祝赫 石玉瑩 吳映秀 肖茜 唐洪梅

腹瀉型腸易激綜合征(diarrhea-predominant irritable bowel syndrome，IBS-D)是一種慢性腸病，屬于中醫(yī)“泄瀉”“腹痛”“郁證”范疇，主要癥狀為反復(fù)發(fā)作的腹脹、腹痛、腹瀉?！澳X-腸”軸異常、“神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫”系統(tǒng)紊亂是主要的發(fā)病機(jī)制，發(fā)病因素涉及飲食、心理、腸道菌群等。中醫(yī)理論認(rèn)為，腸易激綜合征的病位在腸，以脾虛為本，癥候?qū)倨⑽?。以中醫(yī)“健脾止瀉”思想組方的腸激安方為廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院名老中醫(yī)長(zhǎng)期用于治療IBS-D的臨床驗(yàn)方，由四君子湯、痛瀉要方加減化裁而來(lái)，具有益氣健脾、止痛止瀉之功效，治療IBS-D臨床療效確切。

MicroRNAs (miRNAs)是長(zhǎng)度為18～25個(gè)核苷酸的一類(lèi)內(nèi)源性的非編碼的小分子RNA，對(duì)疾病的發(fā)生發(fā)展具有“多途徑”“多靶點(diǎn)”作用特點(diǎn)，與中醫(yī)理論整體觀有一定的趨同性，現(xiàn)代研究證實(shí)miRNA可以作為中藥發(fā)揮作用的介導(dǎo)因子，中藥可能選擇性地通過(guò)作用于多個(gè)miRNA及其轉(zhuǎn)錄因子-靶基因，調(diào)控細(xì)胞功能改變和疾病治療網(wǎng)絡(luò)，從而發(fā)揮復(fù)雜的生物學(xué)作用。近期有研究發(fā)現(xiàn)miRNA-29a作為腸道通透性的關(guān)鍵調(diào)控基因，可以通過(guò)靶基因調(diào)節(jié)腸道上皮屏障功能的完整性[1]。

IBS-D發(fā)病機(jī)制復(fù)雜多樣，課題組前期采用三因素結(jié)合的方法，成功制備了病證結(jié)合的IBS-D大鼠模型。本研究擬基于miRNA-29a，探討腸激安方對(duì)IBS-D模型大鼠的干預(yù)途徑和作用機(jī)制，為腸激安方的臨床使用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)新生SD大鼠，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[許可證號(hào)SCXK(粵)：2013-0034]。哺乳期母鼠和乳鼠同窩飼養(yǎng)于高壓滅菌木屑?jí)|料的大鼠專(zhuān)用飼養(yǎng)籠中。保持晝夜明暗交替12 h/12 h，噪音≤60 dB，飼養(yǎng)環(huán)境溫度20～25℃，相對(duì)濕度控制在50%～70%，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由進(jìn)食進(jìn)水，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲用水為高壓滅菌純凈水。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SYXK(粵)：2013-0092]。按3R原則對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予人道關(guān)懷。

1.2 主要藥物與試劑

腸激安方中藥飲片由康美藥業(yè)生產(chǎn)，購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥檢室鑒定。腸激安方藥物組成：茯苓20 g、甘草6 g、陳皮5 g、石榴皮30 g、黃連5 g、白芍15 g、土白術(shù)15 g、枳殼10 g、延胡索10 g、烏梅15 g、防風(fēng)15 g、柴胡10 g、黃芪15 g。匹維溴銨(規(guī)格：50 mg，法國(guó)Abbott Healthcare SAS, 批號(hào)：6400156)。蘇木素(ZLI-9615)購(gòu)自于北京中杉金橋公司；miRcute miRNA提取分離試劑盒(離心柱型)(DP501)、MiniBEST Universal RNA Extraction Kit(9767)、miRcute miRNA cDNA第一鏈合成試劑盒(KR201)、miRcute miRNA熒光定量檢測(cè)試劑盒(FP401)均購(gòu)于日本Takara公司；大鼠二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)酶聯(lián)免疫試劑盒(AE90824Ra)、大鼠D-乳酸(D-LA)酶聯(lián)免疫試劑盒(AE91431Ra)購(gòu)于上海AMEKO公司。

1.3 主要儀器

各規(guī)格微量移液器(美國(guó)Thermo)；多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo，1510)；PCR逆轉(zhuǎn)錄儀(美國(guó)Bio-rad，型號(hào)：T100)；熒光定量PCR儀(美國(guó)Bio-rad，CFX96)；37℃恒溫箱(上海一恒科技，DHP-9162)；TGrinder電動(dòng)組織研磨器(北京TIANGEN，OSE-Y40)；MagNA Lyser Green Beads(美國(guó)Roche，03358941001)

1.4 腸激安水煎液制備

按處方稱(chēng)取藥材，4倍量水浸泡30分鐘，大火煎煮40分鐘，濾過(guò)，藥液備用，再加3倍量水煎沸后小火煎煮30分鐘，濾過(guò)后合并兩次濾液，60℃，濃縮至生藥含量為1.67 g/mL。按照用藥時(shí)給藥劑量配成高、低兩個(gè)濃度。

1.5 動(dòng)物模型的制備

采用三因素(母嬰分離+醋酸刺激+束縛)結(jié)合的方法，復(fù)制大鼠IBS-D模型。取新生SD大鼠，從出生第2～14天，將乳鼠和母鼠分開(kāi)，每日3小時(shí)，每日一次。第15～27天，將潤(rùn)滑后的導(dǎo)尿管(內(nèi)徑1mm)經(jīng)肛門(mén)插入2 cm，注入0.087 mol/L的醋酸，醋酸起始用量為0.2 mL，每?jī)商煸黾?.1 mL，從第21天開(kāi)始保持醋酸用量為0.5 mL，每天對(duì)大鼠進(jìn)行醋酸直腸刺激一次。在直腸刺激結(jié)束后，立即用扎線帶將大鼠上肢束縛1小時(shí)，不限制大鼠活動(dòng)，但限制上肢搔抓面部。從第27天起，正常飼養(yǎng)2周，不進(jìn)行任何干預(yù)性操作。

1.6 IBS-D模型的評(píng)價(jià)

造模結(jié)束后，通過(guò)糞便含水量以及腹部回縮反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)評(píng)分進(jìn)行模型評(píng)價(jià)。參照文獻(xiàn)方法[2]，AWR評(píng)分進(jìn)行模型評(píng)價(jià)。將8F雙腔導(dǎo)尿管表面均勻涂抹醫(yī)用螯合劑，插入大鼠肛門(mén)深約8 cm處，用醫(yī)用膠帶固定，不限制大鼠的自由活動(dòng)。當(dāng)大鼠適應(yīng)環(huán)境后，用一次性注射器向?qū)蚬芮粌?nèi)注入1.5 mL空氣，觀察大鼠的5分鐘內(nèi)的活動(dòng)情況，記錄AWR評(píng)分。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。評(píng)分≥2分可視為模型復(fù)制成功。

1.7 分組給藥及糖水偏好值檢測(cè)

將造模成功的大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組，每組8只，按人和大鼠間體表面積折算的等效劑量比值換算臨床等效劑量，分別為IBS-D模型組、腸激安方低劑量組(16.74 g生藥/kg)、腸激安方高劑量組(33.48 g生藥/kg)、陽(yáng)性藥(匹維溴銨)組(18 mg/kg)。另設(shè)空白組8只。每天灌胃1次，連續(xù)14天。參考文獻(xiàn)方法測(cè)定大鼠的糖水偏好值，給藥結(jié)束后，各組大鼠禁水禁食24小時(shí)，每組分別給予1%的蔗糖水和純水各200 mL，24小時(shí)后使用量筒分別測(cè)量蔗糖水和純水的消耗體積。糖水偏好值=糖水?dāng)z取量/(糖水?dāng)z取量+純水取量)×100%。

1.8 樣品處理及指標(biāo)檢測(cè)

各組大鼠給藥結(jié)束后，異氟烷麻醉。使用EDTA采血管從腹主動(dòng)脈取血，靜置1小時(shí)后，2000 rpm離心10分鐘，用移液槍吸取上層血漿分裝，放置于-20℃冰箱備用；使用醫(yī)用手術(shù)刀快速截取遠(yuǎn)端結(jié)腸6 cm，使用預(yù)冷的生理鹽水清洗至無(wú)異物，迅速將結(jié)腸分為等長(zhǎng)的3段，一段浸泡于4%多聚甲醛溶液中，用于病理檢測(cè)；另兩段結(jié)腸組織分別置于凍存管中，液氮速凍，再轉(zhuǎn)移至-80℃超低溫冰箱保存，用于基因和蛋白的檢測(cè)。

1.8.1 ELISA法測(cè)定大鼠血漿中DAO和D-LA的含量 實(shí)驗(yàn)結(jié)束前1天，大鼠禁食12小時(shí)，不禁水，次日用異氟烷麻醉，腹主動(dòng)脈取血，室溫靜置約1小時(shí)，2000 rpm離心10分鐘，分離制備血漿，采用移液器將血漿分離并分裝于離心管中，放置于-20℃冰箱保存?zhèn)錂z測(cè)用。采用ELISA法檢測(cè)血漿中DAO和D-LA含量。測(cè)定方法和步驟按試劑盒的說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度對(duì)應(yīng)的OD值，在Excel中計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值通過(guò)直線回歸方程計(jì)算對(duì)應(yīng)的樣品的濃度。

1.8.2 病理檢測(cè) (1)制作組織蠟塊：將結(jié)腸組織在4%多聚甲醛中固定48小時(shí)，依次在70%乙醇、80%乙醇、85%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、100%乙醇、低熔點(diǎn)石蠟、高熔點(diǎn)石蠟中各1小時(shí)。按程序在自動(dòng)包埋機(jī)中包埋，室溫保存待用。(2)石蠟組織切片：將組織蠟塊固定于切片機(jī)固定槽內(nèi)，以20 μm厚度修片，然后調(diào)整切片機(jī)厚度為4 μm。以毛筆卷起蠟片，放置于50℃溫水中展片，待蠟片完全展開(kāi)后，用防脫載玻片迅速撈出，并將其放置于37℃過(guò)夜，第二天取出置于65℃烘箱中烤片1小時(shí)，用于病理觀察和免疫檢測(cè)。(3)HE染色：石蠟組織切片依次置于二甲苯、無(wú)水乙醇中各20分鐘，95%乙醇、85%乙醇各10分鐘，1×PBS洗3次，每次5分鐘。蘇木精染色3分鐘。PBS洗3次，每次5分鐘。伊紅染色1分鐘。最后自來(lái)水沖洗2小時(shí)，取出，常規(guī)脫水，透明，封片，最后置于鏡下觀察，圖像采集分析。

1.8.3 RT-qPCR法檢測(cè)結(jié)腸組織中miRNA-29a相對(duì)含量 miRNA-29a引物序列由上海生工生物采用加尾法設(shè)計(jì)合成Forward： gcgTAGCACCATCTGAAATCGGTTA。從-80℃冰箱中取出結(jié)腸黏膜標(biāo)本，在冰上解凍后，將其放置于一次性滅菌塑料培養(yǎng)皿上，按照說(shuō)明書(shū)操作，加入RNA裂解液，使用組織勻漿器，將組織在冰上充分研磨，按說(shuō)明書(shū)步驟提取結(jié)腸黏膜總RNA，取1 μL樣本進(jìn)行RNA純度檢測(cè)，A260/A280在1.7～2.0方可進(jìn)入逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程。用逆轉(zhuǎn)錄所得的cDNA做模板，進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，采用 Comparative Delta-delta CT法。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件：PCR儀37℃反應(yīng)60分鐘。合成的cDNA置于-20℃保存。PCR擴(kuò)增條件：起始模版變性：94℃ 2分鐘；PCR循環(huán)中模板變性94℃ 20秒，退火，延伸：60℃ 34秒，共40個(gè)循環(huán)。擴(kuò)增結(jié)果用CT值表示，以U6作為內(nèi)參基因，通過(guò)2-△△CT法計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組IBS-D大鼠一般行為情況比較

空白組大鼠的毛色潔白光澤，活潑好動(dòng)，精神狀態(tài)良好。模型組大鼠精神萎靡，肛門(mén)周?chē)鄯x，第7日起開(kāi)始出現(xiàn)腹瀉，呈黃色稀便樣。造模結(jié)束后，各造模組大鼠精神萎靡不振，毛發(fā)散亂無(wú)光澤、扎堆在角落、靜臥少動(dòng)，體重減輕。給藥2周后，匹維溴銨組、腸激安方高劑量組、腸激安方低劑量組大鼠的上述癥狀得到不同程度的改善。與空白組比較，模型組大鼠的體重明顯降低(P<0.05)；與模型組比較，匹維溴銨組、腸激安高劑量組、腸激安低劑量組的體重升高(P<0.05)。如表1所示。

表1 各組IBS-D大鼠體重比較

2.2 各組IBS-D大鼠內(nèi)臟敏感性AWR評(píng)分比較

與空白組比較，模型組AWR內(nèi)臟敏感性評(píng)分顯著升高(P<0.05)；與模型組比較，匹維溴銨組、腸激安方高劑量組、腸激安方低劑量組AWR評(píng)分降低(P<0.05)。如表2所示。

表2 各組IBS-D大鼠內(nèi)臟敏感性AWR評(píng)分比較

2.3 各組IBS-D大鼠糖水偏好值和糞便含水量比較

與空白組比較，模型組大鼠的糖水偏好值顯著降低(P<0.05)；與模型組比較，匹維溴銨組、腸激安方高劑量組、腸激安方低劑量組大鼠的糖水偏好值升高(P<0.05)。與空白組比較，模型組大鼠的糞便含水量顯著升高(P<0.05)；與模型組比較，匹維溴銨組、腸激安方高劑量組、腸激安方低劑量組大鼠的糞便含水量顯著降低(P<0.05)。如表3所示。

表3 各組IBS-D大鼠糖水偏好值與糞便含水量比較

2.4 各組IBS-D大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)觀察

在光學(xué)顯微鏡觀察下，各組大鼠的結(jié)腸黏膜上皮呈單層柱狀，固有層為黏膜肌層，結(jié)腸黏膜腺體形態(tài)及大小正常，結(jié)腸黏膜間質(zhì)內(nèi)無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，漿膜層未見(jiàn)水腫及糜爛或潰瘍，結(jié)腸組織形態(tài)學(xué)無(wú)明顯病理變化，提示模型組大鼠結(jié)腸黏膜處未有明顯的器質(zhì)性病變。如圖1所示。

注：A正常組; B模型組; C匹維溴銨組; D腸激安方高劑量;E腸激安方低劑量組。

2.5 各組IBS-D大鼠血漿中D-LA和DAO的含量比校

與空白組比較，模型組血漿中D-LA和DAO的含量升高(P<0.05)；與模型組比較，匹維溴銨組、腸激安方高劑量組、腸激安低劑量組血漿中D-LA、DAO含量明顯降低(P<0.05)。如表4所示。

表4 各組IBS-D大鼠血漿中D-LA和DAO的含量比較

2.6 各組IBS-D大鼠結(jié)腸組織中miRNA-29a的相對(duì)含量比較

與空白組比較，模型組大鼠結(jié)腸組織中miRNA-29a的相對(duì)含量升高(P<0.05)；與模型組比較，匹維溴銨組、腸激安方高劑量、腸激安方低劑量組大鼠結(jié)腸組織中miRNA-29a的相對(duì)含量降低(P<0.05)。如表5所示。

表5 各組IBS-D大鼠結(jié)腸組織中miRNA-29a的相對(duì)含量比較

3 討論

IBS-D屬于中醫(yī)“泄瀉”“腹痛”“郁證”范疇，《素問(wèn)·臟氣法時(shí)論篇》言：“脾病者，虛則腹痛、腸鳴、飧泄、食不化?！薄毒霸廊珪?shū)·泄瀉》亦言：“泄瀉之本，無(wú)不由于脾胃?！睗裥袄Ф蚱㈥?yáng)，脾運(yùn)化功能失常，濕熱內(nèi)蘊(yùn)，導(dǎo)致泄瀉，久瀉則脾虛；脾胃為后天之本，脾之運(yùn)化失常而寒濕停滯，濕阻氣滯引為腹痛；素體虛弱，或長(zhǎng)期飲食不節(jié)，或情志失調(diào)，或久瀉傷正，以致脾胃虧虛，升運(yùn)無(wú)權(quán)，則發(fā)生泄瀉[3]。脾失健運(yùn)，則不能制水，濕注腸道，造成脾虛泄瀉，是腸道通透性增加的內(nèi)在病因，因此對(duì)IBS-D當(dāng)健脾化濕，澀腸止瀉。

課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，腸激安方可調(diào)節(jié)IBS-D大鼠的神經(jīng)遞質(zhì)、胃腸激素的功能，可顯著改善IBS-D腸道敏感性水平。匹維溴銨是對(duì)胃腸道具有高度選擇性解痙作用的拮抗劑，臨床上主要用于治療與腸道功能紊亂有關(guān)的疼痛、排便異常、腸道不適及膽道功能紊亂有關(guān)的疼痛，其能改善IBS內(nèi)臟高敏感模型大鼠抬腹閾值、P物質(zhì)、局部腸組織中降鈣素基因相關(guān)肽和促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子等受體的表達(dá)，其療效和作用機(jī)理與本實(shí)驗(yàn)研究方向相符，故選用匹維溴銨作為陽(yáng)性對(duì)照藥[4]。

IBS-D目前被認(rèn)為屬于功能性腸病，因其病因和病機(jī)尚未完全闡明，所以IBS-D動(dòng)物模型的復(fù)制存在一定的局限性，目前IBS的模型復(fù)制思路主要包括模擬IBS的病因和IBS的某一病理生理機(jī)制，故多根據(jù)一個(gè)因素或一種機(jī)制建立[5-6]，主要分為以下幾類(lèi)：精神應(yīng)激：束縛應(yīng)激模型、游泳致疲勞模型、慢性激怒模型；炎癥：病原體炎癥、化學(xué)炎癥動(dòng)物模型；神經(jīng)-內(nèi)分泌失調(diào)；早期生活事件；結(jié)、直腸刺激。課題組基于IBS-D復(fù)雜的病理機(jī)制和發(fā)病因素，從中醫(yī)病證結(jié)合的角度，成功利用了母子分離+醋酸灌腸+束縛應(yīng)激三因素法復(fù)制IBS-D大鼠模型[7]。

IBS-D內(nèi)臟敏感性評(píng)估結(jié)果顯示，模型組大鼠AWR評(píng)分明顯高于正常組，表明模型組大鼠的內(nèi)臟敏感性與正常組比較明顯升高，結(jié)合糞便含水量結(jié)果，表明IBS-D模型復(fù)制成功。通過(guò)藥物干預(yù)后，腸激安方高劑量、腸激安方低劑量組大鼠AWR評(píng)分降低，提示腸激安方具有降低IBS-D大鼠內(nèi)臟敏感性的作用。

血液中DAO和D-LA的含量是評(píng)價(jià)腸道屏障功能的標(biāo)志物。DAO主要位于腸道黏膜絨毛中，正常生理狀態(tài)下血漿中DAO含量較低，當(dāng)腸黏膜屏障功能受損、通透性增加時(shí)，DAO從破損的細(xì)胞中釋放出來(lái)，導(dǎo)致血液中DAO含量升高[8]。D-LA是腸道菌群代謝產(chǎn)物，正常生理狀態(tài)下血液中D-LA含量較低，當(dāng)腸黏膜損傷、通透性增加后，D-LA通過(guò)受損的腸上皮細(xì)胞和緊密連接進(jìn)入血液，導(dǎo)致血液中D-LA的含量升高[9]。本研究結(jié)果表明，IBS-D模型大鼠的血漿中DAO和D-LA的含量均顯著升高，提示IBS-D大鼠屏障功能受損，腸道通透性增加。當(dāng)給予腸激安方干預(yù)后，各組大鼠血漿中DAO和D-LA的含量都有所下降，提示腸激安方可改善IBS-D大鼠腸道屏障功能。另有文獻(xiàn)報(bào)道[10]，腸道通透性和內(nèi)臟高敏之間存在著正向調(diào)控的關(guān)系，并且共同參與了IBS-D的病理機(jī)制，但通過(guò)對(duì)本研究結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析，并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)二者明顯的關(guān)聯(lián)性，其原因可能與AWR評(píng)分主觀性較大和樣本量不足有關(guān)，后續(xù)研究將采用肌電圖等相對(duì)更為準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)方案來(lái)評(píng)估腸道敏感性的變化情況，以分析三因素法IBS-D模型大鼠腸道敏感性和屏障功能受損后腸道通透性增加之間的關(guān)系。

miRNA在各種疾病中扮演著重要的角色，不同miRNA在不同疾病組織的表達(dá)水平有顯著差異，在腫瘤[11]、心血管疾病[12]、神經(jīng)疾病[13]及自身免疫性疾病[14]中通過(guò)調(diào)控靶基因的表達(dá)，參與疾病的生理病理過(guò)程。近期研究表明中藥復(fù)方可通過(guò)對(duì)miRNA的調(diào)控，進(jìn)而影響疾病的關(guān)鍵基因，如腫瘤、腎病、消化道疾病等。中藥復(fù)方或中藥的活性成分可以特異性作用于單個(gè)或多個(gè)miRNA，特定的miRNA也可能同時(shí)調(diào)控疾病相關(guān)基因，這種復(fù)雜的調(diào)節(jié)關(guān)系符合中醫(yī)對(duì)疾病的認(rèn)識(shí)，可以更加精確地對(duì)中藥復(fù)方的作用機(jī)制進(jìn)行拓展和深化。

miRNA-29包括miRNA-29a、miRNA-29b和miRNA-29c三種成熟序列，在小腸、結(jié)腸黏膜、血液微泡均有穩(wěn)定高表達(dá)，并已初步證明miRNA-29a可以通過(guò)干預(yù)位于谷氨酰胺合成酶基因3’端的序列結(jié)合位點(diǎn)，從而調(diào)節(jié)腸道上皮屏障功能的完整性[1]。有研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-29可抑制緊密連接蛋白-1和核轉(zhuǎn)錄抑制因子的表達(dá)，從而增加腸道的通透性[15]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，IBS-D模型大鼠結(jié)腸黏膜屏障功能損傷，AWR評(píng)分、腸道通透性升高，結(jié)腸組織中miRNA-29a的表達(dá)水平降低；腸激安方高、低劑量干預(yù)后，結(jié)腸黏膜的屏障損傷情況在一定程度上有所改善，AWR評(píng)分、腸道通透性降低，miRNA-29a表達(dá)水平升高。結(jié)果提示，IBS-D腸道通透性升高和內(nèi)臟高敏感性的病理機(jī)制可能與miRNA-29a的調(diào)控有關(guān)，腸激安方可能通過(guò)對(duì)miRNA-29a的調(diào)控從而減輕IBS-D大鼠腸道高通透性和內(nèi)臟高敏感性的病理狀態(tài)，改善IBS-D癥狀。本實(shí)驗(yàn)是對(duì)miRNA-29a與IBS-D關(guān)系的初步研究，miRNA的生物學(xué)功能復(fù)雜，腸激安方對(duì)miRNA-29a及靶基因的調(diào)控作用及其靶基因與IBS-D病理機(jī)制的關(guān)系還需要進(jìn)一步探討。