孟凡迪,白 銀,王中江,江連洲,李 楊,2,3,李 良,

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150030；2.哈爾濱食品產(chǎn)業(yè)研究院,黑龍江 哈爾濱 150028；3.國家大豆技術(shù)研究中心,黑龍江 哈爾濱 150000）

大豆蛋白是一種所含氨基酸種類豐富、營養(yǎng)價值全面的優(yōu)質(zhì)植物蛋白質(zhì),因其具有較好的功能特性,故在食品工業(yè)方面有著較廣泛的應(yīng)用[1]。但其功能性質(zhì)易受許多外界因素的影響,因此需要用改性的方法進(jìn)一步改善其功能特性。目前,大豆蛋白的改性方法主要有物理法、化學(xué)法、酶法等[2]。糖基化改性屬于化學(xué)改性范疇,加熱條件下,糖基化反應(yīng)可在蛋白和糖分子間自發(fā)進(jìn)行,無需催化劑,且反應(yīng)得到的蛋白質(zhì)多糖復(fù)合物具有較好的溶解性、乳化性、穩(wěn)定性、凝膠性等,是一種理想的蛋白改性方法[3-4]。但傳統(tǒng)糖基化方法中,干法反應(yīng)所需時間長,濕法反應(yīng)不易控制、接枝產(chǎn)物顏色深,這些問題都限制了蛋白質(zhì)接枝改性方法的廣泛應(yīng)用。

目前較多使用外場輔助技術(shù)輔助糖基化反應(yīng),以彌補傳統(tǒng)糖基化反應(yīng)的不足,空化射流屬于外場輔助手段的一種,可以產(chǎn)生空化效應(yīng)?？栈?yīng)是液流系統(tǒng)中的局部壓力低于相應(yīng)溫度下該液體的飽和蒸氣壓時,液體迅速氣化形成許多空泡,這些空泡隨液體流入高壓區(qū)后,發(fā)生收縮、漬滅的現(xiàn)象。空泡漬滅瞬間能形成強烈的沖擊力和速率高達(dá)100 m/s的微射流。并伴隨高壓等極端物理現(xiàn)象,這種極端條件可使在一般條件下難以實現(xiàn)的物理、化學(xué)反應(yīng)得以進(jìn)行[5-6]。

空化射流強大的沖擊力使其已在促進(jìn)化學(xué)反應(yīng)方面有許多應(yīng)用,但大都是生物醫(yī)學(xué)方面,目前在食品行業(yè)中應(yīng)用較少。本實驗將空化射流用于輔助糖基化反應(yīng),對不同空化射流時間對糖基化產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能性進(jìn)行研究,從而探究空化射流對糖基化改性的影響,為改善大豆蛋白功能性與空化射流在食品加工行業(yè)方面的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

大豆分離蛋白 山東禹王集團(tuán)；葡萄糖 中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑有限公司；大豆油 九三糧油工業(yè)集團(tuán)有限公司；1-苯胺基-8-萘磺酸（8-anilino-1-naphthalenesulfonic acid,ANS） 美國Sigma公司；考馬斯亮藍(lán)G-250 天津市科密歐化學(xué)試劑廠；十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）配制試劑盒、Lowry法蛋白質(zhì)含量測定試劑盒 上海荔達(dá)生物科技有限公司；其他化學(xué)試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

AL204型分析天平 梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；THZ-80水浴恒溫振蕩器 江蘇金壇億通電子有限公司；空化射流機 北京中森匯嘉科技發(fā)展有限責(zé)任公司；5430小型高速離心機 德國Eppendorf公司；FD5-3型冷凍干燥機 美國Sim公司；722型紫外-可見分光光度計 上海光譜儀器有限公司；SDS-PAGE儀北京君意東方電泳設(shè)備有限公司；HYP-308消化爐上海纖檢儀器有限公司；LNK-871型凱氏定氮快速自動蒸餾器 江蘇省宜興市科教儀器研究所；F-4500熒光分光光度計 日本Hitachi公司；VECTOR33傅里葉變換紅外分析儀 德國Bruker公司。

1.3 方法

1.3.1 糖基化大豆分離蛋白制備

將大豆分離蛋白與葡萄糖以質(zhì)量比4∶1溶于pH 7.5、0.2 mol/L磷酸鹽緩沖溶液,室溫下攪拌2 h至完全溶解,配制成蛋白質(zhì)量濃度為0.05 g/mL的樣品溶液。將樣品置于80 ℃恒溫水浴鍋預(yù)熱后,分別倒入空化射流機中空化20、40、60、80、100、120 min,空化過程中保持溫度80 ℃恒定?？栈淞魈幚砗?取出樣品在80 ℃水浴條件下繼續(xù)加熱,控制樣品進(jìn)行糖基化反應(yīng)總時長均為6 h。待反應(yīng)結(jié)束后,立即將樣品放入冰水浴中冷卻至室溫,離心除去不溶物,取上清液透析24 h（4 ℃）,冷凍干燥后置于4 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 接枝度測定

采用鄰苯二甲醛（o-phthalaldehyde,OPA）法[7]測接枝度。準(zhǔn)確稱取40.0 mg的OPA溶解于1.0 mL甲醇中,再加入25.0 mL 0.1 mol/L硼砂溶液、2.5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%的SDS、100 μLβ-巰基乙醇,最后用蒸餾水定容到50 mL,制得OPA試劑。測定時,取200 μL樣品溶液（蛋白質(zhì)量濃度2 mg/mL）溶于4.0 mL OPA試劑中,混合均勻,放入35 ℃水浴中反應(yīng)2 min,之后在340 nm波長處測吸光度At?？瞻讓φ战M為在4.0 mL OPA試劑加入200 μL水。接枝度按式（1）計算。

式中：A0為反應(yīng)前樣品的吸光度；At為反應(yīng)t時間后的吸光度。

1.3.3 褐變程度測定

將樣品用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1% SDS溶液稀釋,使樣品液蛋白質(zhì)量濃度為2 mg/mL,以稀釋液作空白對照,在420 nm波長處測定吸光度A420nm[8]。褐變程度與A420nm成正比。

1.3.4 溶解性測定

稱取一定量未處理的樣品與糖基化的樣品,分別溶解配制成蛋白質(zhì)量濃度為2 mg/mL的溶液,并在室溫下均勻攪拌30 min使其充分溶解。然后在4 ℃、12 000×g條件下離心10 min。采用Lowry法[9]測定上清液中的蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù),使用牛血清白蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)物繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（y＝1.302 9x+0.001 6,R2＝0.998 1）,測定500 nm波長處的吸光度,用凱氏定氮法測定蛋白樣品中總蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)。溶解度按式（2）計算。

1.3.5 乳化活性及乳化穩(wěn)定性測定

根據(jù)Pearce等[10]的方法進(jìn)行,首先取樣品溶于0.1 mol/L、pH 7.0磷酸鹽緩沖溶液中使其質(zhì)量濃度為2 mg/mL,取5 mL樣品溶液加入15 mL大豆油,在10 000 r/min分散1 min,立即從溶液底部吸取50 mL乳濁液,加入5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1% SDS溶液進(jìn)行稀釋,在500 mm波長處測吸光度A0。20 min后,測吸光度A20。乳化活性（emulsifying activity index,EAI）和乳化穩(wěn)定性（emulsion stability index,ESI）分別由公式（3）、（4）計算。

式中：DF為稀釋倍數(shù)（100）；ρ為蛋白質(zhì)量濃度/（g/mL）；φ為比色皿光程（1 cm）；θ為乳液中油相所占比例（0.25）；A0和A20分別為0 min和20 min時的吸光度。

1.3.6 SDS-PAGE分析大豆蛋白分子質(zhì)量

根據(jù)Leammli[11]的方法稍作修改,先分別配制12%分離膠與5%濃縮膠。將蛋白質(zhì)量濃度為4 mg/mL樣品溶液與4×上樣緩沖液以體積比3∶1混合,然后在95 ℃下加熱3 min做變性處理,冷卻至室溫上樣,上樣量為10 mL。電泳時保持恒壓,其中濃縮膠電壓保持為80 V,分離膠電壓保持為120 V。用染色液（含質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%考馬斯亮藍(lán)G-250）染色30 min,之后用脫色液脫色,成像,采用彩虹Marker作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白。

1.3.7 表面疏水性測定

根據(jù)Kato[12]、Shen Lan[13]等的方法稍作修改。將未處理的樣品與糖基化的樣品分別用0.1 mol/L、pH 7.0的磷酸鹽緩沖溶液稀釋成蛋白質(zhì)量濃度為1.0、0.5、0.25、0.1、0.02 mg/mL的溶液,并用此磷酸鹽緩沖溶液配制ANS溶液（8 mmol/L）。取2 mL稀釋后的樣品溶液,加入20 μL ANS溶液后混合均勻,設(shè)定激發(fā)波長為390 nm,發(fā)射波長為470 nm,測定其熒光強度。以蛋白質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),熒光強度為縱坐標(biāo)作圖,采用線性回歸分析進(jìn)行曲線擬合,曲線的初始斜率即為樣品的表面疏水性H0。

1.3.8 傅里葉變換紅外光譜分析

準(zhǔn)確稱量2 mg的樣品,加入一定量的溴化鉀至200 mg,用研缽研磨成均勻粉末,壓制成薄片,再用傅里葉變換紅外光譜儀做全波段掃描（400～4 000 cm-1）,掃描次數(shù)64 次。

1.3.9 熒光光譜分析

根據(jù)Bonomi等[14]方法進(jìn)行一定修改。用0.01 mol/L、pH 7.0的磷酸鹽緩沖液配制樣品溶液,使蛋白質(zhì)量濃度為0.05 mg/mL。選擇激發(fā)波長為290 nm、激發(fā)狹縫5 nm,發(fā)射波長范圍為300～400 nm,掃描速率為240 nm/min。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

所有實驗均平行3 次,采用SPSS 19軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,多重比較采用Duncan分析方法,P＜0.05表示差異顯著,數(shù)據(jù)采用Origin 8.0軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 糖基化產(chǎn)物接枝度與褐變程度分析結(jié)果

接枝度是衡量糖基化反應(yīng)程度的一個重要指標(biāo)[15]。由圖1可知,大豆蛋白接枝物的接枝度隨空化射流時間的延長呈增長趨勢,說明空化射流可以促進(jìn)蛋白與糖的接枝反應(yīng)?？栈淞鬏o助120 min得到的糖基化產(chǎn)物的接枝度從29.1%增加到43.2%。這是由于空化射流過程中,空泡漬滅瞬間所產(chǎn)生的空穴效應(yīng)、超高壓等可以使蛋白的分子結(jié)構(gòu)展開,變得更加松散,使可發(fā)生接枝反應(yīng)的游離氨基更多地暴露在蛋白分子表面,從而使更多的游離氨基酸與糖的還原性羰基末端發(fā)生糖基化反應(yīng),接枝物的接枝度增加。同時空化射流產(chǎn)生的高速水射流,可以使蛋白的游離氨基與糖的羰基碰撞幾率增大,這也可以加快接枝反應(yīng)速率。

糖基化棕褐色產(chǎn)物的特征波長是420 nm[16]。如圖1所示,隨著空化射流時長的增加,蛋白接枝物的A420nm顯著增大（P＜0.05）,大豆分離蛋白-葡萄糖褐變程度增加。這是由于空化射流使蛋白結(jié)構(gòu)展開,同時空化射流的射流效應(yīng)使蛋白與糖結(jié)合幾率增大,從而使蛋白自由氨基基團(tuán)能更多的與葡萄糖分子的羧基末端反應(yīng),使糖基化反應(yīng)程度增加,生成更多的深棕色物質(zhì)使褐變程度不斷增加。

圖1 空化射流處理時間對糖基化產(chǎn)物接枝度與褐變程度變化的影響Fig.1 Effects of cavitation jet treatment duration on the degree of grafting and browning

2.2 糖基化產(chǎn)物溶解性分析結(jié)果

由圖2可知,空化射流輔助糖基化反應(yīng)比單純糖基化反應(yīng)對大豆蛋白的溶解度改善效果更好。在空化射流60 min內(nèi),接枝物的溶解度隨著空化射流時間延長而顯著增加（P＜0.05）,空化射流處理60 min時的糖基化產(chǎn)物的溶解度最高,達(dá)到89.27%,與未處理蛋白相比提高43.3%,與單獨加熱糖基化產(chǎn)物相比提高約37%。這可能是因為空化射流會加快糖基化反應(yīng)速率,而引入更多的糖鏈中的多羥基官能團(tuán)[17],改善了蛋白質(zhì)和水分子之間親和力[18]。同時空化射流所產(chǎn)生的空化效應(yīng)和機械效應(yīng)會破壞蛋白質(zhì)分子的高級結(jié)構(gòu),釋放出小分子的亞基和肽,使其溶解度增加[19]。繼續(xù)延長空化射流時間,溶解度變化趨于平緩并有小幅度下降,這是因為到達(dá)一定程度后繼續(xù)增加親水性羥基對蛋白親水性影響不大。同時可能因為空化過度使蛋白質(zhì)發(fā)生一定程度的聚集,生成大分子質(zhì)量物質(zhì),故溶解性有小幅度下降[20]。

圖2 空化射流處理時間對糖基化產(chǎn)物溶解性變化的影響Fig.2 Effect of cavitation jet treatment duration on solubility of glycosylated products

2.3 糖基化產(chǎn)物乳化活性與乳化穩(wěn)定性分析結(jié)果

圖3 空化射流處理時間對糖基化產(chǎn)物乳化活性與乳化穩(wěn)定性變化的影響Fig.3 Effect of cavitation jet treatment duration on emulsifying activity and emulsion stability of glycosylated products

由圖3可知,與大豆蛋白相比,糖基化反應(yīng)可以顯著提高其乳化活性與乳化穩(wěn)定性（P＜0.05）。乳化活性隨空化射流處理時間的延長呈先增后減的趨勢,在空化射流處理80 min時,乳化活性改善效果最好,與未處理蛋白相比提升183.17%,與單獨加熱糖基化產(chǎn)物相比提高57.83%。蛋白乳化性與蛋白的溶解性、疏水基團(tuán)暴露程度均存在一定聯(lián)系[21]?？栈淞鞔龠M(jìn)了蛋白糖基化反應(yīng),使蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)變的松散,蛋白分子內(nèi)部更多的疏水基團(tuán)暴露[22]。在蛋白乳化的過程中,更多疏水基團(tuán)與油相結(jié)合,利于蛋白吸附在油-水界面上,阻礙油滴間的聚合,從而提高蛋白的乳化活性。繼續(xù)延長空化射流時間,乳化活性開始降低,接枝度不斷增大,更多的親水基團(tuán)的引入會對油-水界面的平衡造成破壞,復(fù)合物界面活性降低,從而造成乳化活性降低[23]。

乳化穩(wěn)定性也隨空化射流處理時間的延長呈先增后減的趨勢,處理40 min時達(dá)到最高值。這是因為隨著糖基化反應(yīng)的進(jìn)行,糖的引入增加了油-水乳化體系中水相的黏度,降低了其表面張力使乳化體系的穩(wěn)定性得到提高。空化射流處理40 min時達(dá)到最高值,與未處理蛋白相比提高220.21%,與單獨加熱糖基化產(chǎn)物相比提高153.72%。40 min后乳化穩(wěn)定性小幅度下降,這可能是由于空化射流會破壞蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu),使蛋白發(fā)生聚集。蛋白聚集后,疏水基團(tuán)被埋在分子內(nèi)部,無法與油相接觸而發(fā)揮乳化作用,導(dǎo)致乳化穩(wěn)定性不繼續(xù)增加[24]。

2.4 糖基化產(chǎn)物SDS-PAGE分析結(jié)果

SDS-PAGE可被用來分析蛋白質(zhì)的亞基及分子質(zhì)量的變化情況。圖4反映不同空化射流處理時間輔助糖基化改性的大豆蛋白各亞基條帶的變化,可以看出,在空化射流輔助下,大豆蛋白與葡萄糖發(fā)生共價反應(yīng)。交聯(lián)的蛋白隨著空化射流時間的延長生成異肽鏈或二硫鍵,從而生成了一些大分子物質(zhì),這些大分子物質(zhì)不能通過濃縮膠和分離膠,留在分離膠頂部,使分離膠頂部顏色逐漸加深。

隨著空化射流時間的延長,大豆蛋白的亞基組成發(fā)生明顯變化,多個亞基因為與葡萄糖之間發(fā)生接枝作用,生成了大分子聚集體,表現(xiàn)為對應(yīng)譜帶的缺失。另外一種可能是一個葡萄糖連接了一個亞基,但是亞基之間逐漸聚合,表現(xiàn)為譜帶的缺失。

圖4 不同空化射流時間下糖基化產(chǎn)物的SDS-PAGE圖Fig.4 Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis of glycosylated products at different cavitation jet times

2.5 糖基化產(chǎn)物表面疏水性分析結(jié)果

由圖5可知,對比未糖基化處理的蛋白與普通糖基化（即空化射流0 min）產(chǎn)物,可以發(fā)現(xiàn)糖基化反應(yīng)可以降低蛋白表面疏水性。這是由于大豆蛋白經(jīng)糖基化反應(yīng)后,產(chǎn)物中引入了較多的親水性羥基,從而導(dǎo)致表面疏水性降低。短時間空化射流處理可以顯著提高接枝物的表面疏水性（P＜0.05）,處理20 min時表面疏水性達(dá)到最高,之后不斷降低。這可能是因為空化效應(yīng)使折疊的肽鏈展開,更多藏在蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的疏水性基團(tuán)暴露,從而使表面疏水性增加。有研究表明,空化作用會增加蛋白表面疏水性[25]。繼續(xù)延長空化射流時間,糖基化反應(yīng)程度加劇,更多葡萄糖與蛋白質(zhì)共價結(jié)合,產(chǎn)物中引入了更多的親水性羥基,使蛋白質(zhì)分子親水性增加[26-27]。另外可能是由于空化射流處理使疏水基團(tuán)相互作用導(dǎo)致了蛋白質(zhì)的聚集,從而降低了接枝物的表面疏水性[28]。

2.6 糖基化產(chǎn)物紅外光譜分析結(jié)果

圖6 不同空化射流處理時間糖基化產(chǎn)物傅里葉變換紅外光譜分析Fig.6 Fourier transform infrared spectra of glycosylated products at different cavitation jet treatment times

紅外光譜（圖6）測定的酰胺I帶可以計算二級結(jié)構(gòu)相對含量,對酰胺I帶的譜帶進(jìn)行了如下歸屬：1 650～1 660 cm－1為α-螺旋,1 610～1 640 cm－1和1 670～1 690 cm－1為β-折疊,1 660～1 670 cm－1和1 690～1 700 cm－1為β-轉(zhuǎn)角,1 640～1 650 cm－1為無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)。對酰胺I帶進(jìn)行處理后進(jìn)行二階導(dǎo)數(shù)擬合。各峰面積占總面積的比例即為各二級結(jié)構(gòu)的相對含量。不同空化射流處理時間糖基化產(chǎn)物的二級結(jié)構(gòu)相對含量如表1所示。

表1 空化射流處理時間對糖基化產(chǎn)物二級結(jié)構(gòu)變化的影響Table 1 Effect of cavitation jet treatment duration on secondary structures of glycosylated products

由表1可知,與未糖基化蛋白相比,糖基化反應(yīng)可以使葡萄糖與大豆蛋白共價結(jié)合,從而使蛋白二級結(jié)構(gòu)發(fā)生變化?？栈淞鬏o助可以使接枝物二級結(jié)構(gòu)相對含量發(fā)生顯著變化（P＜0.05）,接枝物α-螺旋相對含量顯著降低,β-折疊與無規(guī)卷曲相對含量增加。空化射流處理60 min時,變化最為明顯,接枝物的α-螺旋相對含量由19.47%下降到12.58%,β-折疊和無規(guī)卷曲的相對含量則分別從32.25%和19.72%增加到38.29%和20.96%。說明空化射流輔助條件下,糖基化大豆蛋白的二級結(jié)構(gòu)主要是由α-螺旋結(jié)構(gòu)解螺旋形成β-折疊和無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu),由有序變?yōu)闊o序。這是由于參與糖基化反應(yīng)的ε-氨基位于α-螺旋結(jié)構(gòu)中,ε-氨基與葡萄糖中的還原性羰基反應(yīng)造成了α-螺旋結(jié)構(gòu)相對含量的降低[29]?？栈淞骺梢源龠M(jìn)糖基化反應(yīng),使更多ε-氨基參與糖基化反應(yīng),從而降低α-螺旋相對含量。蛋白二級結(jié)構(gòu)中α-螺旋呈緊密無空腔結(jié)構(gòu),較穩(wěn)定,不利于蛋白功能性的發(fā)揮。α-螺旋相對含量降低可以使蛋白結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性變差,從而有利于蛋白功能性的改善[30-31]。

2.7 糖基化產(chǎn)物熒光光譜分析結(jié)果

圖7 不同空化射流處理時間對糖基化產(chǎn)物熒光強度變化的影響Fig.7 Effect of cavitation jet treatment time on fluorescence intensity of glycosylated products

由圖7可以看出,對比未經(jīng)糖基化反應(yīng)蛋白,糖基化反應(yīng)可以顯著降低蛋白的熒光強度?？栈淞魈幚砜梢允沟鞍捉又ξ锏臒晒鈴姸蕊@著降低,處理80 min時,熒光強度達(dá)到最小值,繼續(xù)增加空化射流時間,熒光強度有所上升。這可能是由于空化射流破壞了大豆蛋白的結(jié)構(gòu),導(dǎo)致更多的發(fā)色團(tuán)暴露在溶劑中。另外,空化射流促進(jìn)了糖基化反應(yīng)的發(fā)生,使更多蛋白與葡萄糖共價結(jié)合,導(dǎo)致對色氨酸的熒光猝滅作用的發(fā)生,這與Sun Yuanxia等[32]的研究結(jié)果類似。同時空化射流處理使蛋白質(zhì)的λmax發(fā)生不同程度紅移,λmax發(fā)生紅移代表蛋白具有更松散的三級結(jié)構(gòu),有利于蛋白功能特性的發(fā)揮[33-34],證明空化射流處理可以改變接枝物的三級結(jié)構(gòu),從而改善接枝物的功能性。

3 結(jié) 論

大豆分離蛋白與葡萄糖糖基化產(chǎn)物的接枝度隨空化射流時間延長而逐漸增大,說明空化射流可以促進(jìn)糖基化反應(yīng)。經(jīng)空化射流輔助處理后,接枝物功能性均有不同程度改善。但達(dá)到最優(yōu)所需的處理時間不同。溶解度在處理60 min時改善最為明顯,達(dá)到峰值89.27%,與未處理蛋白相比提高43.3%,與單獨加熱糖基化產(chǎn)物相比提高約37%。乳化活性在處理80 min時最高,比未處理蛋白提高183.17%。乳化穩(wěn)定性在40 min時改善效果最明顯,與未處理蛋白相比提高220.21%。短時間空化射流可以使蛋白質(zhì)分子內(nèi)部疏水氨基酸暴露,提高其表面疏水性。SDS-PAGE顯示空化射流促進(jìn)了蛋白質(zhì)亞基與葡萄糖發(fā)生接枝反應(yīng)。傅里葉變換紅外光譜分析證明了空化射流可以使蛋白二級結(jié)構(gòu)變得疏松,柔韌性增加,從而利于蛋白功能性的發(fā)揮。熒光光譜分析表明,空化射流處理可以使接枝物發(fā)生熒光猝滅作用且使最大熒光強度紅移,說明空化射流處理可以使蛋白三級結(jié)構(gòu)變得更加松散。