李彥明， 郝雁冰， 楊繼雷， 李傳貴， 陳萬生

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院， 河北 張家口 075061)

非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)是肺癌最常見類型，約占其70%～80%，其病程進(jìn)展快、致死率高，以成為威脅全球范圍內(nèi)人類健康的首要疾病[1]。NSCLC起病隱匿，約70%患者就診時(shí)已發(fā)展為中晚期，5年生存期低于15%，而早期患者接受手術(shù)治療后5年生存率約為40%～50%，但遠(yuǎn)期療效不樂觀，約30%的患者死于術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)，而復(fù)發(fā)患者死亡率幾乎為100%[2,3]。因此，尋找影響NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的因素，對提高患者生存率極為關(guān)鍵。腫瘤細(xì)胞的快速增長需要大量新生血管為其提高充足的營養(yǎng)及氧氣，而可溶性CD105(soluble-CD105，S-CD105)是血管生成不可或缺的蛋白，是腫瘤血管生成重要的標(biāo)記分子之一，而血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是重要的血管生成調(diào)節(jié)因子，可促進(jìn)血管新生[4,5]。有研究發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9，MMP9)在NSCLC中高表達(dá)，并與腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后等密切相關(guān)[6]。因此，本研究旨在探討血清S-CD105、VEGF、MMP9表達(dá)與NSCLC根治術(shù)后再復(fù)發(fā)的關(guān)系，為術(shù)后復(fù)發(fā)的早發(fā)現(xiàn)、早治療提供臨床參考資料。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取2014年9月至2017年10月本院收治的102例行NSCLC根治術(shù)患者進(jìn)行研究，選取同期60例體檢健康者作為對照組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)組織病理學(xué)診斷為NSCLC者；②術(shù)前評估及術(shù)后病理證實(shí)為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①非原發(fā)腫瘤者；②術(shù)前有放化療史者；③合并嚴(yán)重心、肝、腎等器官衰竭疾病者；④有手術(shù)禁忌癥者；⑤術(shù)后1個(gè)月內(nèi)死亡者；⑥伴嚴(yán)重凝血功能障礙者；⑦伴其他部位惡性腫瘤者。術(shù)后隨訪2年，失訪6例，剩余96例，根據(jù)復(fù)發(fā)情況分為復(fù)發(fā)組(n=44)與未復(fù)發(fā)組(n=52)，復(fù)發(fā)組男26例，女18例；年齡26～73歲，平均(52.47±5.34)歲；TNM分期：Ⅰ期13例，Ⅱ23例，Ⅲ期8例；術(shù)后化療周期：>4周期11例，≤4周期33例；未復(fù)發(fā)組男31例，女21例；年齡29～74歲，平均(53.28±5.52)歲；TNM分期：Ⅰ期15例，Ⅱ33例，Ⅲ期4例；術(shù)后化療周期：>4周期21例，≤4周期31例；對照組男39例，女21例；年齡25～74歲，平均(51.64±5.85)歲，三組受試者性別、年齡資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。所有受試者知情，并簽署知情同意書。本研究經(jīng)河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2樣本收集:采集三組受試者清晨空腹肘靜脈血5mL，室溫靜止30min，2800r/min離心15min，離心半徑8cm，取上清，-80℃超低溫冰箱凍存待檢。

1.3方法:采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測血清S-CD105、VEGF、MMP9水平，S-CD105試劑盒購自美國Genzyme公司，VEGF、MMP9試劑盒購自英國Abcam公司，ELx800全自動(dòng)酶標(biāo)儀購自美國BioTek公司，實(shí)驗(yàn)步驟：試劑、待檢樣本冰盒上溶解30min，標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本稀釋，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待檢樣品孔、空白孔，在450nm波長下檢測，具體步驟嚴(yán)格參照試劑盒說明書操作。

2 結(jié) 果

2.1三組受試對象血清S-CD105、VEGF、MMP9水平比較:復(fù)發(fā)組患者血清S-CD105、VEGF、MMP9水平明顯高于未復(fù)發(fā)組、對照組(P<0.05)，未復(fù)發(fā)組與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 三組受試對象血清S-CD105 VEGF MMP9水平比較

2.2血清S-CD105、VEGF、MMP9不同水平患者復(fù)發(fā)率比較:以NSCLC根治術(shù)患者血清S-CD105、VEGF、MMP9表達(dá)中位數(shù)分為S-CD105低表達(dá)組和高表達(dá)組、VEGF低表達(dá)組和高表達(dá)組、MMP9低表達(dá)組和高表達(dá)組。血清S-CD105、VEGF、MMP9高表達(dá)組患者復(fù)發(fā)率均高于低表達(dá)組(P<0.05)。見表2。

表2 血清S-CD105 VEGF MMP9不同水平患者復(fù)發(fā)率比較n(%)

2.3血清S-CD105、VEGF、MMP9對NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測價(jià)值:ROC曲線分析顯示，MMP9預(yù)測NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的特異性最高，但敏感性較低；VEGF預(yù)測的AUC最高，敏感度、特異性略高于S-CD105的敏感度、特異性；各指標(biāo)間敏感度、特異性比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.328、4.527，P=0.312、0.104)。見表3、圖1。

表3 血清S-CD105 VEGF MMP9對NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測價(jià)值

表4 影響NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的Logistic回歸分析

圖1 血清S-CD105、VEGF、MMP9預(yù)測NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的ROC曲線

2.4NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的影響因素分析:以NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)為因變量，以性別、年齡、TNM分期、化療周期、S-CD105、VEGF、MMP9為自變量，單因素分析顯示，性別、年齡、TNM分期、化療周期、S-CD105、VEGF、MMP9是影響NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素，將有影響的因素再進(jìn)行Logistic多因素回歸分析顯示，TNM分期、化療周期、S-CD105、VEGF、MMP9是影響NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。見表4。

3 討 論

肺癌是影響人類健康的最常見腫瘤，有調(diào)查報(bào)道，肺癌發(fā)病率位于全世界惡性腫瘤首位，在男性中，其發(fā)病率與死亡率均居全球癌癥首位，在女性，其發(fā)病率居第4位，死亡率位于第2位[7]。在中國，肺癌所致死亡率居惡性腫瘤首位，在男性中，發(fā)病率和死亡率均位于全部惡性腫瘤首位，而在女性中，發(fā)病率僅次于乳腺癌，居第2位，死亡率位于惡性腫瘤首位，嚴(yán)重威脅人們生命健康[8]。

CD105又稱Endoglin，是一種膜結(jié)合性糖蛋白，可于細(xì)胞膜表面獨(dú)立存在，轉(zhuǎn)化生長因子-β(transform growth factor-β，TGF-β)受體復(fù)合物為其主要成分，其可拮抗TGF-β對血管內(nèi)皮細(xì)胞的抑制，發(fā)揮促血管生成的作用，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，CD105在多種腫瘤中存在，并與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[9，10]。微血管密度(microvessel density，MVD)是衡量腫瘤組織新生血管最主要量化指標(biāo)，而CD105可對微血管密度進(jìn)行標(biāo)記，An等[11]研究發(fā)現(xiàn)，CD105在NSCLC患者組織中高表達(dá)，并有助于血管侵犯的NSCLC手術(shù)類型選擇。本研究結(jié)果顯示，復(fù)發(fā)組患者血清S-CD105水平高于未復(fù)發(fā)組、對照組，提示NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)患者血清S-CD105高表達(dá)。VEGF是由巨噬細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞分泌的一種二聚體糖化蛋白，廣泛分布于多種組織中，在正常機(jī)體內(nèi)表達(dá)很低，僅可用于滿足血管正常密度與滲透功能所需，而在腫瘤發(fā)生時(shí)，VEGF能與其受體結(jié)合，觸發(fā)相關(guān)信號通路，促進(jìn)血管與淋巴管新生，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤侵襲及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[12]。劉燁等[13]研究發(fā)現(xiàn)，VEGF在結(jié)腸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)患者血清中高表達(dá)，且VEGF水平越高，癌細(xì)胞惡化程度越高，與患者術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，與未復(fù)發(fā)組、對照組比較，復(fù)發(fā)組患者血清VEGF水平明顯升高，與陳明祥等[14]研究結(jié)果相似，提示NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)患者血清VEGF水平升高。MMP9是一種鋅離子依賴性內(nèi)肽酶，可降解細(xì)胞外基質(zhì)，在多種惡性腫瘤中過表達(dá)，與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后等相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，復(fù)發(fā)組患者血清MMP9水平高于未復(fù)發(fā)組、對照組，與周寧等[15]研究結(jié)果類似，提示MMP9在NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)患者血清中高表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，血清S-CD105、VEGF、MMP9高表達(dá)組患者腫瘤復(fù)發(fā)率明顯高于低表達(dá)組，提示血清S-CD105、VEGF、MMP9水平可能與NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)。新生血管生成是NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的重要環(huán)節(jié)，而S-CD105、VEGF都具有促進(jìn)新生血管生成的作用，同時(shí)MMP9表達(dá)升高能夠刺激VEGF及其受體過表達(dá)，促進(jìn)新生血管生成，可能三者通過促進(jìn)腫瘤血管新生，促使NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的發(fā)生。通過ROC曲線分析顯示，VEGF預(yù)測NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的AUC最高，敏感度、特異性略高于S-CD105的敏感度、特異性，而MMP9預(yù)測的特異性最高，但敏感性較低，提示血清S-CD105、VEGF、MMP9對NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)均具有一定預(yù)測價(jià)值。最后研究顯示，TNM分期、化療周期、S-CD105、VEGF、MMP9是影響NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示血清S-CD105、VEGF、MMP9水平升高可能提高NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)患者血清S-CD105、VEGF、MMP9水平升高，三者高表達(dá)患者術(shù)后復(fù)發(fā)率高，血清S-CD105、VEGF對NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)均具有較高診斷敏感度、特異性，MMP9預(yù)測NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的特異性高而敏感度低，三者是影響患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。但本研究樣本量納入較少，為單中心研究，未對復(fù)發(fā)后不同轉(zhuǎn)移部位患者血清S-CD105、VEGF、MMP9水平進(jìn)行研究，為本研究存在的不足之處。