陳小林

（上海旭東海普藥業(yè)有限公司，上海201203）

氯化琥珀膽堿為去極化型肌松劑，能與骨骼肌N2 膽堿受體結(jié)合，產(chǎn)生去極化狀態(tài)，使骨骼肌松弛,常用于全身麻醉時(shí)氣管插管和術(shù)中維持肌松。此藥物于1958 年首次發(fā)現(xiàn)，其合成工藝為：二（2- 氯乙醇基）琥珀酸為起始物料，以苯為溶劑，與三甲胺反應(yīng)，總摩爾收率為46%，但因?yàn)槿装窞闅怏w，工業(yè)上很難實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化[1]；經(jīng)過(guò)半個(gè)多世紀(jì)的發(fā)展，其合成路線越來(lái)越多，但早期的工藝路線經(jīng)常用到苯、氯仿等毒性強(qiáng)溶劑，有的路線中用到五氯化磷做酰氯化劑，這些高污染的物料已經(jīng)不適宜現(xiàn)代綠色化工的理念，隨著化工環(huán)保的要求提升，急需找到一條綠色環(huán)保的合成路線；另外近年隨著藥品一致性評(píng)價(jià)工作的開(kāi)展，中國(guó)的仿制藥需與原研藥達(dá)到等效，為了達(dá)成此目的，首要任務(wù)是提高原料藥的質(zhì)量，只有原料藥優(yōu)于原研制劑，制劑才有可能與原研等效[2-6]。在此背景下，作者以丁二酸為起始原料經(jīng)過(guò)二氯亞砜酰氯化，氯化膽堿酯化和二甲亞砜及無(wú)水乙醇二次精制等工藝步驟，得到高質(zhì)量的原料藥，以滿足仿制藥一致性評(píng)價(jià)中原料藥的要求，通過(guò)優(yōu)化各步工藝，革除了毒性強(qiáng)的溶劑及試劑，具體反應(yīng)路線如下圖1 所示：

圖1 氯化琥珀膽堿合成工藝反應(yīng)線路示意圖

1 試驗(yàn)

1.1 試劑與儀器

上述合成路線中用到的試劑及儀器如下表1 所示：

1.1.1 起始物料

1.1.2 溶劑

1.1.3 主要儀器設(shè)備及型號(hào)

天平（Sartorious/BSA4202S-CW）真空烘箱（上海禾氣玻璃儀器有限公司/DZF-6020）帶加熱磁力攪拌器（上海禾氣玻璃儀器有限公司/DF-101S）隔膜真空泵（上海禾氣玻璃儀器有限公司/M22CHT）

高壓液相儀（water/e2695-2998PDA）

液質(zhì)聯(lián)用儀（Q-Tofmicro/Q-Tofmicro）

核磁共振波譜儀（BRUKER/BRUKER-400）

1.2 合成方法

1.2.1 丁二酰氯（中間體II）的合成

在2000ml 的三口瓶中加入丁二酸（100g），依次加入甲苯（500ml），DMF(5ml)；氮?dú)獗Ｗo(hù)下升溫至內(nèi)溫T=50-60℃下,緩慢滴加二氯亞砜（300g），此時(shí)有大量氯化氫氣體產(chǎn)生，注意氣體的安全導(dǎo)出及氣體充分吸收（防止泄露到空氣中造成污染），2h 內(nèi)滴畢，升溫至T=80-90℃，繼續(xù)反應(yīng)6h，降溫轉(zhuǎn)移至單口瓶于T≤55℃下減壓蒸餾得深褐色液體，液體無(wú)需進(jìn)一步精制直接用于下一步，此步收率按100%計(jì)算。

1.2.2 氯化琥珀膽堿粗品（IV）的合成

在干燥的三口瓶（3L）中依次加入氯化膽堿（200g，氯化膽堿水分需預(yù)先用甲苯處理使其水分≤1.0%）、二氯甲烷（1.5L），氮?dú)庵脫Q保護(hù)后滴加中間體II 的二氯甲烷溶液；在T≤30℃下滴加，反應(yīng)有放熱現(xiàn)象，注意滴加速度，滴畢，升溫至T=35-40℃下回流16h，轉(zhuǎn)移至單口瓶中，減壓蒸餾出二氯甲烷后加無(wú)水乙醇（1L），攪拌溶清，降溫至T≤10℃下滴加三乙胺，調(diào)節(jié)反應(yīng)體系至PH=3-4 左右，加入水（150ml），繼續(xù)降溫至T=0±5℃，攪拌析晶16h 后，過(guò)濾，濾餅在50℃下真空干燥，得粗品206g，摩爾收率：61.2%。

1.2.3 成品的精制

1.2.3.1 DMSO 重結(jié)晶

在干燥好的單口瓶（2L）中加入上述粗品，加入DMSO(1L),升溫至T=80-100℃，繼續(xù)攪拌至固體溶清，保溫1h；趁熱過(guò)濾，降溫至T=10-20℃下析晶2h，過(guò)濾，濾餅用無(wú)水乙醇（300ml）淋洗，得一精物，一精物無(wú)需干燥直接進(jìn)行下一步（收率按干燥失重計(jì)）。

1.2.3.2 乙醇重結(jié)晶

將上述一精物加入到干燥好的單口瓶（2L）中，加入無(wú)水乙醇1200ml，升溫回流至溶液澄清，趁熱過(guò)濾，濾液緩慢降溫至0±5℃，析晶4h 后過(guò)濾，濾餅用無(wú)水乙醇（200ml）淋洗后在50℃下真空干燥得成品（156.5g），兩步總摩爾收率：76%，HPLC純度（外標(biāo)法）：99.86%[7-10]。M.p.159.0-159.5 ℃(藥典：157-163）；MS ESI+=145 (M+1）/2；1H-NMR(400MHZ,DMSO)δ:2.662(s，4H),3.178(s，18H),3.727-3.751(m，4H),4.483(s，4H)。

2 結(jié)果與討論

2.1 丁二酰氯（中間體II）的工藝優(yōu)化

?；磻?yīng)主要通過(guò)酰氯甲酯化，通過(guò)HPLC 純度（面積歸一法）來(lái)評(píng)價(jià)工藝參數(shù)。這步中主要優(yōu)化參數(shù)如下：

?；軇┖Y選（甲苯、二氯甲烷、四氫呋喃）、溶劑體積篩選（3V、5V、10V）、二氯亞砜用量篩選（質(zhì)量比：2eq、3eq、5eq）、反應(yīng)時(shí)間（2h、6h、16h）、反應(yīng)溫度篩選（55±5℃、65±5℃、85±5℃）。確定此步最佳工藝為：以5V 甲苯做反應(yīng)溶劑，二氯亞砜滴加量為丁二酸的3 倍量（質(zhì)量比），反應(yīng)溫度為85±5℃，反應(yīng)時(shí)間為6h，此步反應(yīng)收率按理論計(jì)。

2.2 酯化反應(yīng)條件的優(yōu)化

酯化反應(yīng)主要通過(guò)粗品的含量和收率來(lái)評(píng)價(jià)工藝參數(shù)。這步主要優(yōu)化參數(shù)如下：

酯化溶劑篩選（甲苯、二氯甲烷、乙腈、丙酮）、反應(yīng)溫度（20℃、30℃、40℃）、氯化膽堿摩爾當(dāng)量（2eq、2.5eq、3eq）、調(diào)堿溶劑的篩選（無(wú)機(jī)堿：氫氧化鈉水溶液（30%）、碳酸氫鈉（飽和水溶液）、碳酸鉀飽和溶液、氨水（濃）；有機(jī)堿（吡啶、三乙胺、N，N-二異丙基乙胺（DIPEA））、調(diào)堿pH 值篩選（1-2、3-4、5-6）、調(diào)堿溫度的篩選（0±5℃、10±5℃、20±5℃）、析晶時(shí)間篩選（4h、8h、16h）。

確定此步最佳工藝為：以二氯甲烷為反應(yīng)溶劑，氯化膽堿在甲苯中回流脫水至水分≤1.0%后溶解在二氯甲烷中使用，回流狀態(tài)（40℃）下滴加酰氯/二氯甲烷溶液；調(diào)堿溶劑選用三乙胺，調(diào)節(jié)溶液pH=3-4 時(shí),析出大量固體，在T=0±5℃下析晶16 小時(shí)，此步摩爾收率在61%左右。

2.3 精制工藝條件篩選

精制工藝主要通過(guò)產(chǎn)物的HPLC 純度及收率來(lái)評(píng)價(jià)工藝參數(shù)。主要優(yōu)化工藝參數(shù)如下：

2.3.1 第一次精制（精制溶劑：二甲亞砜）

精制溶劑篩選（乙醇、異丙醇、二甲亞砜、二氯甲烷，乙腈、四氫呋喃）、精制溶劑DMSO 體積篩選（3V、5V、10V）、析晶溫度（15±5℃、25±5℃）、析晶時(shí)間（2h，8h，16h）。

確定此步最佳工藝為：以DMSO（體積為5V）為精制溶劑，在15±5℃溫度下析晶2h，此步收率在85%左右（按干燥失重計(jì)）。

2.3.2 第二次精制（精制溶劑：無(wú)水乙醇）

無(wú)水乙醇溶劑體積篩選（5V、8V、10V、）、析晶溫度篩選（25±5℃、15±5℃、0±5℃）、析晶時(shí)間（2h，8h，16h）。

確定此步最佳工藝為：以無(wú)水乙醇（8V）回流下溶解，在0±5℃下析晶4h。此步摩爾收率在90%左右。

經(jīng)過(guò)兩次重結(jié)晶的原料藥HPLC 純度（外標(biāo)法） 達(dá)到99.80%以上，已遠(yuǎn)超美國(guó)藥典98.5%的要求；此兩步總收率76%左右。

3 結(jié)論

此工藝路線經(jīng)過(guò)酰氯化，酯化及重結(jié)晶步驟，得到HPLC 純度99.80%以上的產(chǎn)品，滿足最嚴(yán)美國(guó)藥典中原料藥純度≥98.50%和各已知單雜限度的要求，總摩爾收率為46.5%。此工藝路線革除了五氯化磷做酰氯化劑（使用二氯亞砜做?；瘎锍缩セ杏玫降穆确伦鋈軇ㄊ褂枚燃淄樽鲺セ磻?yīng)溶劑）；此工藝中使用溶劑和試劑都是常規(guī)試劑（未用到劇毒品），反應(yīng)條件都為常規(guī)條件（未出現(xiàn)苛刻的反應(yīng)條件）；通過(guò)重結(jié)晶溶劑篩選，發(fā)現(xiàn)DMSO 對(duì)產(chǎn)品中的氯化琥珀單膽堿和三乙胺鹽酸鹽有明顯的去除效果，通過(guò)優(yōu)化重結(jié)晶的工藝參數(shù)，在不影響收率的前提下，通過(guò)DMSO 和無(wú)水乙醇的兩次精制，得到成品滿足制劑一致性評(píng)價(jià)對(duì)原料藥的要求，是一條綠色環(huán)保的工藝。