岑昕貝 凌濟(jì)忠 萬(wàn)躍平 萬(wàn) 頌 華 偉 江敏耀 習(xí) 明

1 廣州市花都區(qū)花山鎮(zhèn)衛(wèi)生院外科(廣州 510880) 2 南方醫(yī)科大學(xué)花都區(qū)人民醫(yī)院泌尿外科(廣州 510800)

男性發(fā)病率最高的三種腫瘤為前列腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌，占腫瘤總體發(fā)病率的42%，僅前列腺癌發(fā)病率占總體發(fā)病率的20%，其5年生存率占98%[1]?；谖覈?guó)人口基數(shù)大，就醫(yī)意識(shí)相對(duì)較差等因素，確診為前列腺癌中晚期的患者比例高于西方國(guó)家。然而，目前前列腺癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是其死亡的重要原因，早期診斷，及時(shí)治療是提高前列腺癌療效的重要措施。因此，對(duì)前列腺癌早期診斷和治療，還有后續(xù)腫瘤進(jìn)展等工作，需要臨床醫(yī)生和科學(xué)研究者不斷去探究[2- 3]。目前對(duì)于前列腺癌的早期階段，有著幾種治療的措施，包括根治性前列腺切除術(shù)、雄激素剝奪治療等手段。盡管外科及放療技術(shù)在治療局限性前列腺癌領(lǐng)域快速進(jìn)展，但仍有高達(dá) 40%的患者在根治術(shù)后出現(xiàn)生化復(fù)發(fā)。另外對(duì)于發(fā)生轉(zhuǎn)移的病人，一線治療方案目前仍然為內(nèi)分泌治療，但經(jīng)過(guò)中位時(shí)間為 18～24 個(gè)月的內(nèi)分泌治療，幾乎所有患者都將進(jìn)展為去勢(shì)抵抗性前列腺癌。表皮生長(zhǎng)因子受體NR3C1的基因單核苷酸多態(tài)性與前列腺癌治療的耐藥性相關(guān)[4]。另有研究表明，表皮生長(zhǎng)因子家族成員CR-1過(guò)表達(dá)會(huì)導(dǎo)致前列腺癌生化復(fù)發(fā)率升高[5]。Andrea等人認(rèn)為NR3C1與砷誘導(dǎo)前列腺癌發(fā)生相關(guān)，有望作為前列腺癌的生物標(biāo)志物或治療靶點(diǎn)[6]。但是關(guān)于NR3C1與前列腺癌生化復(fù)發(fā)的關(guān)系尚無(wú)相關(guān)報(bào)道,本研究通過(guò)組織芯片染色和統(tǒng)計(jì)分析，探討NR3C1在前列腺癌進(jìn)展和預(yù)后中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

包括47例前列腺癌及28例癌旁前列腺組織，樣本收集時(shí)間為2001 —2007年，組織芯片(購(gòu)于西安艾麗娜生物科技有限公司(CatNo：PR807)，NR3C1抗體 (bs- 0252R，Bioss Co Ltd.，China)購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司[7]。

1.2 方法補(bǔ)充Taylor 數(shù)據(jù)庫(kù)的應(yīng)用

1.2.1 免疫組化方法及結(jié)果判斷

免疫組化操作按試劑盒要求，DAB顯色,蘇木素復(fù)染，按照染色陽(yáng)性比例及強(qiáng)度，用二次記分法評(píng)判，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>50%為3分，26%～50%為2分，5%～25%為1分，<5%為0分。染色強(qiáng)度：棕褐色顆粒染色為3分，深黃色或者棕黃色為2分，淡黃色為1分，不著色為0分。兩者相乘為最后結(jié)果，≥4分者為陽(yáng)性(++)，0～3分為陰性(-)。用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。免疫組化評(píng)分分別由兩位病理學(xué)家完成[8]。

1.2.2 Taylor 數(shù)據(jù)庫(kù)分析

Taylor數(shù)據(jù)庫(kù)[美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心(NCBI)高通量基因數(shù)據(jù)表達(dá)平臺(tái)(GEO)，檔案編號(hào)[GSE21032]是一個(gè)公用的數(shù)據(jù)平臺(tái),其中mRNA表達(dá)譜芯片包含帶有臨床隨訪數(shù)據(jù)的150例原發(fā)性前列腺癌及29例非癌組織。分析NR3C1表達(dá)水平與前列腺癌臨床病理特征關(guān)系。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

通過(guò)SPSS 17.0軟件分析數(shù)據(jù)，兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析免疫組化結(jié)果，Pearson卡方檢驗(yàn)分析免疫組化與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，Kaplan-Meier法估計(jì)生化復(fù)發(fā)生存率，Cox回歸模型分析生化復(fù)發(fā)與臨床病理特征的相關(guān)性。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 組織芯片免疫組化結(jié)果

前列腺癌和癌旁前列腺組織中染色強(qiáng)弱差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2.94±1.86 vs 3.36±1.31，t=4.73,P=0.296)；NR3C1在Gleason評(píng)分高的前列腺癌組織中表達(dá)低于Gleason評(píng)分低的前列腺癌組織(2.25±2.02 vs 3.44±1.58，t=5.21，P<0.05)(見(jiàn)圖1)。

圖1 NR3C1在前列腺癌組織中表達(dá)(2×)

2.2 NR3C1與前列腺癌臨床病理特征的關(guān)系

NR3C1表達(dá)與前列腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系見(jiàn)表1，Gleason評(píng)分低的前列腺癌組織中NR3C1的表達(dá)高于Gleason評(píng)分高的前列腺癌組織(3.44±1.58 vs 2.25±2.02，t=3.25,P=0.028)，這在Taylor 數(shù)據(jù)庫(kù)中也得到驗(yàn)證。另外，Taylor 數(shù)據(jù)庫(kù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，NR3C1低表達(dá)與PSA復(fù)發(fā)(P=0.028)和轉(zhuǎn)移(P=0.003)相關(guān)，提示NR3C1的表達(dá)與前列腺癌預(yù)后和轉(zhuǎn)移存在負(fù)相關(guān)。

表1 NR3C1與前列腺癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3 NR3C1的表達(dá)與前列腺癌預(yù)后的關(guān)系

以NR3C1表達(dá)量的中位數(shù)為分割點(diǎn)將前列腺癌組織分為高、低組，運(yùn)用 Kaplan meier 曲線分析Taylor數(shù)據(jù)庫(kù)中前列腺癌患者術(shù)后生化復(fù)發(fā)時(shí)間及總體生存率與NR3C1表達(dá)量之間的關(guān)系，結(jié)果顯示NR3C1低表達(dá)組患者術(shù)后生化復(fù)發(fā)生存率減少(P=0.043)(圖2A)，NR3C1高表達(dá)組和低表達(dá)組在前列腺癌總體生存率上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.872)(圖2B)。

圖2 NR3C1表達(dá)水平與前列腺癌生化復(fù)發(fā)生存率(A)及總體生存率(B)的相關(guān)性

2.4 NR3C1表達(dá)量對(duì)前列腺癌生化復(fù)發(fā)的診斷價(jià)值

通過(guò)單因素分析， NR3C1高、低表達(dá)組之間在生化復(fù)發(fā)時(shí)間上的比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(HR=0.447,95%CI0.270～0.740,P=0.002)，病理分期(HR=5.232,95%CI2.564～10.676,P<0.001)、Gleason 評(píng)分(HR=4.288,95%CI2.376～7.737，P<0.001)和是否轉(zhuǎn)移(HR=21.148,95%CI10.272～43.542,P=0.012)在生化復(fù)發(fā)時(shí)間的比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多因素分析方面，高Gleason 評(píng)分(HR=3.173,95%CI1.225～8.218,P=0.017)和轉(zhuǎn)移(HR=7.270,95%CI2.605～20.291,P<0.001)均為生化復(fù)發(fā)危險(xiǎn)因素，見(jiàn)表2。

表2 Cox風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)模型中NR3C1表達(dá)量對(duì)生化復(fù)發(fā)的診斷價(jià)值

3 討 論

雖然亞洲地區(qū)前列腺癌發(fā)病率遠(yuǎn)低于歐洲和北美等國(guó)，但近年中國(guó)前列腺癌患者的發(fā)病率和死亡率不斷上升，而且發(fā)病率上升速度更快[9]。近年來(lái)，PSA的常規(guī)臨床應(yīng)用已經(jīng)產(chǎn)生了很好的效果，其對(duì)前列腺癌的早期診斷有很大幫助[10]。但是前列腺癌是一個(gè)臨床異質(zhì)性的癌癥，存在很大的個(gè)體差異，尤其涉及到腫瘤早期診斷和后期腫瘤進(jìn)展、腫瘤轉(zhuǎn)移和激素抵抗性等階段的診斷和治療[11]。因此需要結(jié)合更多更深入的臨床和基礎(chǔ)研究、更多大樣本和前瞻性的研究來(lái)探索可靠的診療途徑。

NR3C1基因編碼糖皮質(zhì)激素受體，作為一種轉(zhuǎn)錄因子，在細(xì)胞內(nèi)參與糖皮質(zhì)激素應(yīng)答基因的啟動(dòng)子特異性結(jié)合，促進(jìn)糖皮質(zhì)激素應(yīng)答基因的轉(zhuǎn)錄，此外還有調(diào)節(jié)其它轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)，參與細(xì)胞炎癥反應(yīng)、增殖和分化的功能[12]。Haitao Chen等研究發(fā)現(xiàn)NR3C1等基因組區(qū)域富集了PCa風(fēng)險(xiǎn)SNP塊。這些結(jié)果提示，這些TFs中的信號(hào)通路可能在PCa的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要作用[13]。糖皮質(zhì)激素介導(dǎo)的GR信號(hào)在血液惡性腫瘤以及乳腺、前列腺等實(shí)體瘤的生長(zhǎng)過(guò)程中，分別與ER和AR相互作用，其功能作用已被廣泛研究[14]。Leonardi DB等證明了GR在前列腺癌中的重要性，NR3C1與HMOX1同時(shí)高表達(dá)的患者無(wú)病生存時(shí)間比低表達(dá)患者短，而兩個(gè)基因單獨(dú)高表達(dá)對(duì)生化復(fù)發(fā)影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[15]。然而，NR3C1在前列腺癌中的作用機(jī)制和進(jìn)展預(yù)后的關(guān)系如何，尚未有進(jìn)一步報(bào)道。

本研究通過(guò)組織芯片免疫組化染色，檢測(cè)NR3C1在Gleason評(píng)分低的前列腺癌組織中表達(dá)顯著高于Gleason評(píng)分高的前列腺癌組織，初步判斷NR3C1參與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展，可能起到抑癌的作用。結(jié)合Taylor公用數(shù)據(jù)庫(kù)分析，結(jié)果和我們的組織芯片結(jié)果吻合，Taylor 數(shù)據(jù)庫(kù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果還顯示，NR3C1表達(dá)量與PSA復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示NR3C1的表達(dá)與前列腺癌預(yù)后和轉(zhuǎn)移存在負(fù)相關(guān)。Kaplan meier 曲線分析Taylor數(shù)據(jù)庫(kù)中前列腺癌患者術(shù)后生化復(fù)發(fā)時(shí)間及總體生存率與NR3C1表達(dá)量之間的關(guān)系，結(jié)果顯示NR3C1低表達(dá)組患者術(shù)后生化復(fù)發(fā)生存率減少,說(shuō)明低表達(dá)組出現(xiàn)生化復(fù)發(fā)時(shí)間比高表達(dá)組更早。單因素分析結(jié)果顯示 NR3C1高、低表達(dá)組之間在生化復(fù)發(fā)時(shí)間上的比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，病理分期、Gleason 評(píng)分和是否轉(zhuǎn)移在生化復(fù)發(fā)時(shí)間的比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多因素分析方面，高Gleason 評(píng)分和轉(zhuǎn)移均為生化復(fù)發(fā)危險(xiǎn)因素。說(shuō)明NR3C1是前列腺癌生化復(fù)發(fā)的影響因素，跟患者預(yù)后存在緊密聯(lián)系。所以，NR3C1可作為評(píng)價(jià)前列腺癌預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。

綜上所述，NR3C1作為一個(gè)抑癌基因，影響著前列腺癌的生化復(fù)發(fā)，與現(xiàn)有的臨床指標(biāo)結(jié)合能更有效預(yù)測(cè)前列腺癌的預(yù)后，這對(duì)于臨床上早期診斷以及判斷疾病的發(fā)展和轉(zhuǎn)歸等方面起著重要的作用。