杭 晨，黃 飚，彭海霞，韋 欣，徐偉紅，盛慧明，李寧麗

（1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬同仁醫(yī)院，上海 200336；2.浙江理工大學(xué)生命科學(xué)與醫(yī)藥學(xué)院，浙江 杭州 310018；3.上海交通大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，上海 200025）

胃蛋白酶原是胃蛋白酶的非活性前體，經(jīng)電泳后，按遷移率可以分為7個組分，移動較快的組分1～5因免疫原性相近，被稱為胃蛋白酶原Ⅰ（pepsinogen Ⅰ，PGⅠ），組分6和7被稱為胃蛋白酶原Ⅱ（pepsinogen Ⅱ，PGⅡ）。胃蛋白酶原主要由胃細(xì)胞分泌，約有1%進(jìn)入血液循環(huán)。PGⅠ水平和胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ比值（pepsinogen Ⅰ/pepsinogenⅡ ratio，PGR）降低與胃黏膜萎縮有關(guān)，可作為胃癌高危人群的篩查指標(biāo)[1]，也可聯(lián)合胃泌素-17（gastrin-17，G-17）用于健康人群的早期胃癌篩查[2]。PGⅠ水平升高與消化性潰瘍有關(guān)[3]。根據(jù)胃鏡下的胃癌形態(tài)，早期胃癌可分為息肉型、平坦型和潰瘍型，中晚期胃癌可分為息肉型、潰瘍型和浸潤型，潰瘍型胃癌一般呈現(xiàn)為深凹型或皿狀的潰瘍。目前，用于胃蛋白酶原檢測的方法主要有酶聯(lián)免疫吸附法、化學(xué)發(fā)光法和時間分辨免疫熒光法（time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA）等。本研究擬探討TRFIA和化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法（chemiluminescence microparticle immunoassay，CMIA）檢測胃蛋白酶原的相關(guān)性及在胃癌診斷中的價值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2010年1月—2016年12月上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬同仁醫(yī)院行胃鏡檢查的患者547例，其中男274例、女273例，年齡18～80歲。根據(jù)胃鏡檢查結(jié)果分為非萎縮性胃炎72例、非萎縮性胃炎伴其他病理病變232例（病理診斷為非萎縮性胃炎，并伴有腸化生、急性活動期、息肉、糜爛等）、萎縮性胃炎42例、上皮內(nèi)瘤變15例、消化性潰瘍82例、胃癌104例（潰瘍型胃癌43例，其他型胃癌61例）。分別采用TRFIA和CMIA檢測其中447例患者的血漿PGⅠ、PGⅡ水平。本研究經(jīng)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬同仁醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 樣本收集及處理 采集所有對象靜脈血3～5 mL，肝素鋰抗凝，2 400×g離心8 min，分離血漿并分裝于Eppendorf管中，保存于-80 ℃中，統(tǒng)一檢測，避免反復(fù)凍融。

1.2.2 TRFIA 采用TRFIA檢測血漿PGⅠ、PGⅡ水平并計算PGR，檢測儀器為Auto DELFIA1235 TRFIA全自動時間分辨熒光免疫分析系統(tǒng)（美國PE公司），試劑盒購自無錫市江原實業(yè)技貿(mào)總公司。

1.2.3 CMIA 采用ARCHITECT i2000SR全自動免疫分析系統(tǒng)（美國雅培公司）及配套試劑（CMIA）檢測血漿PGⅠ、PGⅡ水平，并計算PGR。

1.2.4 胃鏡檢查 所有對象均于采血后1周內(nèi)接受胃鏡檢查，檢查醫(yī)師對血漿檢查結(jié)果不知情，胃鏡檢查發(fā)現(xiàn)病變時均采集圖像，對可疑部位留取組織進(jìn)行病理檢查。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0、Graphpad 6.01和MedCalc 19.1軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。呈非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以中位數(shù)（M）[四分位數(shù)（P25～P75）]表示，組間比較采用Mann-Whitney秩和檢驗。采用Pearson相關(guān)性分析評估2種方法之間的相關(guān)性，采用Passing-Bablok回歸分析評估2種方法檢測PGⅠ高值樣本的一致性。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評估PGR診斷胃癌和潰瘍型胃癌的效能。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TRFIA和CMIA檢測結(jié)果的相關(guān)性分析

采用TRFIA和CMIA檢測447例行胃鏡檢查的患者的血漿PGⅠ、PGⅡ水平，結(jié)果見表1。2種方法的PGⅠ和PGⅡ檢測結(jié)果均呈正相關(guān)（r值分別為0.894、0.982，P<0.05），見圖1。

表1 TRFIA和CMIA檢測血漿PGⅠ、PGⅡ的結(jié)果 M（P25～P75）

圖1 TRFIA和CMIA檢測PGⅠ和PGⅡ的相關(guān)性分析

2.2 TRFIA與CMIA檢測PGⅠ高值樣本的一致性分析

將TRFIA檢測PGⅠ≥240 ng/mL的樣本作為PGⅠ高值樣本，共101例。經(jīng)Passing-Bablok回歸分析，回歸方程均不滿足同時截距（a）=0、斜率（b）=1，且均有數(shù)值落在95%可信區(qū)間（confidence interval，CI）外。TRFIA與CMIA檢測PGⅠ高值樣本的一致性較差。見表2、圖2。

表2 TRFIA與CMIA檢測PGⅠ、PGⅡ及PGR的Passing-Bablok回歸分析結(jié)果

圖2 TRFIA與CMIA檢測PGⅠ高值（TRFIA檢測PGⅠ≥240 ng/mL）樣本的一致性分析

2.3 消化性潰瘍患者與胃癌患者血漿PGⅠ、PGⅡ水平及PGR的比較

采用TRFIA檢測血漿PGⅠ、PGⅡ水平，并計算PGR。與消化性潰瘍組比較，胃癌組血漿PGⅠ水平及PGR顯著降低，潰瘍型胃癌組PGR顯著降低（P<0.05），其他型胃癌組血漿PGⅠ水平顯著降低（P<0.05）。潰瘍型胃癌組血漿PGⅡ水平及PGR顯著高于其他型胃癌組（P<0.05）。

表2 消化性潰瘍組和胃癌組血漿PGⅠ、PGⅡ水平及PGR的比較 M（P25～P75）

2.4 PGR診斷胃癌和潰瘍型胃癌的效能

以非萎縮性胃炎患者為陰性，胃癌患者或潰瘍型胃癌患者為陽性，采用ROC曲線進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，PGR診斷潰瘍型胃癌的曲線下面積（area under curve，AUC）為0.711，最佳臨界值為18.20，敏感性為72.1%，特異性為70.8%；診斷胃癌的AUC為0.797，最佳臨界值為18.37，敏感性為79.8%，特異性為70.8%。見圖3。

圖3 PGR診斷潰瘍型胃癌和胃癌的ROC曲線

3 討論

根據(jù)2018年全球癌癥統(tǒng)計報告，胃癌死亡率居常見癌癥的第3位[4]。在我國，胃癌居常見癌癥的第2位[5]。目前，我國胃癌的篩查依賴于機(jī)會性篩查[6]，主要為有創(chuàng)傷性的胃鏡取樣活檢和病理檢查。TRFIA具有高靈敏度、寬量程等優(yōu)點，其他方法學(xué)檢測PGⅠ的線性范圍上限一般為200 ng/mL，而TRFIA的線性范圍上限可達(dá)300 ng/mL，因此測定高濃度PGⅠ時，無需稀釋。但因TRFIA中的示蹤物鑭系元素在水中不穩(wěn)定，故檢測時須加入增強(qiáng)劑使其穩(wěn)定。因高濃度的PGⅠ（≥240 ng/mL）在胃癌和消化性潰瘍中有較高的檢出率[7]，故本研究對高濃度區(qū)間的PGⅠ進(jìn)行研究，并與CMIA進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示，2種方法之間PGⅠ和PGⅡ的檢測結(jié)果均呈正相關(guān)（r值分別為0.894、0.982，P<0.05），相關(guān)性良好。但TRFIA與CMIA檢測PGⅠ高值（TRFIA檢測PGⅠ≥240 ng/mL）樣本的一致性較差。有研究結(jié)果顯示，TRFIA檢測PGⅠ、PGⅡ的結(jié)果與免疫放射法呈正相關(guān)（r值分別為0.926、0.959）[8]。

趙縝等[9]的研究結(jié)果顯示，消化性潰瘍患者血中PGⅠ水平顯著增高。本研究結(jié)果顯示，消化性潰瘍組血漿PGⅠ水平顯著高于其他各組（P<0.05），潰瘍型胃癌組血漿PGⅠ水平高于其他型胃癌組（P<0.05）。因此，PGⅠ可作為胃黏膜破損的生物標(biāo)志物。

有研究結(jié)果顯示，胃癌患者PGⅡ水平會顯著升高[10]，PGR可提示胃黏膜萎縮[11]?！吨袊拈T螺桿菌根除與胃癌防控的專家共識意見（2019年，上海）》[12]中將PGR降低作為胃癌的篩查標(biāo)準(zhǔn)。本研究結(jié)果顯示，潰瘍型胃癌組血漿PGⅡ水平顯著低于其他型胃癌組（P<0.05）。潰瘍型胃癌組和其他型胃癌組PGR均低于消化性潰瘍組（P<0.05），但潰瘍型胃癌組的下降幅度不及其他型胃癌組明顯。ROC曲線分析結(jié)果顯示，PGR診斷潰瘍型胃癌的AUC為0.711，最佳臨界值為18.20，敏感性為72.1%，特異性為70.8%；診斷胃癌的AUC為0.797，最佳臨界值為18.37，敏感性為79.8%，特異性為70.8%。提示PGR對潰瘍型胃癌有一定的診斷價值。

因PGR在潰瘍型胃癌診斷中具有一定的診斷價值，而潰瘍型胃癌組血漿PGⅠ水平又顯著高于其他型胃癌組，故二者聯(lián)檢可能會降低潰瘍型胃癌的漏檢率，但本研究的樣本量較小，后續(xù)將擴(kuò)大樣本量加以確認(rèn)。

綜上所述，采用TRFIA檢測血漿PGⅠ、PGⅡ水平簡便、快速，與CMIA的相關(guān)性較好，且該方法的檢測上限高于CMIA。PGR對潰瘍型胃癌有一定的診斷價值。由于本研究樣本量較小，相關(guān)結(jié)論尚需大樣本量研究進(jìn)一步證實，以便確定潰瘍型胃癌的篩查標(biāo)準(zhǔn)。