段運(yùn)動(dòng),代俊利

(河北省承德市中心醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科， 河北 承德 067000)

大腸癌是消化道比較常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，2014年WHO在世界癌癥大會(huì)上指出，大腸癌發(fā)病率位于惡性腫瘤發(fā)病率的第三位，2012年世界癌癥協(xié)會(huì)統(tǒng)計(jì)大約有69萬(wàn)人死于大腸癌[1]。大腸癌的發(fā)病有很多因素，由于其發(fā)病機(jī)理較為復(fù)雜，截止到現(xiàn)在還沒(méi)有一個(gè)共性的說(shuō)法，根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)資料可知，大腸癌的發(fā)病與微衛(wèi)星不穩(wěn)定有很大的關(guān)系，錯(cuò)配修復(fù)基因是造成微衛(wèi)星不穩(wěn)定的主要因素，也就是說(shuō)是由于錯(cuò)配修復(fù)蛋白(Mismatch repair, MMR)的表達(dá)缺失造成的[2]。本研究通過(guò)免疫組化SP方法研究MMR的表達(dá)，并分析其表達(dá)情況對(duì)大腸癌發(fā)病率和死亡率的影響，希望可以找到該種蛋白是如何影響大腸癌的發(fā)病及在不同部位大腸癌中的表達(dá)意義。

1 資料與方法

1.1臨床資料:收集的資料來(lái)源于承德市中心醫(yī)院。病例為2017年6月至2018年12月確診的大腸癌患者，患者的年齡在37歲到71歲(平均57+6.41歲)，共計(jì)168例。在這168例患者中右半結(jié)腸癌、左半結(jié)腸癌和直腸癌的人數(shù)分別是47人、92人和29人。所有病例的診斷均是按照2015年中國(guó)結(jié)直腸癌診療標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定的，而且這些患者在進(jìn)行診斷之后均沒(méi)有接受過(guò)放化療及生物治療，而且具有詳細(xì)的臨床病理資料，其中選用的對(duì)照組為與腫瘤相距5cm的正常大腸黏膜(78例)。

1.2方法：本研究中采用免疫組織化學(xué)染色法對(duì)MMR進(jìn)行分析和研究， MLH1、MSH2、MSH6、PMS2這四種錯(cuò)配修復(fù)蛋白，全部正常表達(dá)，認(rèn)為MMR正常。若只要有一種不表達(dá)，就可以認(rèn)MMR缺失，也就是錯(cuò)配修復(fù)出現(xiàn)缺陷。免疫組化試劑均購(gòu)于北京中杉金橋生物有限公司。

1.3結(jié)果判定：四種錯(cuò)配修復(fù)蛋白(MMR)：MLH1、MSH2、MSH6、PMS2，陽(yáng)性表達(dá)均位于細(xì)胞核。為了試驗(yàn)的完整性和科學(xué)性，以陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞周?chē)恼Ｉ掀ぜ?xì)胞、淋巴細(xì)胞作為對(duì)照。腫瘤細(xì)胞核呈現(xiàn)棕黃色為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4統(tǒng)計(jì)方法:本次研究數(shù)據(jù)處理使用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)數(shù)資料以構(gòu)成比描述，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1在168例大腸癌組織中MMR蛋白表達(dá)缺失組(dMMR)27例(16.07%)，MMR蛋白無(wú)缺失組(pMMR)為141例(83.93%)，78例癌旁正常大腸黏膜組織MMR蛋白表達(dá)缺失組(dMMR)56例(71.79%)，MMR蛋白無(wú)缺失組(pMMR)為22例(28.21%)，MMR蛋白在大腸癌中與正常腸黏膜中的表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 MMR蛋白在大腸癌及正常腸黏膜組織中的表達(dá)n(%)

2.2在168例大腸癌組織中MMR蛋白表達(dá)缺失組(dMMR)27例(16.07%)，MMR蛋白無(wú)缺失組(pMMR)為141例(83.93%)。在47例右半結(jié)腸癌中，dMMR為19例(40.42%)，在左半結(jié)腸癌和直腸癌中dMMR分別為5例(5.43%)和3例(10.34%)，dMMR在不同部位大腸癌具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。并且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和侵透肌層組dMMR要明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及侵犯肌層組(P<0.05)，見(jiàn)圖1、表2。

表2 MMR蛋白表達(dá)與大腸癌臨床病理特征的關(guān)系n(%)

圖1 MLH1、MSH2、MSH6、PMS2在大腸癌中的表達(dá)

3 討 論

惡性腫瘤的病因不明確，發(fā)生與多種因素有關(guān)，正常的人體中存在一套完整的DNA修復(fù)系統(tǒng)，如果修復(fù)機(jī)制出現(xiàn)異常，可引起基因突變導(dǎo)致癌變。作為消化道常見(jiàn)腫瘤之一的大腸癌，根據(jù)不同的分子變異基礎(chǔ)，可以將病因分成兩種類(lèi)別。第一，就是染色體不穩(wěn)定(CIN)，第二，就是與dMMRT相關(guān)[3,4]，這其中有大約15%大腸癌的發(fā)生與微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)相關(guān)，而錯(cuò)配修復(fù)基因的改變是導(dǎo)致MSI的直接原因。MMR蛋白在修復(fù)機(jī)制中發(fā)揮著重要作用，可識(shí)別DNA復(fù)制過(guò)程中出現(xiàn)的錯(cuò)配堿基，并進(jìn)行水解和修復(fù)，從而維持遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性[5]。研究[6]發(fā)現(xiàn)如果大腸癌患者處于MSI的Ⅱ和Ⅲ期，那么采用5-氟尿嘧啶對(duì)其生存期的意義并不是很大，所以在使用該藥物來(lái)分析病癥的時(shí)候可以利用MSI作為預(yù)后和療效預(yù)測(cè)的一個(gè)基本生物指標(biāo)。而且MSI機(jī)制引起的大腸癌，相對(duì)于其它原因引起的大腸癌來(lái)說(shuō)預(yù)后相對(duì)較好，在機(jī)體中發(fā)生轉(zhuǎn)移的概率也比較低，并且該機(jī)制引起的大腸癌對(duì)一些化療藥物的敏感度不高，比如5-氟尿嘧啶和順鉑等，但是對(duì)伊利替康比較敏感，放療敏感性也會(huì)較高[7]?，F(xiàn)在對(duì)于子宮內(nèi)膜癌也進(jìn)行錯(cuò)配修復(fù)蛋白檢測(cè)，如果MMR基因的胚系發(fā)生了突變，那么很有可能是Lynch綜合征的病因，而且在這個(gè)過(guò)程中就可能會(huì)引起大腸癌、卵巢癌等衍生病癥，所以檢測(cè)MMR蛋白不僅可以篩查L(zhǎng)ynch綜合征，還可以進(jìn)一步降低患者家族的致病率。目前免疫組化方法已被廣泛應(yīng)用于MMR蛋白檢測(cè)，其準(zhǔn)確率與PCR技術(shù)相似，而且操作相對(duì)簡(jiǎn)便，費(fèi)用更低，因此被科研機(jī)構(gòu)和醫(yī)院所用[8]。對(duì)于dMMR結(jié)直腸癌的病例，其具有的典型特征有：發(fā)病年齡早；右半結(jié)腸多見(jiàn)；黏液腺癌為常見(jiàn)組織學(xué)類(lèi)型；Crohn's樣淋巴細(xì)胞反應(yīng)常見(jiàn)；一般預(yù)后較好等[9]。本研究采用免疫組化SP方法來(lái)分析MMR蛋白在大腸癌中的表達(dá)，其中在168例患者中，MMR無(wú)缺失141例(83.93%)，MMR缺失27例(16.07%)，同時(shí)也顯示MMR蛋白表達(dá)與腫瘤發(fā)生部位相關(guān)，MMR蛋白缺失組中右半結(jié)腸(17/47,40.42%)、左半結(jié)腸(5/92,5.43%)、直腸(3/29,10.34%)，很明顯右半結(jié)腸癌MMR蛋白缺失明顯高于其它部位，而且從病例來(lái)看右半結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率低及侵犯深度淺，這可能說(shuō)明，發(fā)生右半結(jié)腸癌的途徑與左半結(jié)腸癌和直腸癌的病因有差異，并且相對(duì)來(lái)說(shuō)右半結(jié)腸癌預(yù)后可能會(huì)更好。