庫(kù)文娟

（黃岡市公共檢驗(yàn)檢測(cè)中心 湖北黃岡 438000）

1 前言

左炔諾孕酮片的主要成分是左炔諾孕酮，屬于一種短效避孕藥，通過抑制排卵和阻止受精卵著床，發(fā)揮速效避孕作用，適用于女性緊急避孕。近年來，在市場(chǎng)上有不法分子為經(jīng)濟(jì)利益所驅(qū)動(dòng)，制售假冒的左炔諾孕酮片，從外觀、包裝上很難區(qū)分真?zhèn)?。通過采集市場(chǎng)上流通的8個(gè)廠家、10種商品名的左炔諾孕酮片，建立定性模型，可快速、準(zhǔn)確的鑒別該藥的真?zhèn)巍?/p>

2 儀器與材料

2.1 儀器與試藥

Matrix-F近紅外光譜儀（配有光纖探頭測(cè)樣附件，銦加砷檢測(cè)器，OPUS5.0光譜分析軟件，德國(guó)Bruker公司）；Waters高效液相色譜儀（2998二極管陣列檢測(cè)器，Empower色譜工作站）；左炔諾孕酮、醋酸甲地孕酮對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院）；乙腈（色譜純）。

2.2 樣品

共收集了8個(gè)廠家、24個(gè)批次的左炔諾孕酮片，均通過實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，其中，2批經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)證實(shí)為假冒產(chǎn)品。

3 方法和結(jié)果

3.1 樣品的法定檢驗(yàn)結(jié)果

按照《中國(guó)藥典》2015版左炔諾孕酮片鑒別項(xiàng)下的方法[1]，對(duì)收集的樣品進(jìn)行定性分析。

3.1.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜條件：色譜柱：Dionex 4.6 mm×250 mm C18柱；檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；流動(dòng)相：乙腈-水（70∶30）。理論塔板數(shù)按左炔諾孕酮峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000，左炔諾孕酮峰與醋酸甲地孕酮峰的分離度應(yīng)符合要求。

3.1.2 樣品制備

供試品溶液和對(duì)照品溶液制備：取本品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋成每1 mL中約含75 g的溶液，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取左炔諾孕酮對(duì)照品，同法制備。

3.1.3 檢測(cè)結(jié)果

分別取供試品溶液、對(duì)照品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，詳見圖1～圖4。結(jié)果顯示，17批正品主峰保留時(shí)間與對(duì)照品溶液主峰保留時(shí)間一致，1批偽品在與對(duì)照品相應(yīng)保留時(shí)間處，未檢出譜峰。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

圖2 左炔諾孕酮對(duì)照品色譜圖

3.2 模型的分組

將收集的24批左炔諾孕酮片分成2組，其中，12批組成訓(xùn)練集樣本（包括1批假藥），用于建立定性鑒別模型；另外12批組成驗(yàn)證集樣本，用于評(píng)估模型的有效性。

3.3 近紅外光譜的采集與處理

左炔諾孕酮片均為鋁塑包裝，將光纖探頭隔鋁塑抵住藥片，在12 000～4 000 cm-1區(qū)間掃描，分辨率為8 cm-1，掃描次數(shù)為32次，將24批左炔諾孕酮片分成訓(xùn)練集和驗(yàn)證集樣本，每批采集10張?jiān)紙D譜，并求出其平均光譜，用于建立模型和驗(yàn)證模型。

圖5 左炔諾孕酮片近紅外原始光譜圖

圖3 正品色譜圖

圖4 偽品色譜圖

3.4 譜段和預(yù)處理方法的選擇

一般來說，12 000～9 000 cm-1和 4 500～4 000 cm-1區(qū)間屬于噪音干擾較大的波數(shù)范圍。比較真假左炔諾孕酮片，原始光譜區(qū)別不明顯，但通過一階導(dǎo)數(shù)加矢量歸一法對(duì)光譜進(jìn)行預(yù)處理后，發(fā)現(xiàn)在7600～5400cm-1內(nèi)存在較大差異，因此選擇此譜段建立模型，詳見圖5、圖6。

3.5 算法

圖6 二階導(dǎo)數(shù)+矢量歸一化法光譜區(qū)別圖

OPUS5.0光譜分析軟件軟件提供了2種定性分析的基本算法，即標(biāo)準(zhǔn)算法和因子化法。因子化法，即對(duì)譜圖進(jìn)行因子分析，得到相應(yīng)的因子譜以及各光譜的得分值，再對(duì)各光譜在因子譜得分空間上的分布計(jì)算距離。本模型涉及的廠家較多，不同廠家樣品之間存在差異，選擇因子算法，能夠?qū)⒄泛蛡纹贩珠_，標(biāo)準(zhǔn)偏差S達(dá)到1.457 286。

3.6 建立模型

用求得的平均光譜建立定性模型，詳見表1。

表1 左炔諾孕酮片定性鑒別模型

3.7 模型的評(píng)價(jià)與驗(yàn)證結(jié)果

用該模型對(duì)訓(xùn)練集樣本12個(gè)批次120張光譜以及對(duì)驗(yàn)證集樣本12個(gè)批次120張光譜圖進(jìn)行驗(yàn)證，該模型能夠正確識(shí)別正品，對(duì)偽品也可作出正確的判斷。驗(yàn)證結(jié)果與法定檢驗(yàn)結(jié)果一致，未出現(xiàn)誤判的情況，詳見圖7、圖8。

圖7 定性模型對(duì)正品的測(cè)試結(jié)果

圖8 定性模型對(duì)假藥的測(cè)試結(jié)果

3.8 模型的應(yīng)用

在藥品檢測(cè)模型運(yùn)行過程中，本文對(duì)左炔諾孕酮片定性模型篩查轄區(qū)內(nèi)經(jīng)營(yíng)的北京紫竹藥業(yè)有限公司、東北制藥集團(tuán)沈陽(yáng)第一制藥有限公司等公司生產(chǎn)的左炔諾孕酮片藥品進(jìn)行檢測(cè)，未發(fā)現(xiàn)可疑樣品，日后將密切關(guān)注市場(chǎng)上的左炔諾孕酮片，進(jìn)一步評(píng)價(jià)該模型的有效性。

4 討論

在國(guó)家藥品監(jiān)督管理局信息平臺(tái)查詢可知，目前全國(guó)共有10個(gè)廠家生產(chǎn)該藥品，有0.75mg和1.5mg 2種規(guī)格。該模型對(duì)收集到的8個(gè)廠家的樣品都能夠很好的識(shí)別，應(yīng)用范圍廣。左炔諾孕酮片是計(jì)生藥品，假藥不能達(dá)到避孕的效果，甚至可能對(duì)服用者的身體造成極大的傷害，因此，左炔諾孕酮片定性模型具有很強(qiáng)的實(shí)用性。

近紅外光譜法屬于無污染和無損傷低碳環(huán)保檢測(cè)技術(shù)，樣品不須進(jìn)行預(yù)處理，不使用有毒有害試劑，掃描過程迅速，在醫(yī)藥領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用[4]。中國(guó)食品藥品檢定研究院也將近紅外光譜技術(shù)作為快檢車的主要技術(shù)支撐，目前，快檢車模型數(shù)據(jù)庫(kù)中沒有左炔諾孕酮片的相關(guān)模型。傳統(tǒng)的檢測(cè)方法操作復(fù)雜，耗時(shí)較長(zhǎng)。利用近紅外光譜法，只需要幾分鐘即可鑒別左炔諾孕酮片的真?zhèn)?。將該方法作為現(xiàn)場(chǎng)篩查的手段，可以大大提高抽樣的靶向性和命中率，可以在藥品檢測(cè)車上加以推廣[5]。

目前市面上發(fā)現(xiàn)的假冒左炔諾孕酮片多為仿冒北京紫竹藥業(yè)有限公司的“毓婷”左炔諾孕酮片，隨著不法分子造假手段的不斷變化，能否區(qū)別出現(xiàn)的新型假藥有待進(jìn)一步驗(yàn)證。