李格寧，蔡潔新，陳績(jī)才△，林秋強(qiáng)，陳 韌

廣東省汕頭市澄海區(qū)人民醫(yī)院：1.風(fēng)濕免疫實(shí)驗(yàn)室；2.風(fēng)濕免疫科，廣東汕頭 515800

結(jié)締組織病是一種主要侵犯全身結(jié)締組織和血管的自身免疫性疾病。皮膚由于含有豐富的結(jié)締組織和血管，是一個(gè)重要的靶器官。隨著診斷技術(shù)的進(jìn)步及人們對(duì)結(jié)締組織病的重視，近年來發(fā)現(xiàn)一些結(jié)締組織病間相互移行、合并和重疊的患者，用傳統(tǒng)分類標(biāo)準(zhǔn)無法得出確切診斷，因此，稱為重疊綜合征或重疊結(jié)締組織病。重疊綜合征是指同時(shí)或先后患有2種及以上的自身免疫性疾病[1]，其臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，常發(fā)生漏診、誤診。該病患者體內(nèi)存在多種自身抗體，除常規(guī)檢測(cè)的抗體，包括抗核抗體(ANA)、抗雙鏈DNA抗體、抗可溶性抗原譜、抗環(huán)瓜氨酸多肽抗體和抗角蛋白抗體等，還存在其他多種自身抗體，如肌炎相關(guān)性自身抗體，包括抗PM-Scl抗體、抗U1核糖核蛋白抗體和抗Ro52抗體[2]。本研究對(duì)2017—2019年在本院就診的624例結(jié)締組織病患者進(jìn)行抗PM-Scl抗體定量檢測(cè)并觀察分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017-2019年在本院就診的624例結(jié)締組織病患者為研究對(duì)象，其中男144例，女480例；年齡5～89歲，平均53.4歲；所有病例診斷均符合1987年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)的診斷標(biāo)準(zhǔn)。系統(tǒng)性硬化癥的診斷均符合2013年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)、歐洲風(fēng)濕病聯(lián)盟(ACR/EULAR)發(fā)布的最新系統(tǒng)性硬化癥分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。對(duì)照組為本院體檢健康者100例，男60例，女40例；年齡21～60歲，平均48.0歲。

1.2抗PM-Scl抗體定量檢測(cè) 采用德國(guó)歐蒙公司生產(chǎn)的抗PM-Scl抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒，操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。將標(biāo)本按1∶100稀釋，根據(jù)加樣方案向相應(yīng)微孔中分別加入稀釋血清、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照及判斷標(biāo)準(zhǔn)血清各100 μL，室溫(18～25 ℃)溫育30 min，洗板3次，加酶標(biāo)抗體100 μL，室溫溫育30 min，洗板3次，加底物顯色，室溫避光溫育15 min。加終止液100 μL，450 nm波長(zhǎng)比色，判斷標(biāo)準(zhǔn)為:≥20.0 RU/mL為陽(yáng)性，<20.0 RU/mL為陰性。標(biāo)本吸光度(A)值采用五擬合參數(shù)計(jì)算軟件，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算標(biāo)本水平。

1.3免疫印跡法檢測(cè)ANA譜 采用廣州康潤(rùn)生物科技有限公司提供的免疫印跡法檢測(cè)患者血清中ANA譜抗體，按照試劑盒說明書進(jìn)行檢測(cè)，并采用配套軟件Aesku Scan進(jìn)行掃描和判讀。結(jié)果判斷：≥6個(gè)灰區(qū)值為陽(yáng)性，<6個(gè)灰區(qū)值為陰性。

1.4間接免疫熒光法檢測(cè)ANA 采用德國(guó)Aesku醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司提供的ANA抗原片檢測(cè)患者血清中ANA，按照試劑盒說明書進(jìn)行檢測(cè)。起始稀釋滴度為1∶80。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以M(P25～P75)表示，采用秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1結(jié)締組織病患者抗PM-Scl抗體定量檢測(cè)結(jié)果 624例結(jié)締組織病患者抗PM-Scl抗體檢出水平為6.57(2.31～10.02)RU/mL，檢出率為3.5%；在90例多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征患者中，其抗體檢出水平為11.34(6.48～16.32)RU/mL。624例結(jié)締組織病患者采用ELISA法定量檢測(cè)抗PM-Scl抗體，有22例患者抗PM-Scl抗體水平升高，結(jié)合臨床相關(guān)資料，最后有20例確診為多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征。22例抗PM-Scl抗體水平升高患者均出現(xiàn)在臨床診斷為多發(fā)性肌炎、系統(tǒng)性硬化癥及其重疊綜合征患者中，陽(yáng)性率為13.3%(22/165)，其他結(jié)締組織病及對(duì)照組均未檢測(cè)到該抗體。見表1。

表1 624例結(jié)締組織病患者抗PM-Scl抗體定量檢測(cè)結(jié)果

2.2多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥與非多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征抗PM-Scl抗體檢測(cè)結(jié)果 20例多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征患者抗PM-Scl抗體水平和陽(yáng)性率明顯高于非多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征患者(P<0.01)。見表2。

表2 多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥與非多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征抗PM-Scl抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3抗PM-Scl抗體水平升高患者的ANA譜和ANA檢測(cè)結(jié)果 22例抗PM-Scl抗體水平升高患者的ANA譜抗體檢測(cè)均陰性，ANA用間接免疫熒光法篩查，核型均為核仁抗體陽(yáng)性。見表3。

表3 抗PM-Scl抗體水平升高的ANA譜和ANA檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

抗PM-Scl抗體的靶抗原主要位于核仁的顆粒部分，由11～16種蛋白多肽組成，其中相對(duì)分子質(zhì)量為75×103和100×103的兩種蛋白質(zhì)已被鑒定為主要抗原組分。本研究顯示，采用間接免疫熒光法檢測(cè)ANA，22例抗PM-Scl抗體水平升高患者血清出現(xiàn)特征性熒光染色模型，即Hep-2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)基質(zhì)分裂間期細(xì)胞的細(xì)胞核核仁呈現(xiàn)強(qiáng)均質(zhì)型熒光染色，有絲分裂期細(xì)胞濃縮的染色體區(qū)為陰性。采用免疫印跡法檢測(cè)ANA譜抗體，22例抗PM-Scl抗體水平升高患者血清抗Scl-70抗體、抗Jo-1抗體均陰性，其原因是抗Scl-70抗體的靶抗原是DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶1，而抗PM-Scl抗體的靶抗原位點(diǎn)主要是相對(duì)分子質(zhì)量為75×103和100×103的蛋白質(zhì)。

已有一些相關(guān)資料顯示，抗PM-Scl抗體可存在于多種結(jié)締組織病中，但陽(yáng)性率不高，其中多發(fā)性肌炎的陽(yáng)性率為8%，系統(tǒng)性硬化癥的陽(yáng)性率為3%，在肌炎合并硬化癥重疊綜合征患者中該抗體陽(yáng)性率高達(dá)25%[4]。雖然僅25%左右的重疊綜合征出現(xiàn)抗PM-Scl抗體陽(yáng)性，但是抗PM-Scl抗體陽(yáng)性者50%易患重疊綜合征[5]。本研究624例結(jié)締組織病患者，抗PM-Scl抗體檢出水平為6.57(2.31～10.02)RU/mL,陽(yáng)性率為3.5%。其中有90例多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征患者，其抗體檢測(cè)水平為11.34(6.48～16.32)RU/mL?？筆M-Scl抗體的陽(yáng)性率雖然不高，但是幾乎僅存在于多發(fā)性肌炎[6]、系統(tǒng)性硬化癥[7]及重疊綜合征中。本研究結(jié)果顯示，多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征患者抗PM-Scl抗體水平及陽(yáng)性率明顯高于非多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征患者，說明抗PM-Scl抗體對(duì)多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥具有良好相關(guān)性，有一定診斷價(jià)值。這也解釋了本研究抗PM-Scl抗體陽(yáng)性多出現(xiàn)在一些結(jié)締組織病間相互移行、合并和重疊患者中的原因。多發(fā)性肌炎與彌散型系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征患者紅細(xì)胞沉降率加快，C-反應(yīng)蛋白水平升高。抗PM-Scl抗體陽(yáng)性的患者，一般其他自身抗體為陰性，如抗可提取核抗原或抗Jo-1抗體。但是抗PM-Scl抗體陽(yáng)性患者中抗著絲點(diǎn)抗體或抗Scl-70抗體陰性，表明這些患者具有多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥的疾病單元?？筆M-Scl抗體相關(guān)重疊綜合征的診斷對(duì)患者的治療具有重要意義，與彌散型系統(tǒng)性硬化癥患者相比，抗PM-Scl抗體相關(guān)重疊綜合征患者需要的激素劑量較低，且大多具有良好的預(yù)后?？筆M-Scl抗體陽(yáng)性與肺纖維化和指端潰瘍風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)，對(duì)肺動(dòng)脈高壓和下消化道癥狀有保護(hù)意義[8]。西班牙的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，癌癥風(fēng)險(xiǎn)與抗PM-Scl抗體存在直接相關(guān)性(OR=3.90，95%CI：1.31～11.61，P=0.014)[9]，然而，另一項(xiàng)研究并未驗(yàn)證出該結(jié)果，抗PM-Scl抗體在系統(tǒng)性硬化癥合并腫瘤組與系統(tǒng)性硬化癥不合并腫瘤組的陽(yáng)性結(jié)果相似(6.5%vs.6.9%，P=0.916)[10]。

抗PM-Scl抗體不是系統(tǒng)性硬化癥特異性的指標(biāo)，在多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征中經(jīng)常出現(xiàn)[11]，即使肌炎臨床癥狀不明顯的，也可出現(xiàn)肌酶升高。本研究結(jié)果顯示，抗PM-Scl抗體陽(yáng)性率雖然不高，但是幾乎僅存在于多發(fā)性肌炎、系統(tǒng)性硬化癥及其重疊綜合征患者中，與某些疾病具有很好的相關(guān)性。因此，檢測(cè)抗PM-Scl抗體對(duì)多發(fā)性肌炎、系統(tǒng)性硬化癥及重疊綜合征等結(jié)締組織病的診斷和鑒別診斷有重要的臨床價(jià)值。本研究抗PM-Scl抗體陽(yáng)性的患者不多，與葉楊等[5]的研究陽(yáng)性率有差別，可能與本試驗(yàn)采用的是德國(guó)歐蒙進(jìn)口試劑盒檢測(cè)，抗體特異性較高，以及不同地區(qū)疾病陽(yáng)性率有一定差異有關(guān)。