云南省藥品和醫(yī)療器械審評中心 （云南 昆明 650101）

內(nèi)容提要：體外診斷試劑作為一種常用的臨床診療醫(yī)療器械，具有準確、高效、適用范圍廣泛等諸多優(yōu)點，不僅能從分子水平對疾病作定性判斷，更能對人體樣本中的核酸、蛋白質(zhì)、多肽、無機鹽等物質(zhì)作定量分析，為臨床醫(yī)生分析疾病病程或生理過程提供了重要參考。文章從誤差的角度對目前常用的幾種統(tǒng)計分析方法進行探討，為擬注冊的定量檢測體外診斷試劑臨床一致性評價提供參考。

為確保體外診斷試劑的檢測結(jié)果能滿足臨床需求，按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》的要求，體外診斷試劑的注冊人或申請人應當對體外診斷試劑進行臨床評價。對于免于進行臨床試驗的體外診斷試劑，原食品藥品監(jiān)督管理總局于2017年發(fā)布的《免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》中明確，企業(yè)應采取與已上市的、市場普遍認為質(zhì)量可靠的產(chǎn)品進行對比，并根據(jù)產(chǎn)品的特點選擇適合的統(tǒng)計分析方法評價二者的一致性，進而對產(chǎn)品的安全性，特別是有效性進行評價。因此，在臨床樣本選擇合理、操作正確的基礎上，選擇科學的數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方法尤為重要。但現(xiàn)有法規(guī)及各體外診斷試劑技術審查指導原則中，并未對臨床評價試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方法作指導。因而部分企業(yè)在臨床數(shù)據(jù)一致性評價過程中，盲目選擇統(tǒng)計分析方法，導致一致性分析有偏差甚至得到錯誤結(jié)論。本文從分析誤差的角度，對目前常用的幾種統(tǒng)計分析方法進行探討，為考核試劑和參比試劑的臨床一致性評價提供參考。

1.常用統(tǒng)計分析方法

無論統(tǒng)計分析方法如何，樣本的檢測結(jié)果值為樣本真實值、系統(tǒng)誤差和隨機誤差的總和。同一樣本下，考核試劑的檢測結(jié)果記為M，參比試劑的檢測結(jié)果記為N。

1.1 線性相關分析

線性相關分析需要將成對出現(xiàn)的數(shù)據(jù)在直角坐標系中繪制成散點圖（見圖1）。

在體外診斷試劑檢測實踐中，M和N的變化方向總是一致的，即0＜r≤1。r越接近1，二者檢查結(jié)果線性關系越密切。但M和N變化方向一致且線性關系切密切并不代表兩試劑檢測結(jié)果一致。由線性擬合的原理可知，散點間線性關系的好壞，主要是受樣本中離群值的影響。因而，線性相關分析實際上是分析樣本間的變異，研究的是M和N之間的“依賴”關系。若在兩檢測試劑之間總是存在線性關系的偏倚，則通過線性相關分析依然會得到r＞0.95的錯誤結(jié)果[1]。線性相關分析在分析過程中僅關注隨機誤差的影響而忽略了系統(tǒng)誤差的影響。錯誤判斷二者檢測結(jié)果一致。

圖1.線性相關分析散點圖示

圖2.B-A分析散點圖示意圖

1.2 配對t檢驗

配對t檢驗需要先計算M和N的差值d的均數(shù)。假設考核試劑和參比試劑的檢測無差異，則理論上d的總體均數(shù)μd應為0。所以，實際上t檢驗是樣本均數(shù)和均數(shù)為0的總體進行比較。通過公式（其中Sd為差值d的標準差）

計算t值，確定P值后，判斷兩試劑的檢測結(jié)果是否具有統(tǒng)計學意義。

配對t檢驗是檢驗兩試劑的檢測結(jié)果的差值是否為0，僅關注兩試劑系統(tǒng)誤差的影響而忽略了隨機誤差[2]。當考核試劑總是與參比試劑存在上下浮動的隨機差值時，若其平均差值接近0，配對t檢驗會錯誤地認為兩試劑檢測結(jié)果一致。

1.3 Bland-Altman分析

Bland-Altman分析（以下簡稱B-A分析）由Bland JM和AltmanDG于1986年提出[3]。近年來在美國成為了臨床定量檢測方法一致性評價的主流統(tǒng)計分析方法[4]。該方法也是基于散點圖進行數(shù)據(jù)分析，但與線性相關分析不同，B-A分析散點圖的橫坐標為兩試劑檢測結(jié)果的均值，縱坐標為兩試劑檢測結(jié)果的差值（如圖2所示）。計算差值均數(shù)及其95%的一致性界限LOA（-1.96Sd，+1.96Sd）。考慮到抽樣誤差，需要計算LOA上下限的95%置信區(qū)間，近似的等于LOA±1.71SE（Sd），其中標準誤。

表1.臨床數(shù)據(jù)一致性評價常用統(tǒng)計分析方法對比

通過B-A分析圖，可以直觀地判斷兩檢測試劑的一致性?？梢越频卣J為，與0的距離即為兩試劑的系統(tǒng)誤差；LOA上下限的95%置信區(qū)間即為兩試劑的隨機誤差。越小，兩試劑的系統(tǒng)誤差越小；LOA上下限的95%置信區(qū)間越窄，兩試劑的隨機誤差越小；散點越集中，LOA范圍越窄，兩試劑的一致性越好。同時，圖中也能直觀地觀測到樣本中的離群值，一般認為當極端樣本例數(shù)不超過總樣本數(shù)的5%時，兩試劑的一致性較好。

直接運用B-A分析作定量分析時，要求兩試劑檢測數(shù)據(jù)方差具有齊性，否則不宜直接進行B-A分析[5]。采用B-A分析圖的方式可以直觀地判斷檢測數(shù)據(jù)方差齊性問題：當數(shù)據(jù)方差具有齊性時，散點在線上下均衡波動；當數(shù)據(jù)方差不具有齊性時，各點值隨橫坐標的增而增大或減小。當數(shù)據(jù)方差不具有齊性時，可對數(shù)據(jù)進行對數(shù)轉(zhuǎn)換后，再運用B-A分析進行一致性評價。

2.技術審評中常見的一致性分析問題

結(jié)合實際情況發(fā)現(xiàn)，企業(yè)在臨床數(shù)據(jù)一致性評價時常出現(xiàn)以下問題：①一致性分析不全面。單獨使用配對t檢驗或線性相關分析，對隨機誤差或系統(tǒng)誤差有遺漏。②線性相關分析僅依據(jù)r＞0.975或r2＞0.95判斷數(shù)據(jù)一致性，實際上是混淆了“變化一致”和“數(shù)據(jù)一致”的概念。③統(tǒng)計分析結(jié)果不與臨床意義相結(jié)合。

以上問題最終導致誤以為臨床試驗方案不合理、抽樣不合理，甚至得出考核試劑與參比試劑檢測結(jié)果不一致的錯誤結(jié)論。

3.討論

對比3種臨床數(shù)據(jù)一致性評價的方法，分別具有以下特點，總結(jié)見表1。

從表1可以看出，單獨使用配對t檢驗或線性相關分析，都無法全面地評價考核試劑與對比試劑之間的系統(tǒng)誤差和隨機誤差，對數(shù)據(jù)一致性的分析并不全面。但可以將二者結(jié)合，以彌補單一統(tǒng)計分析方法的缺陷[6]。

相比配對t檢驗或線性相關分析，B-A分析具有獨特的優(yōu)勢。①B-A分析同時考慮到系統(tǒng)誤差和隨機誤差；②B-A分析以圖形的方式更為直觀地展示分析結(jié)果；③雖然線性相關分析也以圖形方式展示分析結(jié)果，但B-A分析圖具有臨床意義，可以與臨床實際相結(jié)合，定性地判斷兩檢測試劑的差異在此一致性界限范圍內(nèi)是否可以接受。因此，在臨床數(shù)據(jù)一致性評價時，B-A分析效率更高，評價更全面，結(jié)果更直觀，在實際運用中更具優(yōu)勢。