（p<0.01），肝組織SOD和GSH-PX的酶活力值極顯著下降（p<0.01），MDA含量顯著提升（p<0.01）。與模型組相比，富硒花生組、富硒大豆組、富硒大麥組、復(fù)合富硒組血清ALT、AST 活性均極顯著下降（p<0.01），肝組織SOD 和GSH-PX的酶活力值均極顯著或顯著上升（p<0.01 或p<0.05），MDA 含量均極顯著或顯著降低（p<0.01 或p<0.05）。其中，富硒大豆組和復(fù)合富硒組小鼠血清ALT、AST 極顯著低于富硒花生組和富硒大麥組（p<0.01），肝組織GSH-PX的酶活力值極顯著或顯著高于富硒花生組和富硒大麥組（p<0.01或p<0.05）。與亞硒酸鈉組相比，其他富硒組小鼠血清ALT 活性均極顯著下降（p<0.01）。

表1 小鼠血清中ALT、AST 活性及肝組織中SOD、GSH-PX 活性、MDA 含量比較

4 討論

硒元素在自然界中有無機態(tài)和有機態(tài)2 種存在形式，因有機硒具有高效、安全等特點，已逐漸取代無機硒在動物營養(yǎng)中廣泛應(yīng)用。前人研究表明，富硒花生、富硒大豆等有機富硒產(chǎn)物可顯著提高機體抗氧化能力。王光[3]使用亞硒酸鈉通過花生幼苗生物轉(zhuǎn)化作用富集有機硒，證明硒代氨基酸是富硒花生有機硒的主要形式，可提高細胞抗氧化能力，并具有較強的免疫調(diào)節(jié)活性。高林等人[4]檢測富硒花生發(fā)現(xiàn)，樣品硒含量的變化與其抗氧化活性的變化趨勢一致。王鳳杰等人[5]以亞硒酸鈉為硒源、大豆為富硒載體制備富硒大豆，其中所含的大豆多肽能有效提高脂肪肝大鼠肝內(nèi)抗氧化酶活性，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，降低肝組織內(nèi)GRP78 表達。

CCl4所致動物肝損傷是經(jīng)典的急性氧化應(yīng)激模型，能全面反映化學性肝損傷導(dǎo)致的一系列過氧化反應(yīng)。CCl4被肝微粒體細胞色素P450 代謝激活后，產(chǎn)生大量活躍的三氯甲基自由基，導(dǎo)致氧化體系過度活化，引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，生成大量MDA 等脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，同時抑制體內(nèi)抗氧化體系中自由基清除酶SOD、GSH-Px 活性，改變細胞膜的流動性和通透性，細胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶（ALT，AST） 等可溶性酶滲入血液、活性升高。前人研究表明，富硒產(chǎn)物對CCl4所致小鼠急性肝損傷有一定治療效果。張巖等人[6]研究發(fā)現(xiàn)，給小鼠灌胃100，200，400 mg/kg·bw富硒玉米肽15 d 對CCl4所致小鼠急性肝損傷有顯著的保護作用，能極顯著抑制小鼠血清ALT 活性，極顯著提高肝組織中SOD、GSH-Px 活力，降低MDA含量，改善肝組織損傷程度。相關(guān)研究表明，一定劑量的甘草硒多糖、山藥硒多糖均對CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝損傷有保護作用，其機制可能是通過清除自由基而達到防治肝細胞損害的療效[7]。

結(jié)果顯示，相比對照組，模型組小鼠血清ALT、AST 水平極顯著升高，肝組織SOD 和GSH-PX的酶活力值極顯著下降，MDA 含量顯著提升，說明CCl4引起肝細胞受損，小鼠體內(nèi)發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，內(nèi)源性轉(zhuǎn)氨酶釋放到胞外，提示建模成功；與模型組相比，富硒花生組、富硒大豆組、富硒大麥組、復(fù)合富硒組血清ALT、AST 活性均極顯著下降，肝組織SOD 和GSH-PX的酶活力值均極顯著或顯著上升，MDA 含量極顯著或顯著降低，表明以上有機富硒產(chǎn)物均對CCl4致肝損傷有一定的保護作用，且效果優(yōu)于相同劑量的亞硒酸鈉。其中機理可能是硒可保護肝細胞膜不受到過氧化物的破壞，同時參與構(gòu)成機體內(nèi)GSH-PX，顯著增強其活性，及時消除自由基的堆積，從而保護肝臟。

結(jié)果顯示，富硒大豆組和復(fù)合富硒組小鼠血清ALT、AST 極顯著低于富硒花生組和富硒大麥組，肝組織GSH-PX的酶活力值極顯著或顯著高于富硒花生組和富硒大麥組，說明富硒大豆和復(fù)合富硒產(chǎn)物對急性肝損傷的保護效果好于富硒花生和富硒大麥。其原因可能是富硒大豆中除了硒元素外，還含有大豆皂甙、大豆異黃酮、大豆磷脂、大豆多肽等多種成分，均具有抗脂質(zhì)氧化和降低過氧化脂質(zhì)的作用，可防護CCl4對肝臟的損傷；而復(fù)合富硒產(chǎn)物中富硒花生含有白藜蘆醇等活性物質(zhì)也可有效減輕小鼠的肝組織損傷程度。

5 結(jié)論

富硒花生、富硒大豆、富硒大麥均對CCl4致小鼠急性肝損傷有一定的保護作用，效果優(yōu)于相同劑量的亞硒酸鈉，其作用機制可能與通過抗氧化作用提高肝細胞內(nèi)的SOD、GSH-Px 活性，減少MDA 產(chǎn)生，保護肝細胞膜有關(guān)。