（江蘇省動物疫病預(yù)防控制中心，江蘇南京 210036）

為全面了解江蘇省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力和動物疫情監(jiān)測預(yù)警水平，促進各級獸醫(yī)實驗室重視實驗室檢測工作，按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部統(tǒng)一要求，2017—2019 年，江蘇省動物疫病預(yù)防控制中心連續(xù)3 年組織全省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室開展檢測能力比對工作。各實驗室以檢測能力比對為契機，更新儀器設(shè)備配置，完善質(zhì)量管理體系，加強理論培訓與操作演練，動物疫病檢測能力和實驗室管理水平得到了較大提升，檢測能力比對工作達到了預(yù)期效果。

1 比對項目設(shè)計

2017—2019 年根據(jù)動物疫病防控工作需要設(shè)置檢測能力比對項目。鑒于市級和縣級實驗室檢測能力不同，每年比對分別設(shè)置市級比對項目和縣級比對項目兩大類，每個實驗室每年參加3～4 個比對項目（表1）。

2 材料和方法

2.1 比對方法、標準和試劑

針對不同的比對項目，采用國家標準或國家參考實驗室推薦的方法進行比對。所用試劑全部由參加比對的實驗室自行準備（表2）。

2.2 比對樣品

由江蘇省動物疫病預(yù)防控制中心完成所有比對項目樣品的制備、標定、分裝、編號和保存。每個比對項目設(shè)置3～5 份樣品。定性樣品設(shè)置了陽性和陰性樣品，定量樣品設(shè)置了不同的滴度，有些項目還設(shè)置了重復(fù)。所有樣品隨機分發(fā)，分發(fā)時將樣品用裝有冰袋的冷藏箱運送。

2.3 結(jié)果評判標準

2.3.1 高致病性豬藍耳病病毒檢測、小反芻獸疫抗體檢測、小反芻獸疫病毒檢測、豬偽狂犬病gE抗體檢測、非洲豬瘟病毒檢測、豬偽狂犬病gB 抗體檢測項目評判標準 樣品檢測值與參考值完全一致判為正確，即陽性樣品的檢測值應(yīng)為“陽性”，陰性樣品的檢測值應(yīng)為“陰性”，否則判為錯誤。

表1 2017—2019 年江蘇省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對項目

表2 2017—2019 年江蘇省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對項目的方法和標準

2.3.2 布魯氏菌抗體檢測、H5 亞型高致病性禽流感（Re-8 株）抗體檢測、O 型口蹄疫抗體檢測、新城疫抗體檢測項目評判標準 檢測值與參考值的偏差不超過1 個滴度，判為正確，否則判為錯誤。

2.3.3 細菌分離與鑒定項目評判標準 檢測值與參考值一致判為正確，否則判為錯誤，乙型副傷寒沙門氏菌的鑒定結(jié)果還可為“沙門氏菌”或“副傷寒沙門氏菌”，金黃色葡萄球菌的鑒定結(jié)果還可為“葡萄球菌”，銅綠假單胞菌的鑒定結(jié)果還可為“綠膿桿菌”，“枯草芽孢桿菌”的鑒定結(jié)果還可為“芽孢桿菌”或“枯草桿菌”，大腸埃希氏菌的鑒定結(jié)果還可為“埃希氏大腸桿菌”或“大腸桿菌”。

3 結(jié)果

2017—2019 年共開展了11 個項目的比對，不同年度、不同比對項目不同實驗室類別的結(jié)果差異較大（表3）。

3.1 年度檢測能力比對

按照不同年度進行統(tǒng)計，3 個年度檢測能力比對結(jié)果見表4。實驗室正確率和樣品正確率逐年提高，分別從2017 年的38.64%和89.08%提高到2019 年的93.51%和99.32%。

3.2 2017—2019 年均參加比對的實驗室正確率

對3 個年度均參加比對的實驗室正確率進行統(tǒng)計，1 個年度出現(xiàn)錯誤、2 個年度出現(xiàn)錯誤、3個年度均出現(xiàn)錯誤和3 個年度均正確的實驗室占比情況見圖1。3 個年度中，1 個年度比對結(jié)果出現(xiàn)錯誤的實驗室最多，占45.45%；3 個年度均出現(xiàn)錯誤的最少，占3.90%。

表3 2017—2019 年江蘇省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對結(jié)果

表4 2017—2019 年各年度檢測能力比對結(jié)果

圖1 3 個年度均參加比對實驗室正確率分布

3.3 檢測能力比對均正確實驗室分布

對3 個年度比對結(jié)果均正確的實驗室按照不同市進行統(tǒng)計（圖2）。2017—2019 年，參加檢測能力比對且比對結(jié)果均正確的實驗室22 個，市級實驗室6 個，分別為南京、常州、蘇州、鹽城、鎮(zhèn)江和宿遷；縣級實驗室16 個，分屬南京、常州、蘇州、南通、鹽城、鎮(zhèn)江和宿遷。其中，南京、常州、蘇州、鎮(zhèn)江和宿遷5 個市級實驗室均正確，轄區(qū)內(nèi)的縣級實驗室也有近3 年比對均正確的，只是數(shù)量不等；相反，無錫、徐州、連云港、淮安、揚州、泰州等6 個市的市級和縣級實驗室都沒有近3 年全部正確的。

圖2 3 個年度檢測能力比對均正確實驗室分布

4 分析與討論

4.1 比對項目設(shè)置

各年度均根據(jù)當前動物疫病防控實際，結(jié)合江蘇省中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020 年），設(shè)置比對項目。以常見動物疫病檢測項目為主體，分別設(shè)置了高致病性豬藍耳病病毒檢測、小反芻獸疫病毒檢測、H5 亞型高致病性禽流感（Re-8 株）抗體檢測、新城疫抗體檢測、O 型口蹄疫抗體檢測、小反芻獸疫抗體檢測、布魯氏菌病抗體檢測、細菌分離與鑒定項目；2018 年兼顧動物疫病凈化工作，設(shè)置了豬偽狂犬病gE 抗體檢測、豬偽狂犬病gB 抗體檢測項目；2019 年考慮到非洲豬瘟疫情流行現(xiàn)狀，設(shè)置了非洲豬瘟病毒檢測項目，使檢測能力比對工作緊貼疫病防控實際，緊跟疫情變化狀況，使各級獸醫(yī)實驗室真正在動物疫病防控中發(fā)揮應(yīng)有的作用。在比對項目設(shè)置過程中，基于對病原微生物生物安全、樣品質(zhì)量和相關(guān)檢測試劑的可選擇性等方面的考慮，目前獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室比對項目設(shè)置遇到了一些問題。建議各國家參考實驗室和有關(guān)單位加快檢測用標準物質(zhì)和試劑研究，為檢測能力比對工作提供便利，為疫病監(jiān)測工作規(guī)范化、標準化強心助力，為科學預(yù)警、科學防控提供技術(shù)支持[1]。

4.2 不同檢測方法比對

將比對中涉及的各種檢測方法進行分類統(tǒng)計，H5 亞型高致病性禽流感（Re-8 株）抗體檢測、新城疫抗體檢測歸為HI 類，O 型口蹄疫抗體檢測、小反芻獸疫抗體檢測、豬偽狂犬病gB 抗體檢測、豬偽狂犬病gE 抗體檢測歸為ELISA 類，非洲豬瘟病毒檢測、高致病性豬藍耳病病毒檢測、小反芻獸疫病毒檢測歸為熒光PCR 類，布魯氏菌病抗體檢測歸為試管凝集類，細菌分離與鑒定單獨列為一類。經(jīng)計算，5 類方法的樣品正確率分別為：94.78%、97.39%、99.43%、74.32%和95.08%，試管凝集方法的樣品正確率最低，為74.32%，其他4 類均高于90%，說明定量的試管凝集方法，其操作難度和要求遠大于定性的ELISA、熒光PCR、細菌分離與鑒定以及定量的HI 方法[2-4]，試管凝集方法需要操作人員主觀判定結(jié)果，受操作熟練程度影響較大。熒光PCR 方法的樣品正確率最高，為99.43%，可能與該類比對項目主要是市級實驗室參加，且市級的檢測能力水平較高有關(guān)。

4.3 市級和縣級實驗室比對

各年度數(shù)據(jù)中，無論是實驗室正確率還是樣品正確率，市級實驗室都高于同期縣級實驗室水平。不同年度中，市級和縣級實驗室的差距在逐漸縮小。2017 年，市級和縣級實驗室正確率均低于50%，處于較低水平；2018 年市級正確率大幅提升，高于90%，縣級略高于50%，仍處于較低水平；2019 年市級和縣級均繼續(xù)提升，縣級提升幅度顯著加大，兩者均達到近3 年最好水平，市級實驗室正確率達到峰值100%。樣品正確率方面，縣級2017 年數(shù)據(jù)低于90%，其余均高于90%，且逐年上升；市級也呈現(xiàn)逐年上升的趨勢，2019 年達到峰值100%。結(jié)果表明：在檢測能力比對工作中，市級的整體成績好于縣級，但差距正在縮小。

4.4 不同年度比對

從各年度比對結(jié)果來看，各級獸醫(yī)實驗室檢測能力逐年提升，反映出各級獸醫(yī)主管部門對獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對工作的重視，實驗室的建設(shè)與管理得到了進一步加強，檢測能力和動物疫病監(jiān)測預(yù)警水平逐年提高。

4.5 參加比對實驗室數(shù)量

2017 年，有13 個市級和75 個縣級實驗室參加比對。2018 年因1 個市級、3 個縣級實驗室搬遷，參加比對的實驗室數(shù)量為12 個市級和72 個縣級。2019 年新增2 個縣級實驗室拆遷，5 個縣級實驗室功能調(diào)整，參加比對的實驗室數(shù)量再次減少，為12 個市級和65 個縣級。由于拆遷、功能調(diào)整等不利因素的影響，參加檢測能力比對的實驗室數(shù)量逐年減少，這提示要進一步加強獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室管理，盡可能采取各種措施保證實驗室正常有序運轉(zhuǎn)。此外，2019 年有21 個具備分子生物學檢測能力的縣級實驗室首次參加非洲豬瘟檢測能力比對，實驗室正確率95.24%，樣品正確率98.10%，取得了較好的成績。但仍有44 個縣級實驗室不能正常開展分子生物學檢測，需要加強相關(guān)儀器設(shè)備配置、人員培訓等工作，進一步提升縣級分子生物學檢測能力。

4.6 3 個年度均參加比對實驗室正確率及分布

3 個年度均參加比對實驗室正確率結(jié)果顯示，3 個年度比對結(jié)果均正確的實驗室共22 個，占28.57%，說明這些實驗室的質(zhì)量管理長效機制比較完善，而檢測值出現(xiàn)錯誤的實驗室應(yīng)提高質(zhì)量管理，注重全面提升。

3 個年度檢測能力比對均正確實驗室分布情況顯示，各市檢測能力穩(wěn)定性差異較大，這提示應(yīng)加強對檢測能力穩(wěn)定性較差市的監(jiān)督與指導(dǎo)，督促其持續(xù)增強實驗室檢測能力建設(shè)，切實提高檢測能力水平。同時，市級與所轄縣級實驗室檢測能力有一定的相關(guān)性，市級對檢測能力比對工作的重視程度與全市的比對結(jié)果優(yōu)劣密切相關(guān)，市級結(jié)果好，縣級結(jié)果也相對較好。這提示在加強對市級實驗室的檢測技術(shù)和管理能力培訓的同時，應(yīng)督促并通過市級將能力提升要求向縣級延伸，更好地發(fā)揮市級的引領(lǐng)和指導(dǎo)作用。