劉宣宣

（南京醫(yī)科大學(xué)康達(dá)學(xué)院生理與病生教研室 江蘇 連云港 222000）

Salusins 是由Shichiri 等于2003 年發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性心血管調(diào)節(jié)肽，包含由28 個(gè)氨基酸殘基組成的Salusin-α 和20 個(gè)氨基酸殘基組成的Salusin-β[1]。Salusins 具有降低血壓、心率和心輸出量[1]、促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)、保護(hù)心肌細(xì)胞、影響動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展、促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖和血管內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)等作用[2]。引發(fā)血管內(nèi)皮功能障礙的原因主要有氧化應(yīng)激、炎癥等[3]，因此，本研究通過體外培養(yǎng)原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs），孵育Salusin-β 和Antisalusin-β，并測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ROS 含量和NADPH 酶含量變化，探討Salusin-β 在HUVECs 氧化應(yīng)激中的作用。

1.材料與方法

1.1 細(xì)胞

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）購(gòu)自ScienCell Research Laboratories。

1.2 試劑

Salusin-β 購(gòu)自Phoenix pharmaceuticals（Belmont，CA，USA），Anti-salusin-β 抗體購(gòu)自Clound-Clone Corp 公司，光澤精和NADPH 均購(gòu)自sigma 公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

HUVECs 隨機(jī)分對(duì)照組（Saline），Salusin-β（10-7mol/L）組和Anti-salusin-β（10-7mol/L）組，孵育48 小時(shí)后，細(xì)胞勻漿后離心10 分鐘（4℃，3000rpm），取上清液用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定超氧陰離子水平并用Bradford 法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。用加入SOD（350U/ml）的改良HEPES 緩沖液稀釋待測(cè)樣本的上清液，加入NADPH（100μM）和光澤精（5μM）后，用化學(xué)發(fā)光儀每隔1分鐘測(cè)一次發(fā)光值，共測(cè)10 次，計(jì)算出每分鐘每毫克蛋白的平均發(fā)光值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 20.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間差異采取單因素方差分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 Anti-salusin-β 抑制HUVECs ROS 和NADPH 酶表達(dá)

結(jié)果顯示（圖1）：Salusin-β 作用于HUVECs 后，細(xì)胞內(nèi)NADPH 酶含量（圖A）和ROS 含量（圖B）無顯著變化，Antisalusin-β 作用于HUVECs 后，細(xì)胞內(nèi)NADPH 酶含量（圖A）和ROS 含量（圖B）顯著降低（*P＜0.05，n=6）。

圖1 Salusin-β 和Anti-salusin-β 孵育HUVECs 48 小時(shí)后，細(xì)胞內(nèi)NADPH 酶含量（圖A ）和ROS 含量（圖B）的變化。

3.討論

Salusin-β 在心血管、內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)等發(fā)揮多種功能，是具有重要生理和病理生理學(xué)意義的內(nèi)源性調(diào)節(jié)肽。研究顯示，血管內(nèi)皮功能損傷是動(dòng)脈粥樣硬化（AS）早期臨床表現(xiàn)，在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中Salusin-β 高表達(dá)[4]，而氧化應(yīng)激是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的重要原因[5]，ROS 能夠增強(qiáng)細(xì)胞氧化應(yīng)激，促進(jìn)炎癥介質(zhì)釋放、低密度脂蛋白氧化，破壞凝血功能平衡等。有研究表明，氧化應(yīng)激在內(nèi)皮功能障礙發(fā)生機(jī)制中起著重要作用[6]。因此，本實(shí)驗(yàn)主要探究Salusin-β 是否介導(dǎo)HUVECs 的氧化應(yīng)激，結(jié)果顯示，Salusin-β 對(duì)正常HUVECs 并未發(fā)現(xiàn)直接作用，但是用Anti-salusin-β 清除HUVECs 內(nèi)源性Salusin-β 以后，細(xì)胞內(nèi)ROS 和NADPH 酶的含量明顯下降，提示Salusin-β 對(duì)于HUVECs 的氧化應(yīng)激可能具有一定的促進(jìn)作用，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。