1 ASF病原學(xué)檢測(cè)

1.1 紅細(xì)胞吸附（HAD）試驗(yàn)紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象最早發(fā)現(xiàn)于1969年，是在病毒感染巨噬細(xì)胞過程中的出現(xiàn)的一種自然現(xiàn)象。感染了非洲豬瘟病毒的巨噬細(xì)胞會(huì)吸附在豬的紅細(xì)胞表面，呈現(xiàn)出典型的“玫瑰花環(huán)”的形狀。這種技術(shù)手段的靈敏度和特異性都很好，但是操作繁瑣、對(duì)技術(shù)水平要求較高。目前已經(jīng)有研究表明，有一些ASFV毒株不具有紅細(xì)胞的吸附特性，對(duì)于這類毒株，用紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)就無法進(jìn)行檢測(cè)。

1.2 PCR技術(shù)目前，PCR技術(shù)是檢測(cè)ASFV最為常用的檢測(cè)手段，也是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織指定的ASFV的檢測(cè)方法。該技術(shù)是一種操作便捷、檢測(cè)效率較高的分子生物學(xué)方法，只需要針對(duì)不同的基因片段設(shè)計(jì)相應(yīng)的特異性引物，就可以快速檢測(cè)出目的基因。具有快速檢測(cè)、特異性強(qiáng)、靈敏度高的特點(diǎn)，并且對(duì)樣品的純度、血液樣品及組織的保存方式要求較低。

ASFV是雙鏈線性的DNA病毒，其基因組全長(zhǎng)為170～190kb，利用ASFV VP73基因的高保守片段序列設(shè)計(jì)出特異性引物，在通過優(yōu)化PCR反應(yīng)的條件，組裝了非洲豬瘟病毒的PCR檢測(cè)試劑盒，該試劑盒的檢測(cè)靈敏度高達(dá)0.1fg，利用雙重PCR技術(shù)建立了檢測(cè)非洲豬瘟和豬瘟的方法，最低檢出量均可達(dá)到100pg。

1.3 熒光定量PCR技術(shù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)實(shí)時(shí)在線檢測(cè)整個(gè)PCR反應(yīng)進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的一種核酸定量檢測(cè)技術(shù)。該技術(shù)與常規(guī)PCR相比，具有特異性強(qiáng)，自動(dòng)化程度高，并且可以有效解決常規(guī)PCR污染等問題。

自2009年以來，我國(guó)多人陸續(xù)建立了多種熒光PCR法檢測(cè)非洲豬瘟病毒。2010年，基于ASFV的VP73基因的保守區(qū)域，設(shè)計(jì)了特異性引物和Taqman探針，建立了非洲豬瘟熒光PCR檢測(cè)方法，該方法的最低檢測(cè)限為10個(gè)拷貝數(shù)/μL，與OIE推薦的熒光PCR檢測(cè)方法靈敏度和特異性均相當(dāng)。

利用ASFVCP530R基因的高保守序列，設(shè)計(jì)1對(duì)特異性引物和探針，建立了檢測(cè)ASFV的TaqMan-MGB探針實(shí)時(shí)熒光PCR方法，該檢測(cè)方法最低檢測(cè)限為61個(gè)拷貝數(shù)/μL，利用該方法進(jìn)行重復(fù)性檢測(cè)，4次檢測(cè)的變異系數(shù)均小于2.0%。通過對(duì)38份豬肉標(biāo)本和126份進(jìn)口豬的血液標(biāo)本進(jìn)行ASFV檢測(cè)，結(jié)果均為陰性。

2 ASF血清學(xué)檢測(cè)

2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）ELISA技術(shù)作為目前國(guó)內(nèi)外應(yīng)用最為廣泛的血清學(xué)診斷方法，具有快速靈敏、準(zhǔn)確性高的優(yōu)點(diǎn)，并且可以用于大規(guī)模樣品的排查和疫病的監(jiān)測(cè)。但是該方法具有一定的局限性，沒有辦法檢測(cè)出早期的ASFV感染。依據(jù)Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，表達(dá)出ASFV P54蛋白，經(jīng)過各反應(yīng)條件的優(yōu)化，建立了檢測(cè)ASFV血清抗體的間接ELISA方法，該方法檢測(cè)ASFV的靈敏度可達(dá)1∶320，并且具有操作簡(jiǎn)單、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。

2.2 膠體金免疫層析(GICA)法膠體金免疫層析(GICA)法的原理是將膠體金作為示蹤標(biāo)志物，應(yīng)用于抗原抗體檢測(cè)的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。該技術(shù)具有較高的靈敏度，并且易于操作，適合在大規(guī)模排查中使用。通過利用 ASFV的p54蛋白抗原，成功建立了P54抗體膠體金檢測(cè)法，制備了P54快速檢測(cè)膠體金試紙條，該試紙條具有特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，非常適合用于基層疫病防控中。

綜上所述，非洲豬瘟是一種傳染性很強(qiáng)的出血性病毒傳染病，目前還未研制出有效疫苗。該種疫病一旦在我國(guó)發(fā)展蔓延，會(huì)對(duì)我國(guó)的生豬養(yǎng)殖業(yè)及相關(guān)產(chǎn)業(yè)造成重大的沖擊。隨著我國(guó)畜牧業(yè)快速發(fā)展，防疫人員的數(shù)量和專業(yè)素質(zhì)無法滿足日益嚴(yán)重的防疫工作，一定程度上制約我國(guó)畜牧業(yè)持續(xù)健康發(fā)展。因此，快速靈敏的ASFV檢測(cè)技術(shù)在我國(guó)基層的疫病檢測(cè)中發(fā)展前景良好。隨著我國(guó)對(duì)非洲豬瘟疫情的嚴(yán)防嚴(yán)控力度的不斷加強(qiáng)，ASFV檢測(cè)技術(shù)也將會(huì)不斷發(fā)展和完善，為我國(guó)進(jìn)一步開展ASFV的監(jiān)測(cè)和防控奠定技術(shù)基礎(chǔ)。