項 云，章嘯君，屠平光，郭曉令，徐寧迎，趙靜帆，吳承武，王文強

(1.金華市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 金華 321000；2.浙江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院； 3.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)淮安研究院)

金華豬是著名的國內(nèi)地方豬種，具有肉質(zhì)細(xì)嫩鮮美等優(yōu)良特征，隨著生活水平的提高，人們對金華豬等地方豬肉的需求逐年提高，因此飼養(yǎng)量也逐年增加。由于近年來豬疫情不斷，為了避免疫情對地方豬的影響、保護(hù)地方豬種質(zhì)資源，各地對地方豬開展了精液冷凍保存等工作。而公豬精液質(zhì)量對精液冷凍和解凍效果有密切關(guān)系，因此本論文對金華豬選育場的兩個金華豬品系公豬進(jìn)行了精子運動參數(shù)的測定和分析，為后續(xù)金華豬公豬精液冷凍保存提供參考。

1 材料和方法

1.1試驗材料 供試精液來源于金華市農(nóng)科院金華豬選育場4頭金華豬A型公豬和4頭金華豬B型公豬。B型豬是在A型豬基礎(chǔ)上培育而成的金華豬新品系。

1.2檢測方法 8頭金華豬公豬按A型和B型品系分組，每組4頭。參試公豬采精時間為2019年3月25日，各組采集精液1頭，3月26日，各組采集精液3頭。A型公豬月齡范圍為9.8月齡至39.3月齡，B型公豬月齡范圍為11.3月齡至28.9月齡。參試公豬采精頻率一致，公豬采用發(fā)情母豬誘情輔助人工采精，原精液進(jìn)行1∶1稀釋(稀釋液為公豬精液冷凍專用稀釋劑配制而成)，放入保溫箱運輸，及時送至實驗室檢測(采精與精液檢測間隔時間約為1.5 h左右)。檢測時將精液瓶輕微搖晃混勻，分別吸取1 mL精液至無菌的2 mL離心管中，置于恒溫臺統(tǒng)一回溫至37℃后開始檢測。采用紅寶石(MACRO)精子計數(shù)板(網(wǎng)格0.01 mm2，間隙0.01 mm)，采用美國MOFA GLOBAL公司的計算機輔助精子分析系統(tǒng)(Computer-assisted Sperm Analysis，CASA)進(jìn)行精子各參數(shù)計算和精液質(zhì)量分析。

1.3測定參數(shù)及統(tǒng)計分析 公豬精液測定參數(shù)為公豬月齡、采精量mL、前進(jìn)率(直線前進(jìn)運動精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率，又稱精子活力)、運動率(會動的精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率，又稱精子活率)、DSL(直線運動距離，距離測定為CASA系統(tǒng)設(shè)定時間參數(shù)內(nèi)測定的距離，有關(guān)距離測定下同)、 DAP(平均運動距離)、DCL(曲線運動距離)、VCL(曲線運動速度，精子頭沿其實際行走曲線的運動速度，μm/s)、VAP(平均路徑速度，精子頭沿其空間平均軌跡的運動速度，μm/s)、VSL(直線運動速度，精子頭從開始檢測時的位置至最后所處位置之間的直線運動的平均速度，μm/s)、LIN(線性運動比例VSL/VCL)、STR(直線運動比例VSL/VAP)、WOB(擺動比例VAP/VCL)、ALH(頭部擺動振幅，精子頭部實際運動軌跡對平均路徑的側(cè)擺幅度，μm)、AOC(頭部平均擺動度數(shù))。

由于公豬精液質(zhì)量受品種、營養(yǎng)、年齡、配種次數(shù)、疾病等多因素影響，統(tǒng)計分析建立在日糧營養(yǎng)和飼養(yǎng)管理一致、配種次數(shù)和健康狀況等因素相同的基礎(chǔ)上進(jìn)行精液質(zhì)量分析。為提高分析的準(zhǔn)確性，對月齡進(jìn)行回歸處理。以精子參數(shù)為依變量，以品系為自變量，建立公豬品系為單因子最小二乘協(xié)方差數(shù)學(xué)模型：

Yij=μ+Li+btij+eij

式中：Yij=品系i參試公豬j的精液參數(shù)；μ=采精時公豬月齡都為零的總體平均數(shù)，即未校正總體平均數(shù)；Li=品系i的效應(yīng)；b=精子參數(shù)對公豬月齡的回歸系數(shù)；tij=品系i參試公豬j的采精月齡；eij=隨機誤差。

采用SAS 8.01軟件對精液各參數(shù)最小二乘協(xié)方差模型進(jìn)行統(tǒng)計分析，對P值大于0.1以上的回歸系數(shù)的參數(shù)不進(jìn)行最小二乘協(xié)方差模型分析，采用樣本數(shù)相同的平均數(shù)t檢驗即可。

2 結(jié)果與分析

2.1精液各參數(shù)最小二乘協(xié)方差模型回歸系數(shù)計算 經(jīng)計算，運動率回歸系數(shù)為-0.3645，達(dá)10%顯著水準(zhǔn)，B型運動率和A型的最小二乘均數(shù)分別為94.98%和90.00%，差異不顯著。

由表1可見，其余參數(shù)回歸系數(shù)顯著水準(zhǔn)p值均較大，為P≥0.2147以上。前進(jìn)率、運動率、DAP、DCL、VAP、VCL和AOC的回歸系數(shù)均為負(fù)值，其余回歸系數(shù)均為正值。

2.2采精月齡、采精量和精子濃度等統(tǒng)計分析 公豬的月齡、采精量、精子濃度、前進(jìn)率和運動率見表2。

表2 采精月齡、采精量、濃度、前進(jìn)率和運動率平均數(shù)比較

由表2可知，A型和B型公豬的月齡、采精量、精子濃度、前進(jìn)率和運動率平均數(shù)比較差異不顯著(P>0.05)，但B型精子濃度比A型精子濃度高出115.3%。

2.3精子運動參數(shù)分析 由表3可見，B型和A型精子運動參數(shù)平均數(shù)比較均沒達(dá)到5%顯著水準(zhǔn)，B型精子ALH頭部擺動振幅平均數(shù)比A型高出13.3%。

表3 金華豬2個品系公豬精子運動參數(shù)平均數(shù)比較

3 小結(jié)與討論

3.1本次參試公豬月齡在9.8月齡至39.3月齡之間，精子運動率對月齡的回歸系數(shù)b為-0.3645，表明金華豬公豬精子運動率在1歲至3.3歲之間隨著年齡增長而下降。采精量對月齡的回歸系數(shù)b為1.768，表明精液量隨年齡增長而有增加的趨勢。

3.2由表1可見，精子前進(jìn)率、運動率、平均運動距離(速度)、曲線運動距離(速度)和頭部平均擺動度數(shù)的回歸系數(shù)為負(fù)值，表明部分精子運動參數(shù)隨年齡增長而有下降趨勢。

3.3相關(guān)數(shù)據(jù)表明，金華豬B型公豬精子濃度比A型提高115.3%，B型和A型公豬精子的采精量、精子濃度、前進(jìn)率、運動率和精子運動參數(shù)平均數(shù)比較差異不顯著，表明培育后的金華豬新品系B型公豬除了精子濃度提高外采精量、前進(jìn)率、運動率和運動參數(shù)基本保留原金華豬A型的精液質(zhì)量。

3.4由表3可見，B型公豬精子頭部擺動振幅比A型高出13.3%，表明B型公豬精子頭部擺動幅度比改良前的金華豬A型有增加的趨勢。

3.5金華豬精子前進(jìn)率平均數(shù)大于77.27%，梅山豬、巴克夏、大約克、長白和杜洛克豬精子前進(jìn)率平均數(shù)范圍為53.44%至61.45%[1-5]，據(jù)高圣玥等測定的杜洛克和長白豬前進(jìn)率分別為87.6%和86.3%[6]。精子前進(jìn)率是精液品質(zhì)的重要指標(biāo)，本次試驗表明具有較高的公豬精子前進(jìn)率為金華豬優(yōu)良的繁殖性能奠定了基礎(chǔ)。精子前進(jìn)率會受品種、日糧營養(yǎng)、飼養(yǎng)管理等因素影響，因此金華豬精子前進(jìn)率是否與其它豬品種有差異還有待進(jìn)一步探討。

3.6據(jù)郭蘋等測定梅山豬精子VSL、VAP、VCL分別為18.88 μm/s、33.89 μm/s、63.23 μm/s[1]，梅山豬LIN、STR、WOB分別為0.2986、0.5571和0.5359[1]，本次試驗的金華豬VSL、VAP、VCL均高于梅山豬，但本次試驗的金華豬LIN、STR、WOB與郭蘋等測定的梅山豬精子運動參數(shù)[1]相差不大。運動速度與采精后的稀釋液等因素有關(guān)，本次試驗金華豬精液稀釋液有減緩精子運動的趨勢作用，因本次試驗金華豬精液用作冷凍精液制作，金華豬與梅山豬精子運動速度差異是否因品種因素導(dǎo)致還有待進(jìn)一步探討。

3.7據(jù)伏彭輝等測定的大約克、長白和杜洛克豬精子運動參數(shù)VSL、VAP、VCL測定值[3]高于本次試驗的金華豬，而LIN、STR、WOB[3]數(shù)值與本次試驗的金華豬差別不大。但據(jù)陳永霞等測定的大約克、長白和杜洛克豬VSL、VAP、VCL測定值[5]要低于金華豬，但LIN、STR、WOB、ALH[5]數(shù)值與金華豬差別不大。表明精子運動參數(shù)與品種、飼養(yǎng)管理等諸多因素有關(guān)，金華豬精子VSL、VAP、VCL三個運動參數(shù)與外來豬是否有差異還有待進(jìn)一步探討。