趙吉臣，王博，秦海鵬，廖栩崢，何子豪，陳?ài)蒲?，孫成波

（廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廣東 湛江 524088）

日本囊對(duì)蝦（Marsupenaeus japonicus）隸屬甲殼綱（Crustacea），十足目（Decapoda），對(duì)蝦科（Penaeidae），囊對(duì)蝦屬（Marsupenaeus）[1]，俗稱(chēng)花蝦、車(chē)蝦，廣泛分布于澳大利亞、紅海、坦桑尼亞、印度、菲律賓、朝鮮、日本及中國(guó)海域[2]。其色澤靚麗，肉質(zhì)鮮嫩，營(yíng)養(yǎng)豐富，耐干露，適合長(zhǎng)距離運(yùn)輸，以活蝦出售，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、經(jīng)濟(jì)價(jià)值與社會(huì)價(jià)值。據(jù)2019中國(guó)漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒統(tǒng)計(jì)，日本囊對(duì)蝦為中國(guó)第四大對(duì)蝦養(yǎng)品種，2018年年產(chǎn)量為55 228 t，較2017年產(chǎn)量增加2 762 t，增幅為5.26%[3]。

然而，日本囊對(duì)蝦生長(zhǎng)緩慢，養(yǎng)殖周期長(zhǎng)，一般需要養(yǎng)殖150 d以上。相對(duì)較長(zhǎng)的養(yǎng)殖周期，增加了養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)，影響了經(jīng)濟(jì)效益，限制了日本囊對(duì)蝦產(chǎn)業(yè)的長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展。然而，現(xiàn)階段缺乏對(duì)日本囊對(duì)蝦生長(zhǎng)相關(guān)方面系統(tǒng)研究，而影響對(duì)蝦生長(zhǎng)的因素卻是多方面的，不僅受自身遺傳背景的影響，還受其他外界因素的影響[4]。其中，飼料投喂策略，是影響對(duì)蝦生長(zhǎng)的重要因素之一[5]。制定合適的投喂策略，不僅可以滿足對(duì)蝦對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求，還可以提高飼料的利用率，降低剩餌對(duì)水質(zhì)的影響[6]。

日本囊對(duì)蝦具有很強(qiáng)的晝伏夜出習(xí)性，白天通常喜歡潛伏在沙中，活動(dòng)比較少，而夜晚則從沙中爬出來(lái)，外出去覓食[1]。因此，認(rèn)為日本囊對(duì)蝦主要攝食時(shí)間為夜晚，在生產(chǎn)中根據(jù)這一習(xí)性，通常將投料時(shí)間選擇在傍晚或晚上進(jìn)行。然而，投喂日本囊對(duì)蝦的最佳時(shí)間，尚未達(dá)成共識(shí)。在不同地區(qū)、不同季節(jié)，在養(yǎng)殖過(guò)程中，有多種投喂策略，有的投喂1 次，在 9：00 投喂[7]；有的選擇投喂 2 次，在 5：00 和17：00[8-9]，或者 6：00 和 18：00[10]，亦或 8：00（20%投喂量）和 17：00（80%投喂量）[11]；有的選擇投喂 3次，在 18：00、21：00 和 0：00[12]，或者 6：00、12：00 和 18：00[13]；還有的則選擇投喂 4 次，時(shí)間為 5：00、11：00、17：00和23：00[14]。上述這些投喂時(shí)間點(diǎn)的選擇，多是依據(jù)生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，缺乏直接的試驗(yàn)數(shù)據(jù)支撐，尤其是對(duì)蝦自身生理指標(biāo)的數(shù)據(jù)支撐。消化酶活性和免疫酶活性，可以作為生理指標(biāo)反映甲殼動(dòng)物的活力狀態(tài)[10]。α-淀粉酶（α-Amylase，AMS）、脂肪酶（Lipase，LPS）和胰蛋白酶（Trypsin，TRS）等消化酶活性，是反映動(dòng)物消化能力的重要生理指標(biāo)[15，16]；而超氧化物歧化酶（Total Superoxide Dismutase，T-SOD）、溶菌酶（Lysozyme，LZM）和過(guò)氧化氫酶（Catalase,CAT）等免疫酶活性，是反映動(dòng)物免疫能力重要生理指標(biāo)[10，17]。因此，從日本囊對(duì)蝦自身去研究1 d內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)生理指標(biāo)變化，有助于了解對(duì)蝦1 d內(nèi)的活力狀態(tài)，以及潛在的攝食需求，從而確定日本囊對(duì)蝦最佳投喂策略。

高位池養(yǎng)殖日本囊對(duì)蝦，在整個(gè)日本囊對(duì)蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)中占有很大比重，然而投喂時(shí)間也多是依據(jù)經(jīng)驗(yàn)，缺乏相關(guān)研究。該試驗(yàn)，以高位池養(yǎng)殖日本囊對(duì)蝦為研究對(duì)象，對(duì)日本囊對(duì)蝦肝胰腺3種消化酶（AMS、LPS和 TRS）和3種免疫酶（LZM、CAT和 T-SOD）1 d 內(nèi) 4 個(gè)時(shí)間點(diǎn)（18：00，0：00，6：00 和 12：00）的酶活性進(jìn)行監(jiān)測(cè)，分析其晝夜變化規(guī)律，以期為制定高位池養(yǎng)殖日本囊對(duì)蝦投喂策略提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

試驗(yàn)于2019年10月，在廣東海洋大學(xué)東海島海洋生物研究基地進(jìn)行。

1.1 試驗(yàn)材料

該試驗(yàn)所用對(duì)蝦來(lái)自實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的日本囊對(duì)蝦全同胞家系，在試驗(yàn)正式開(kāi)始前，對(duì)蝦養(yǎng)殖在水泥高位池中，全程零換水。根據(jù)對(duì)蝦攝食情況確定每天飼料投喂量，每天投喂2次，晚上18：00和0：00各投喂1次，每次投喂量為當(dāng)日總料量的50%。在正式開(kāi)始試驗(yàn)時(shí)，提前24 h，將對(duì)蝦抓到0.5 m3的桶中暫養(yǎng)，海水鹽度為30。對(duì)蝦暫養(yǎng)期間持續(xù)充氣，停止投喂飼料，暫養(yǎng)24 h后進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 生理指標(biāo)監(jiān)測(cè) 監(jiān)測(cè)的生理指標(biāo)為6種酶，包括3種消化酶和3種免疫酶。其中，3種消化酶分別為 α-淀粉酶（AMS）、脂肪酶（LPS）和胰蛋白酶（TRS）；3種免疫酶分別為溶菌酶（LZM）、過(guò)氧化氫酶（CAT）和總超氧化物歧化酶（T-SOD）。試驗(yàn)所用酶活性測(cè)試試劑盒，均購(gòu)自上海將來(lái)實(shí)業(yè)股份有限公司，根據(jù)相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)，對(duì)6種酶進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2 取樣時(shí)間和組織 結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，在24 h內(nèi)確立4個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)，取樣時(shí)間依次為18：00，0：00，6：00和12：00。所取對(duì)蝦組織為肝胰腺，每次取樣用12尾蝦，共4個(gè)平行，每3尾蝦的肝胰腺組織混合在一起，作為1個(gè)樣品，為1個(gè)平行。每尾蝦在取樣前都測(cè)量體質(zhì)量，去除其中規(guī)格過(guò)大或過(guò)小的對(duì)蝦，避免因規(guī)格不同引起的差異，每組蝦的體質(zhì)量見(jiàn)表1。取樣時(shí)記錄不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)應(yīng)的水溫，見(jiàn)表2。

表1 不同時(shí)間點(diǎn)日本囊對(duì)蝦體質(zhì)量

表2 不同時(shí)間點(diǎn)水溫變化

1.2.3 數(shù)據(jù)分析 根據(jù)SPSS Statistics 19軟件對(duì)所得結(jié)果和數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA），組間兩兩比較采用最小顯著法（LSD），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義為（P＜0.05）。

圖1 不同時(shí)間點(diǎn)α-淀粉酶(AMS)活性

2 結(jié)果和分析

2.1 不同時(shí)間點(diǎn)α-淀粉酶（AMS）活性分析

在肝胰腺中，AMS活性在不同時(shí)間點(diǎn)不同，變化范圍為767.17～2093.95 U/gprot。其晝夜變化規(guī)律為，在18：00酶活性最低，在0：00酶活性最高，隨后在6：00降低，在12：00酶活性繼續(xù)降低，保持在相對(duì)較低的水平。AMS在0：00的活性，與其他時(shí)間點(diǎn)酶活性差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（具體見(jiàn)圖1）。

2.2 不同時(shí)間點(diǎn)脂肪酶（LPS）活性分析

在肝胰腺中，LPS活性在不同時(shí)間點(diǎn)不同，其晝夜變化規(guī)律與AMS變化規(guī)律相同，變化范圍為2 515.81～5 365.06 U/mgprot。LPS在 0：00的活性，與其他時(shí)間點(diǎn)酶活性具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異（P＜0.05）（具體見(jiàn)圖 2）。

圖2 不同時(shí)間點(diǎn)脂肪酶（LPS）活性

2.3 不同時(shí)間點(diǎn)胰蛋白酶（TRS）活性分析

在肝胰腺中，TRS活性在不同時(shí)間點(diǎn)不同，其晝夜變化規(guī)律與AMS、LPS變化規(guī)律相同，變化范圍為 6 028.94～11 699.94 U/gprot。TRS在 0：00 的活性，與12：00和18：00酶活性具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異（P＜0.05）（具體見(jiàn)圖 3）。

圖3 不同時(shí)間點(diǎn)胰蛋白酶（TRS）活性

2.4 不同時(shí)間點(diǎn)溶菌酶（LZM）活性分析

在肝胰腺中，LZM活性在不同時(shí)間點(diǎn)不同，其晝夜變化規(guī)律與上述3種消化酶變化規(guī)律相同，變化范圍為 36.34～56.80 U/mgprot。LZM 在 0：00的活性，與其他時(shí)間點(diǎn)酶活性具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異（P＜0.05），具體不同時(shí)間點(diǎn)溶菌酶（LZM）活性見(jiàn)圖4。

圖4 不同時(shí)間點(diǎn)溶菌酶（LZM）活性

2.5 不同時(shí)間點(diǎn)過(guò)氧化氫酶（CAT）活性分析

在肝胰腺中，CAT活性在不同時(shí)間點(diǎn)不同，其晝夜變化規(guī)律與上述4種酶變化規(guī)律相同，變化范圍為312.77～612.13 U/mgprot。CAT四個(gè)時(shí)間點(diǎn)的酶活性，兩兩之間都具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異（P＜0.05），具體不同時(shí)間點(diǎn)過(guò)氧化氫酶（CAT）活性見(jiàn)圖5。

圖5 不同時(shí)間點(diǎn)過(guò)氧化氫酶（CAT）活性

2.6 不同時(shí)間點(diǎn)總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性分析

在肝胰腺中，T-SOD活性在不同時(shí)間點(diǎn)不同，其晝夜變化規(guī)律與上述5種酶變化規(guī)律相同，變化范圍為 1 744.38～2 455.94 U/mgprot。T-SOD 在 0：00的活性，與其他時(shí)間點(diǎn)酶活性具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異（P＜0.05），具體不同時(shí)間點(diǎn)總超氧化物歧化酶（TSOD）活性見(jiàn)圖6。

圖6 不同時(shí)間點(diǎn)總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性

3 討論

飼料投喂策略，是影響日本囊對(duì)蝦生長(zhǎng)的重要因素之一，制定合適的投喂策略，不僅可以滿足對(duì)蝦對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求，還可以提高飼料的利用率，降低殘餌對(duì)水質(zhì)的影響，進(jìn)而降低養(yǎng)殖成本。而現(xiàn)階段缺乏高位池養(yǎng)殖日本囊對(duì)蝦投喂策略的相關(guān)研究，該文基于日本囊對(duì)蝦自身生理指標(biāo)，對(duì)其投喂策略開(kāi)展研究。

α-淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶等3種消化酶，是反應(yīng)對(duì)蝦攝消化能力的重要指標(biāo)[15，16，18]。監(jiān)測(cè)對(duì)蝦一天中不同時(shí)間點(diǎn)消化酶活性，有助于了解對(duì)蝦不同時(shí)間點(diǎn)潛在的攝食需求。該文通過(guò)對(duì)日本囊對(duì)蝦肝胰腺不同時(shí)間點(diǎn)3種消化酶酶活性監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)3種消化酶活性在 0：00 相比 18：00、6：00 和 12:00 都要高。這種現(xiàn)象可能與光照強(qiáng)度相關(guān)，在秋冬季節(jié)的廣東地區(qū)，18：00太陽(yáng)還沒(méi)有完全落下，6：00太陽(yáng)即將升起，相比之下0：00是最黑暗的時(shí)刻，而日本囊對(duì)蝦具有極強(qiáng)的晝伏夜出的習(xí)性，在最黑暗的時(shí)刻日本囊對(duì)蝦行為可能是最活躍的，覓食也最積極[1]。在0：00時(shí)，3種消化酶活性最高，是對(duì)蝦行為活躍的內(nèi)在表現(xiàn)，暗示著在這個(gè)時(shí)間點(diǎn)，可能是日本囊對(duì)蝦潛在攝食需求最旺盛的時(shí)刻。因此，0：00左右可能是日本囊對(duì)蝦最佳的投喂時(shí)間。不同的時(shí)間點(diǎn)消化酶活性存在差異，暗示著不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)蝦潛在的攝食需求是有差異的[11，19]。在生產(chǎn)中可以結(jié)合這些消化酶活性數(shù)據(jù)，調(diào)整在不同時(shí)間點(diǎn)投喂飼料的比例。

溶菌酶、過(guò)氧化氫酶和總超氧化物歧化酶是3種與免疫相關(guān)的酶，而免疫酶活性的高低是對(duì)蝦活力的一種內(nèi)在表現(xiàn)[20-21]。研究表明，免疫力較強(qiáng)的對(duì)蝦，往往也有著較高的消化能力，生長(zhǎng)相對(duì)迅速[22]。對(duì)日本囊對(duì)蝦肝胰腺一天內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)3種免疫相關(guān)酶活性進(jìn)行監(jiān)測(cè)，其變化規(guī)律與3種消化酶是一致的，這些數(shù)據(jù)也證實(shí)免疫酶與消化酶可能具有一定關(guān)聯(lián)性。3種免疫酶活性都在0：00時(shí)最高，并且每種酶活性在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)不同，從側(cè)面證實(shí)在0：00左右可能是投喂日本囊對(duì)蝦最佳時(shí)間，在不同時(shí)間點(diǎn)按比例投喂飼料比較合理。

4 結(jié)論

該研究表明，0：00時(shí)左右可能是高位池養(yǎng)殖日本囊對(duì)蝦最佳的投喂時(shí)間，在不同時(shí)間點(diǎn)按一定比例投喂飼料比較合理。本研究為精準(zhǔn)制定高位池養(yǎng)殖日本囊對(duì)蝦投喂策略，提供了理論依據(jù)。