吳衛(wèi)星，吳宗勇，張 麗，張曉煜，黨秀敏，齊 軍△

1.國(guó)家癌癥中心/國(guó)家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心/中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院腫瘤醫(yī)院深圳醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳 518116；2.國(guó)家癌癥中心/國(guó)家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心/中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100021

2018年國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)發(fā)布的全球腫瘤流行病調(diào)查顯示，甲狀腺癌已成為全球第11位高發(fā)癌癥，占女性癌癥發(fā)病率的第5位[1]。為了預(yù)防和監(jiān)控甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展，甲狀腺功能血清學(xué)檢查作為實(shí)驗(yàn)室診斷的重要依據(jù)，對(duì)提高甲狀腺疾病的診療水平具有重要的作用，而精密的儀器和穩(wěn)定的性能是獲得甲狀腺功能準(zhǔn)確穩(wěn)定結(jié)果的重要保障。

近年來(lái)，隨著醫(yī)療器械技術(shù)水平的迅速提升，國(guó)產(chǎn)醫(yī)療器械迅速崛起，打破了國(guó)外醫(yī)療器械在國(guó)內(nèi)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的壟斷地位。然而，相對(duì)于國(guó)外儀器，國(guó)產(chǎn)儀器普遍存在的穩(wěn)定性和可靠性不足的問(wèn)題，導(dǎo)致各大醫(yī)院對(duì)國(guó)產(chǎn)儀器的認(rèn)可度、信任度不高。因此，本文按照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)的要求[2]，針對(duì)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院腫瘤醫(yī)院深圳醫(yī)院檢驗(yàn)科實(shí)驗(yàn)室的邁瑞CL6000i全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)甲狀腺功能五項(xiàng)開(kāi)展全面的性能驗(yàn)證，包括精密度、正確度、線性、生物參考區(qū)間、最低檢出限和攜帶污染，綜合判斷其性能特性，以確保該儀器滿足臨床診斷需求。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑 邁瑞CL6000i全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)的試劑批號(hào)為180701，定標(biāo)品批號(hào)為180601，質(zhì)控品批號(hào)為180701；游離甲狀腺素(FT4)的試劑批號(hào)為180601，定標(biāo)品批號(hào)為180501，質(zhì)控品批號(hào)為180701；三碘甲狀腺原氨酸(T3)的試劑批號(hào)為180701，定標(biāo)品批號(hào)為180701，質(zhì)控品批號(hào)為180701；甲狀腺素(T4)的試劑批號(hào)為180701，定標(biāo)品批號(hào)為180601，質(zhì)控品批號(hào)為180701；促甲狀腺激素(TSH)的試劑批號(hào)為180701，定標(biāo)品批號(hào)為180901，質(zhì)控品批號(hào)為180701。

1.2標(biāo)本來(lái)源 從中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院腫瘤醫(yī)院深圳醫(yī)院就診患者或體檢健康者中選取高、中、低水平的新鮮血清，并要求標(biāo)本無(wú)黃疸、溶血、脂血。

1.3方法

1.3.1精密度 參考CLSI EP5-A3文件[3]，選擇低值和高值2個(gè)水平的質(zhì)控品，分裝于多個(gè)EP管，保存至-20 ℃冰箱備用。每天復(fù)融新的2個(gè)水平的質(zhì)控，重復(fù)做4次，連續(xù)做5 d，共做20次。計(jì)算批內(nèi)精密度和批間精密度。批內(nèi)精密度以1/4 TEa(CLIA′88)為質(zhì)量目標(biāo)，批間精密度以1/3 TEa(CLIA′88)為質(zhì)量目標(biāo)。

1.3.2正確度 參考CLSI EP15-A3文件[4]，采用邁瑞具有溯源性的企業(yè)參考物質(zhì)，計(jì)量上溯源至國(guó)際單位制，檢測(cè)3次，計(jì)算平均值。以參考物質(zhì)的靶值為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算該實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果與靶值的偏倚。要求偏倚<1/2 TEa，能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(PT)≥80%，即為合格。

1.3.3線性 參考NCCLS EP6-A3文件[5]，收集靠近線性高值水平和線性低值水平的標(biāo)本，若收集不到高值標(biāo)本，可加高水平的分析物。為減少對(duì)標(biāo)本基質(zhì)的影響，加入分析物體積不應(yīng)超過(guò)總體積的10%。將線性高值標(biāo)本和線性低值標(biāo)本按照5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5L的比例稀釋并混勻，配置成6個(gè)水平的標(biāo)本(L表示低值，H表示高值)。每個(gè)標(biāo)本測(cè)試2次，分別求出測(cè)定結(jié)果的均值。將測(cè)定水平均值和理論水平進(jìn)行回歸擬合，計(jì)算線性相關(guān)系數(shù)(r)和斜率(b)，要求r≥0.990，b為0.95～1.05，即為合格。

1.3.4生物參考區(qū)間 參考美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)C28-A2文件[6]，收集20例健康者，男10例，女10例，年齡20～70歲，對(duì)生物參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證。僅允許5%的數(shù)據(jù)超出所驗(yàn)證的生物參考區(qū)間，即95%以上的健康者檢測(cè)值在參考區(qū)間內(nèi)，則表明該生物參考區(qū)間可用于該實(shí)驗(yàn)室。

2 結(jié) 果

2.1精密度驗(yàn)證 應(yīng)用該型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀對(duì)甲狀腺功能五項(xiàng)FT3、FT4、T3、T4、TSH進(jìn)行測(cè)定，雖然廠家聲明的批內(nèi)和批間精密度高于1/4 TEa(CLIA′88)和1/3 TEa(CLIA′88)，但各個(gè)項(xiàng)目的批內(nèi)精密度均小于1/4 TEa(CLIA′88)，批間精密度均小于1/3 TEa(CLIA′88)，表明精密度驗(yàn)證通過(guò)。見(jiàn)表1。

表1 批內(nèi)及批間精密度驗(yàn)證結(jié)果(%，n=20)

2.2正確度驗(yàn)證 采用具有溯源性的企業(yè)參考物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，F(xiàn)T3、FT4、T3、T4、TSH的高值和低值參考物質(zhì)的檢測(cè)值均在廠商聲明的允許范圍內(nèi)，并且偏倚均小于1/2 TEa，能力驗(yàn)證成績(jī)?yōu)?00%，表明正確度驗(yàn)證通過(guò)。見(jiàn)表2。

表2 正確度驗(yàn)證結(jié)果

2.3線性驗(yàn)證 按照線性標(biāo)準(zhǔn)要求，以理論稀釋水平為x值，實(shí)際檢測(cè)水平為y值，計(jì)算擬合線性回歸方程和r。TSH、T3、T4的實(shí)際驗(yàn)證范圍與廠家聲明線性范圍相近，結(jié)果顯示，TSH、T3、T4呈線性相關(guān)，r≥0.990，b為0.95～1.05，均在可接受范圍內(nèi)。由于T4與FT4存在一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡，標(biāo)本稀釋會(huì)影響FT4的動(dòng)態(tài)平衡[9]，F(xiàn)T3與FT4具有相同效應(yīng)，因此，F(xiàn)T4和FT3不適合做線性稀釋。見(jiàn)表3。

表3 線性驗(yàn)證結(jié)果

2.4生物參考區(qū)間驗(yàn)證 按照NCCLS C28-A2文件要求，選擇20例體檢合格的健康者進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，甲狀腺功能五項(xiàng)的檢測(cè)值100%分布在該實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的生物參考區(qū)間內(nèi)，說(shuō)明該參考區(qū)間可用于實(shí)驗(yàn)室。見(jiàn)表4。

表4 生物參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

2.5檢測(cè)低限驗(yàn)證 結(jié)果顯示，檢測(cè)低限TSH為0.001 μIU/mL，F(xiàn)T3為0.054 pg/mL，F(xiàn)T4為-0.012 ng/dL，T3為0.146 ng/mL，T4為0.007 μg/dL，均小于廠家聲明的檢測(cè)低限，表明廠家聲明檢測(cè)低限適用于該實(shí)驗(yàn)室。見(jiàn)表5。

表5 檢測(cè)低限驗(yàn)證結(jié)果

2.6攜帶污染驗(yàn)證 攜帶污染量TSH為0.002 μIU/mL，F(xiàn)T3為0.000 pg/mL，F(xiàn)T4為0.000 ng/dL，T3為0.000 ng/mL，T4為0.012 μg/dL，均≤3σL-L，說(shuō)明邁瑞CL6000i全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的攜帶污染率符合相應(yīng)的儀器要求。見(jiàn)表6。

表6 攜帶污染驗(yàn)證結(jié)果

3 討 論

根據(jù)美國(guó)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》和ISO15189醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的規(guī)定[10]，在用于臨床檢測(cè)之前，儀器設(shè)備、檢驗(yàn)系統(tǒng)和方法的主要分析性能需進(jìn)行驗(yàn)證，并要求驗(yàn)證結(jié)果能達(dá)到臨床檢測(cè)所要求的標(biāo)準(zhǔn)。本文依照CLSI EP5-A3、EP15-A3、EP6-A3、EP17-A2和NCCLS C28-A2等文件的要求，對(duì)邁瑞CL-6000i全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)FT3、FT4、T3、T4、TSH 5個(gè)甲狀腺功能項(xiàng)目的精密度、正確度、線性、生物參考區(qū)間、檢測(cè)低值、攜帶污染等進(jìn)行評(píng)估。

精密度是對(duì)同一份標(biāo)本重復(fù)檢測(cè)所得檢測(cè)結(jié)果之間的一致程度，即可重復(fù)性，通常以變異系數(shù)表示[11]。良好的精密度是其他各項(xiàng)性能驗(yàn)證指標(biāo)的前提。本研究結(jié)果顯示，該型化學(xué)發(fā)光免疫分析儀對(duì)甲狀腺功能五項(xiàng)的批內(nèi)精密度小于1/4 TEa(CLIA′88)，批間精密度小于1/3 TEa(CLIA′88)，說(shuō)明儀器的可重復(fù)性好，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。

正確度是檢測(cè)結(jié)果的均值與參考值(約定真值)之間的一致程度，常用偏倚表示[11-12]。偏倚越低正確率越高。該實(shí)驗(yàn)室采用邁瑞具有溯源性的企業(yè)參考物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示,FT3、FT4、T3、T4、TSH的檢測(cè)均值與靶值之間的偏倚均小于1/2 TEa，每項(xiàng)能力驗(yàn)證成績(jī)均為100%，說(shuō)明儀器的檢測(cè)值可信度高，可以滿足臨床要求。

線性范圍是利用接近線性的高低值標(biāo)本及高低值標(biāo)本按比例混勻的標(biāo)本的理論水平和實(shí)際檢測(cè)值之間的線性關(guān)系，從而評(píng)估儀器的可報(bào)告范圍[13]。若檢測(cè)值超出該線性范圍，被視為不準(zhǔn)確的檢測(cè)值?？紤]到腫瘤患者的結(jié)果多為異常，因此，良好的檢測(cè)方法或檢測(cè)系統(tǒng)各項(xiàng)目的線性范圍不僅要覆蓋醫(yī)學(xué)決定水平還應(yīng)具有較寬的線性范圍。本研究顯示，T3、T4、TSH的r≥0.990，并且b為0.95～1.05，表明T3、T4、TSH等項(xiàng)目在廠家聲明的線性范圍內(nèi)均具有很好的線性。由于T4與FT4存在一個(gè)滿足結(jié)合常數(shù)K公式的動(dòng)態(tài)平衡，稀釋液和標(biāo)本之間存在著蛋白種類和水平的差異，結(jié)合常數(shù)K也不盡相同，因此，F(xiàn)T4不宜做線性稀釋[9]。大部分的FT3是由T4轉(zhuǎn)變而來(lái)，并維持著一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡，F(xiàn)T3與FT4具有相同效應(yīng)。如需對(duì)FT3與FT4進(jìn)行溯源，可采用平衡透析或者超濾的方法，這被認(rèn)為是目前檢測(cè)游離激素的“金標(biāo)準(zhǔn)”[9]。

生物參考區(qū)間是健康者中間95%分布區(qū)間的檢測(cè)值范圍[8]。實(shí)驗(yàn)室確定一個(gè)可靠的生物參考區(qū)間非常重要。隨著新引進(jìn)的檢驗(yàn)項(xiàng)目的增大，考慮到人力、物力和成本，每個(gè)項(xiàng)目建立本實(shí)驗(yàn)的生物參考區(qū)間并不現(xiàn)實(shí)，大部分實(shí)驗(yàn)室會(huì)采用其他實(shí)驗(yàn)室或儀器試劑廠家提供的生物參考區(qū)間數(shù)據(jù)，并進(jìn)行驗(yàn)證。本研究按照NCCLS C28-A2文件要求，隨機(jī)抽取20例健康者的血清進(jìn)行檢測(cè)，F(xiàn)T3、FT4、T3、T4、TSH的檢測(cè)值均100%在參考區(qū)間內(nèi)，說(shuō)明廠家聲明的生物參考區(qū)間適用于該實(shí)驗(yàn)室。

檢測(cè)低值是檢測(cè)系統(tǒng)能檢測(cè)出的最低分析物水平，體現(xiàn)儀器的反應(yīng)靈敏度。TSH是篩查甲狀腺功能異常和原發(fā)性甲狀腺功能減退甲狀腺激素替代治療的關(guān)鍵方法，甲狀腺功能亢進(jìn)患者的TSH經(jīng)常出現(xiàn)極低檢測(cè)值[14]，因此，檢測(cè)系統(tǒng)良好的檢測(cè)低限對(duì)甲狀腺功能的判斷與監(jiān)測(cè)至關(guān)重要。本研究顯示，各項(xiàng)的檢測(cè)低值均小于廠家聲明的檢測(cè)低值，其中TSH的檢測(cè)低限邁瑞CL6000i廠家聲明為0.005 0 μIU/mL，本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證為0.001 0 μIU/mL，同類型儀器羅氏Cobas 601的檢測(cè)低限為0.002 5 μIU/mL[15]，表明邁瑞CL6000i具備與羅氏Cobas 601同樣良好的反應(yīng)靈敏度。

攜帶污染是不同水平標(biāo)本依次檢測(cè)，高水平標(biāo)本對(duì)低水平標(biāo)本的污染程度。本研究顯示，F(xiàn)T3、FT4、T3、T4、TSH等項(xiàng)目的攜帶污染率均小于允許污染范圍，說(shuō)明邁瑞CL6000i的沖洗功能良好，并且該儀器采用的是一次性吸頭取樣，能有效減少標(biāo)本間的交叉污染，提高檢測(cè)結(jié)果的可信性。

綜上所述，邁瑞CL6000i全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)FT3、FT4、T3、T4、TSH等項(xiàng)目的精密度、正確度、線性、生物參考區(qū)間、攜帶污染均能達(dá)到廠商聲明要求，符合CLIA′88和ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可要求。本研究的性能驗(yàn)證具有實(shí)用性和可操作性，證明邁瑞CL6000i全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀具有優(yōu)良的性能，能夠滿足臨床需求。