李康平 張書喬

【摘 要】Lynch綜合征是一類表現(xiàn)為DNA錯(cuò)配修復(fù)基因突變的遺傳性非息肉病性結(jié)直腸癌，DNA錯(cuò)配修復(fù)基因突變是Lynch綜合征遺傳學(xué)的基礎(chǔ)。本文通過回顧近年來相關(guān)文獻(xiàn)，對二代測序技術(shù)應(yīng)用在結(jié)直腸癌特別是Lynch綜合征中的基因診斷展開綜述。

【關(guān)鍵詞】Lynch綜合征;MMR基因;二代測序技術(shù)

【中圖分類號(hào)】R969.4【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1672-3783（2020）08-24--02

Lynch綜合征（Lynchsyndrome，LS）與DNA錯(cuò)配修復(fù)基因（Mismatchrepair，MMR）突變密切相關(guān)。近幾年隨著MMR和微衛(wèi)星不穩(wěn)定檢測的出現(xiàn)，使LS患者診斷有了較為準(zhǔn)確的方法。但僅依靠上述檢測與臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)很難完全囊括全部LS患者。確診的患者中有一部分無MMR基因突變。二代測序技術(shù)（next-generationsequencing，NGS）的出現(xiàn)，使得LS等遺傳異質(zhì)性疾病的診斷更加容易。NGS不僅增加了測序量，且提高了突變檢出的靈敏度。在癌癥與遺傳病性相關(guān)疾病的早期篩查及確診領(lǐng)域都發(fā)揮了重要的作用，是如今臨床診療領(lǐng)域最有應(yīng)用前景的技術(shù)之一。隨著NGS技術(shù)的不斷發(fā)展完善，一定會(huì)改變?nèi)祟悓τ谀[瘤發(fā)生與轉(zhuǎn)變進(jìn)程的了解，也注定成為未來腫瘤診療跟預(yù)后的基礎(chǔ)。

一 MMR基因突變

有學(xué)者[1]對數(shù)位LS患者樣本進(jìn)行測序后發(fā)現(xiàn)的大約400種MMR基因突變，50%是MSH2基因突變。MSH2基因中有一種定位于第7號(hào)外顯子的異常胚系突變，它能使該基因下游提前停止編碼。另外，對疑似有MSH2基因突變的LS患者在運(yùn)用體外擴(kuò)增特異DNA片斷率搜尋MSH2基因中潛在的重組突變庫，由此檢測該基因的轉(zhuǎn)位點(diǎn)，具有重要意義[2]。蔣帆[3]等人通過對Insight數(shù)據(jù)庫分析后得出進(jìn)行臨床檢測和診斷時(shí)，需著重檢測MSH6、PMS2、MLH3這三個(gè)基因位點(diǎn)和外顯子，例如MSH6的5號(hào)外顯子和MLH3中的突變位點(diǎn)c.691A>C，c.2896T>C和c.2825C>T。因?yàn)檫@三個(gè)基因各自均有高頻的突變位點(diǎn)與外顯子。對于很多攜帶MSH6基因的LS患者都曾患過不止一次LS相關(guān)腫瘤，平均發(fā)病年齡較普通的LS患者來說也要滯后。

二 其他相關(guān)基因突變

有研究顯示BRAFV600E基因突變與散發(fā)性微衛(wèi)星不穩(wěn)定的結(jié)直腸癌相關(guān)，珠珠[4]利用NGS技術(shù)在107例LS患者中檢測到了3例MLH1基因表達(dá)缺失的患者存在BRAFV600E突變。Tan等人[5]在174例LS患者樣本中進(jìn)行NGS發(fā)現(xiàn)共發(fā)現(xiàn)了4個(gè)新發(fā)突變位點(diǎn)。有6例具有強(qiáng)癌癥風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體在不存在MMR基因突變的情況下具有復(fù)發(fā)的新型KIT：c.2836C>T無義突變和ERCC4：c.2169C>a無義突變，這很可能具有臨床意義。AXIN2基因能夠控制β-連環(huán)蛋白表達(dá)。而85%的散發(fā)和遺傳性結(jié)直腸癌是由APC基因和β-連環(huán)蛋白基因突變引起的Wnt通路異常激活導(dǎo)致的，且在LS樣本中發(fā)現(xiàn)Wnt通路的β-連環(huán)蛋白、E-cad、TCF-4、PTEN的表達(dá)異常[6]。研究人員證實(shí)了結(jié)直腸癌中AXIN2基因表達(dá)顯著升高。而Rohlin等人[7]利用NGS找到了AXIN2基因突變與結(jié)直腸癌發(fā)生相關(guān)證據(jù)。報(bào)告的105例結(jié)直腸癌患者中發(fā)現(xiàn)了11個(gè)移碼突變。綜上AXIN2基因突變與結(jié)直腸癌發(fā)生相關(guān)。

三 小結(jié)：

如今隨著NGS技術(shù)的逐漸普及，測序所花時(shí)間及成本也相較以前大幅降低。該技術(shù)漸漸展現(xiàn)了其在基因診斷層面確診LS的優(yōu)勢，但受限于測序與分析數(shù)據(jù)本身所花費(fèi)的時(shí)間還比較長，基因樣本庫也不夠完善，想要完全取代MMR基因檢測還有一段路要走，盡管有種種限制NGS技術(shù)依然揭示了Lynch綜合征潛在致病基因的一系列新突變位點(diǎn)，為研究人員呈現(xiàn)了一連串候選易感基因及位點(diǎn)，在完善了其基因數(shù)據(jù)庫信息的同時(shí)，也為今后研發(fā)定制具有針對性的高通量LS診斷檢測基因芯片提供了理論依據(jù)。依托于NGS技術(shù)的種種優(yōu)點(diǎn)，臨床上運(yùn)用NGS檢測LS相關(guān)腫瘤致病基因及突變位點(diǎn)的新時(shí)代已到來。

參考文獻(xiàn)

李鐵鋼， 劉小平， 鄭多， et al. 一個(gè)遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌大家系調(diào)查及種系突變研究 [J]. 中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志 2007， 24（2）：227-229.

Rhees J， Arnold M， Boland CR. Inversion of exons 1-7 of the MSH2 gene is a frequent cause of unexplained Lynch syndrome in one local population [J]. Fam Cancer 2014， 13（2）：219-225.

蔣帆. 中國人遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌（HNPCC）大片段異常檢測與基因數(shù)據(jù)分析 [碩士]： 復(fù)旦大學(xué); 2014.

珠珠. 云南省Lynch綜合征候選基因標(biāo)志物研究 [博士]： 昆明醫(yī)科大學(xué); 2014.

Ow SGW， Tan KT， Yang H， et al. Next Generation Sequencing Reveals Novel Mutations in Mismatch Repair Genes and Other Cancer Predisposition Genes in Asian Patients with Suspected Lynch Syndrome [J]. Clin Colorectal Cancer 2019.

Lin YU， Wu T， Yao Q， et al. LGR5 promotes the proliferation of colorectal cancer cells via the Wnt/beta-catenin signaling pathway [J]. Oncol Lett 2015， 9（6）：2859-2863.

Rohlin A， Rambech E， Kvist A， et al. Expanding the genotype-phenotype spectrum in hereditary colorectal cancer by gene panel testing [J]. Fam Cancer 2017， 16（2）：195-203.