李婷婷 戴好富 蔡彩虹 郭志凱 夏志輝 曾艷波

摘? 要：本研究以冰菜（Mesembryanthemum crystallinum L.）為實(shí)驗(yàn)材料，運(yùn)用多種柱色譜和波譜技術(shù)，從冰菜乙醇提取物的乙酸乙酯和正丁醇相中共分離鑒定得到了11個(gè)單體化合物，其中苯丙素類化合物2個(gè)，分別是順式對(duì)羥基肉桂酸（化合物4）、阿魏酸（化合物3）;生物堿類化合物2個(gè)，分別是煙酸（化合物6）、ethane-1，2-diyl dinicotinate（化合物7）;糖苷類化合物5個(gè)，分別是2-ethoxy-5-（hydroxymethyl） tetrahydrofuran-3，4-diol（化合物5）、3，4，5-trihydroxy- 6-（hydroxymethyl）tetrahydro-2H-pyran-2-yl（E）-3-（4-hydroxy-3-methoxyphenyl） acrylate（化合物8）、（E）-2-（hydroxymethyl）- 6-（4-（3-hydroxyprop-1-en-1-yl）-2-methoxyphenoxy） tetrahydro-2H-pyran-3，4，5-triol（化合物9）、6-（1R，2S-2-hydroxy-4- （S，E-3-hydroxybut-1-en-1-yl）-3，5，5-tri?methylcyclohex-3-en-1-yl）oxy-5-（hydroxymethyl） tetrahydro-2H-pyran-2，3，4-triol（化合物10）、E-4-hydroxy-3，5，5-trimethyl-4-（3-（（3，4，5-trihydroxy-6-（hydroxymethyl） tetrahydro-2H-pyran-2-yl）oxy）but-1-en- 1-yl） cyclohex-2-en-1-one（化合物11）;苯丙呋喃酮類化合物1個(gè)：黑麥草內(nèi)酯（化合物2）;甾體類化合物1個(gè)：β-谷甾醇（化合物1）。本研究豐富了冰菜中的化學(xué)成分，也為更好地開發(fā)利用冰菜的功能性成分提供理論依據(jù)，有利于冰菜的推廣種植。

關(guān)鍵詞：冰菜;乙醇提取物;化學(xué)成分;分離鑒定中圖分類號(hào)：S649 ?????文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Isolation and Identification of the Chemical Compositions of Ethyl Acetate and n-Butyl Alcohol Fractions of Ethanol Extract fromMesembryanthemum crystallinum

LI Tingting¹， DAI Haofu^2，3， CAI Caihong^2，3， GUO Zhikai^2，3， XIA Zhihui^1*， ZENG Yanbo^2，3*

1. College of Tropical Crops， Haina University， Haikou， Hainan 570228， China; 2. Hainan Provincial Key Laboratory for Functional Components Research and Utilization of Marine Bio-resources， Haikou， Hainan 571101， China; 3. Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology， Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences / Key Laboratory of Biology and Genetic Resources of Tropical Crops， Ministry of Agriculture & Rural Affairs， Haikou ， Hainan 571101， China

Abstract： In this paper， 11 monomer compounds were isolated and identified from the ethyl acetate and n-butyl alcohol fractions of ethanol extract fromMesembryanthemum crystallinumL with a variety of column chromatography and spectroscopic techniques. There were two propyl compounds： cis-p-hydroxycinnamic acid （4）， ferulic acid （3）， two alkaloid compounds： nicotinic acid （6）， ethane-1， 2-diyl Dinicotinate （7）， five glycosides： 2-ethoxy-5-（hydroxymethyl）- tetrahydrofuran-3，4-diol （5）， 3，4，5-trihydroxy-6-（hydroxymethyl）tetrahydro-2H-pyran-2-yl （E）-3-（4-hydroxy-3-methoxy-phenyl）acrylate （8）， （E）-2-（hydroxymethyl）-6-（4-（3-hydroxyprop-1-en-1-yl）-2-methoxyphenoxy）tetrahydro-2H-pyran-3， 4，5-triol （9）， 6-（（1R，2S）-2-hydroxy-4-（（S，E）-3-hydroxybut-1-en-1-yl）-3，5，5-trimethylcyclohex-3-en-1-yl）oxy）-5-（hyd?ro?x?ymethyl）tetrahydro-2H-pyran-2，3，4-triol （10）， （E）-4-hydroxy-3，5，5-trimethyl-4-（3-（（3，4，5-trihydroxy-6-（hydro?xy?me?????th???yl）t） etrahydro-2H-pyran-2-yl）oxy）but-1-en-1-yl）cyclohex-2-en-1-one （11）， one phenylpropanone： ryeganolide （2）， one steroidal compound：β-sitosterol （1）. The study would enrich the research on the chemical constituents inM. crystallinumL. and provide a theoretical basis for the better development of the functional components ofM. crystallinumL.

Keywords： Mesembryanthemum crystallinum; ethanol extract; chemical compositions; isolation and identification

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2020.06.023

冰菜（Mesembryanthemum crystallinum L.）屬于番杏科、日中花屬的一年生草本植物，又名冰葉日中花、冰草、冰花、水晶冰菜^[1]。冰菜原產(chǎn)于南非納米比沙漠等干旱地區(qū)，現(xiàn)在非洲、亞洲西部和歐洲等地區(qū)都有分布^[2]。國(guó)內(nèi)目前也在引種栽培冰菜，在云南、陜西、山東等地區(qū)已經(jīng)有了冰菜的規(guī)?；N植^[3]。因其葉子和莖的表面有大量凸起的鹽囊泡細(xì)胞，在陽(yáng)光照射下反射光線，看起來(lái)像冰晶一樣美麗而得名^[4]。近年來(lái)，隨著生活水平不斷提高，人們對(duì)具有保健作用的蔬菜越來(lái)越重視。冰菜中含有多種碳水化合物以及有機(jī)酸、酚類化合物、天然蘋果酸、黃酮類化合物等，還含有鉀、鈣、鈉等多種礦物質(zhì)成分，是具有高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的功能性蔬菜。它具有清除自由基和抗氧化活性、促進(jìn)代謝、預(yù)防脂肪肝和動(dòng)脈硬化、減緩糖尿病等功效^[5-8]。

作為新興保健蔬菜的冰菜，弄清其各種化學(xué)成分，不僅有利于冰菜的推廣種植，更有利于冰菜的研發(fā)應(yīng)用，將冰菜的利益最大化。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)冰菜的研究主要集中在冰菜的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、栽培種植以及景天酸代謝方面^[9]，而對(duì)冰菜中化學(xué)成分的分離鑒定少有報(bào)道。國(guó)外研究者常把冰菜作為景天酸代謝分子遺傳研究的有用模型^[10]。Taybi等^[7]以80%甲醇為溶劑提取分離冰菜種子內(nèi)的碳水化合物及有機(jī)酸，測(cè)定了其中的淀粉酶活性，同時(shí)比對(duì)了相關(guān)的RNA序列及相關(guān)誘導(dǎo)蛋白。Hanen等^[5]進(jìn)行了冰菜的抗氧化和自由基清除活性以及酚類含量的測(cè)定，結(jié)果表明，冰菜中的酚類含量較少，但多酚含量和大多數(shù)抗氧化活性物質(zhì)呈平行趨勢(shì)，增強(qiáng)了酚類化合物在植物提取物中的抗氧化能力。Choi等^[11]研究了冰菜的提取物在體內(nèi)和體外的免疫調(diào)節(jié)活性，證實(shí)了冰菜提取物能通過(guò)增加巨噬細(xì)胞增殖，細(xì)胞因子分泌，iNOS表達(dá)和淋巴細(xì)胞增殖來(lái)啟動(dòng)先天免疫，能有效地增強(qiáng)免疫功能。Bouftira等^[12]也研究了冰菜粗提物存在抗氧化酶SOD和過(guò)氧化氫酶，具有清除自由基活性的功效。在國(guó)內(nèi)對(duì)冰菜的研究中，冰菜含有豐富的β-葡聚糖、肌醇和各種礦物質(zhì)，對(duì)糖尿病的治療有很好的作用，被作為一種新興的高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的功能性蔬菜進(jìn)行規(guī)模化種植^[13]。于麗艷^[14]文章中提到冰菜的晶體中含有天然的堿性植物鹽，對(duì)鈉敏感性高血壓、糖尿病、高血脂，以及免疫機(jī)能障礙等疾病都有明顯的治療作用。

冰菜具有很強(qiáng)的耐旱和耐鹽堿性，能在類似海水的水溶液中生長(zhǎng)^[10]。由于熱帶風(fēng)暴、臺(tái)風(fēng)、海潮等自然災(zāi)害和不合理的濱海養(yǎng)殖、曬鹽等人為活動(dòng)的影響，海南已成為我國(guó)鹽害受災(zāi)面積較大的省份之一^[15]。僅在2014年夏季，海南便有約2667?hm²農(nóng)田因臺(tái)風(fēng)而遭受海水倒灌^[16]，另外在樂東、東方一帶，由于長(zhǎng)期不合理的海水養(yǎng)殖、曬鹽等人為生產(chǎn)活動(dòng)，導(dǎo)致近667?hm²的土地受到嚴(yán)重的鹽漬化^[17]。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)^[18]，目前海南島已有54萬(wàn)hm²的農(nóng)用地受到鹽漬化影響，一般普通的經(jīng)濟(jì)作物和農(nóng)作物無(wú)法在鹽漬化的土地上正常生長(zhǎng)，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)受到嚴(yán)重的影響。因此，如何妥善處理、因地制宜地開發(fā)利用這些鹽漬化土地，對(duì)于實(shí)現(xiàn)海南耕地總面積的動(dòng)態(tài)平衡和土地資源的可持續(xù)利用具有重要意義^[19]。因此，在海南推廣種植冰菜，具有很強(qiáng)的實(shí)用價(jià)值，一方面冰菜可以改善大量荒廢的鹽漬化土地，減緩耕地壓力;另一方面，收獲的冰菜能夠增加海南人民經(jīng)濟(jì)收入，適當(dāng)?shù)馗纳泼裆１狙芯恳员藶檠芯繉?duì)象，運(yùn)用多種色譜和波譜技術(shù)對(duì)冰菜乙醇提取物乙酸乙酯和正丁醇相的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)的分離鑒定，一方面豐富了冰菜化學(xué)成分的研究;另一方面為更好地開發(fā)利用冰菜的功能性成分提供了重要的理論依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 試驗(yàn)材料? 冰菜樣品于2018年5月采自中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所的文昌耐鹽蔬菜種植基地。樣品保存于中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所B502實(shí)驗(yàn)室。

1.1.2? 儀器與設(shè)備? EYELA N-1300旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本東京理化器械株式會(huì)社）;安捷倫1260分析型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫科技有限公司）;AV-600（TMS內(nèi)標(biāo)）核磁共振波譜儀（德國(guó)Bruker）;Autospec 300質(zhì)譜儀（德國(guó)Bruker）;佰倫斯BL300電子計(jì)重秤（廈門佰倫斯電子科技有限公司）;BP221S萬(wàn)分之一分析天平（瑞士梅特勒-托利多儀器上海有限公司）;Q/BKYY31- 2000電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科技有限公司）;Spring-R超純水裝置（廈門銳思捷水純化技術(shù)有限公司）;Sephadex LH-20（德國(guó)默克公司）;小孔吸附樹脂（山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司）;薄層色譜硅膠板（GF₂₅₄）和柱色譜硅膠（200-300目）（青島海洋化工廠）。

1.1.3? 主要試劑? 分析純有機(jī)溶劑：乙酸乙酯、石油醚（60-90）、甲醇、氯仿（廣州化工和天津大茂公司）;濃硫酸（博濱嶺化工有限公司）。色譜溶劑：甲醇、乙腈（天津四友和天津康科德公司）。其他試劑均為重蒸工業(yè)試劑。核磁共振用氘代試劑：氘代氯仿、氘代DMSO（德國(guó)默克公司）。

1.2方法

1.2.1? 冰菜乙醇提取物的制備? 用閘刀將冰菜（50.0 kg）切成2～3 cm的小段，室溫下，將切好的冰菜置于塑料桶內(nèi)，用95%的食用酒精提取3次，將3次浸泡得到的提取液合并，用濾紙過(guò)濾掉殘?jiān)?，得到冰菜提取液，之后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀經(jīng)減壓濃縮得到提取物浸膏（200.0 g）。將提取物用超純水溶解，使其均勻分散成乳濁液，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，并分別經(jīng)減壓濃縮得到石油醚部分（96.6 g）、乙酸乙酯部分（18.0 g）、正丁醇部分（75.0 g）和水相部分，并選擇乙酸乙酯部分和正丁醇部分進(jìn)行分離。

1.2.2? 乙酸乙酯相化合物的分離? 將乙酸乙酯相浸膏（18.0 g）經(jīng)減壓硅膠柱色譜進(jìn)行分離，以氯仿-甲醇（1∶0～0∶1，V/V）梯度洗脫，濃縮后經(jīng)TLC薄層色譜檢測(cè)，合并顯色劑顯色和Rf值相同的部分，得13個(gè)餾分（Fr.1～13）。Fr.1（751.1 mg）經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行恒度洗脫，再經(jīng)硅膠柱色譜以石油醚-丙酮（100∶1、20∶1、10∶1、5∶1，V/V）為流動(dòng)相梯度洗脫，得到化合物1（2.0 mg）和化合物2（1.5?mg）。

Fr.4（0.8679 g）經(jīng)PR-18柱色譜以甲醇-水（0∶1～1∶0，V/V）系統(tǒng)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜分離，以甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，最后經(jīng)硅膠柱色譜以石油醚-乙酸乙酯（7.5∶1、7∶1，V/V）為流動(dòng)相洗脫得到化合物3（3.0 mg）。

Fr.6（1.9622 g）經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜以甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，再經(jīng)硅膠柱色譜以石油醚-丙酮（5∶1、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1，V/V）為流動(dòng)相洗脫得到化合物4（20.0 mg） 。

Fr.7（2.0659?g）經(jīng)PR-18柱色譜以甲醇-水（0∶1～1∶0，V/V）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，再經(jīng)一系列硅膠柱色譜洗脫得到化合物5（108.8?mg）、化合物6（9.1?mg）和化合物7（4.5?mg）。

1.2.3? 正丁醇相化合物的分離? 將正丁醇相浸膏（75.0 g）經(jīng)PR-18柱色譜以甲醇-水（0∶1～1∶0，V/V）系統(tǒng)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，濃縮后經(jīng)TLC薄層色譜檢測(cè)，合并顯色劑顯色和Rf值相同的部分，得8個(gè)餾分（Fr.1～8）。

Fr.2（7.8556 g）經(jīng)減壓硅膠柱色譜以氯仿-甲醇（1∶0～0∶1，V/V）梯度洗脫，再經(jīng)Sephadex LH- 20凝膠柱色譜甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，再經(jīng)過(guò)一系列硅膠柱色譜和HPLC半制備高效液相色譜洗脫得到化合物8（325.5?mg）、化合物9（1.2?mg）、化合物10（3.5?mg）和化合物11（13.1?mg）。

2? 結(jié)果與分析

2.1冰菜乙醇提取物乙酸乙酯相分離結(jié)果

運(yùn)用各種柱色譜以及半制備型高效液相色譜等分離技術(shù)，從冰菜乙醇提取物乙酸乙酯相中分離得到7個(gè)化合物，分別為為b-谷甾醇（化合物1）、黑麥草內(nèi)酯（化合物2）、阿魏酸（化合物3）、順式對(duì)羥基肉桂酸（化合物4）、2-ethoxy-5-（hy?droxymethyl） tetrahydrofuran-3，4- diol（化合物5）、煙酸（化合物6）、ethane-1，2-diyl dinicotinate（化合物7）。化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

2.2冰菜乙醇提取物正丁醇相分離結(jié)果

從正丁醇相中分離得到4個(gè)化合物，分別為3，4，5-trihydroxy-6-（hydroxymethyl）tetrahydro-2H-pyran-2-yl （E）-3-（4-hydroxy-3-methoxyphenyl） acr?ylate（化合物8）、（E）-2-（hydroxymethyl）-6-（4-（3- hydroxy?prop-1-en-1-yl）-2-methoxy?pheno?xy） tetrahydro-2H-pyran-3，4，5-triol（化合物9）、6-（（（1R， 2S）- 2-hydroxy-4-（（S，E）-3-hydroxybut-1-en-1-yl）-3，5，5- trimethylcyclohex-3-en-1-yl）oxy）-5-（hydroxymethyl） tetrahydro-2H-pyran-2，3，4-triol（化合物10）、（E）-4-hydroxy-3，5，5-tri?methyl-4-（3-（（3，4，5-trihyd?roxy-6-（hydroxymethyl） tetrahydro-2H- pyran-2-yl）oxy）but-1-en-1-yl）cycloh?ex-2-en-1-one（化合物11）?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)見圖2。

化合物4：淡黃色結(jié)晶;ESI-MSm/z：165 [M+H]⁺;分子式為C₉H₈O₃。¹H NMR （500 MHz， CD₃OD）δ： 7.62 （1H， d，J= 8.5 Hz， H-2）， 7.62 （1H， d，J= 8.5 Hz， H-6）， 6.83 （1H， d，J= 13.0 Hz， H-7）， 6.75 （1H， d，J= 8.5 Hz， H-3）， 6.75 （1H， d，J= 8.5 Hz， H-5）， 5.78 （1H， d，J= 12.5 Hz， H-8）。¹³C NMR （125 MHz， CD₃OD）δ： 128.0 （C-1）， 133.4 （C-2）， 115.8 （C-3）， 159.8 （C-4）， 116.0 （C-5）， 133.0 （C-6）， 144.1 （C-7）， 117.3 （C-8）， 170.3 （C-9）。根據(jù)波譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)分析，結(jié)合文獻(xiàn)[23]比對(duì)，鑒定化合物4為順式對(duì)羥基肉桂酸。

化合物5：淡黃色油狀物;ESI-MSm/z：179 [M+H]⁺;分子式為C₇H₁₄O₅。¹H NMR （500 MHz， CD₃OD）δ： 4.87 （1H， d，J = 1.5 Hz， H-1）， 3.95 （1H， dd，J = 3.5， 1.5 Hz， H-3）， 3.93 （1H， m， H-2）， 3.84 （1H， dd，J = 6.5， 3.5 Hz， H-4）， 3.77 （1H， m， H-6a）， 3.76 （1H， m， H-5a）， 3.65 （1H， dd，J = 12.0， 5，5 Hz， H-5b）， 3.51 （1H， dq，J = 10.0， 7，0 Hz， H-6b）， 1.22 （3H， t，J = 7.0 Hz， H-7）。¹³C NMR （125 MHz， CD₃OD）δ： 109.2 （C-1）， 85.1 （C-2）， 83.5 （C-3）， 78.5 （C-4）， 62.9 （C-5）， 64.3 （C-6）， 15.5 （C-7）。根據(jù)波譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)分析，結(jié)合文獻(xiàn)[24]比對(duì)，鑒定化合物5為2-ethoxy-5-（hydroxymethyl）-tetrah?y?dro?furan-3，4-diol。

化合物6：白色膏狀物;ESI-MSm/z：124 [M+H]⁺;分子式為C₆H₅NO₂。¹H NMR （500 MHz， CD₃OD）δ： 9.03 （1H， d，J= 2.5 Hz， H-2）， 8.70 （1H， dd，J= 50， 1.5 Hz， H-3）， 8.30 （1H， dt，J= 8.0， 2.0 Hz， H-4）， 7.56 （1H， dd，J= 8.0， 4.5 Hz， H-6）。¹³C NMR （125 MHz， CD₃OD） δ： 169.8 （-COOH）， 152.8 （C-2）， 125.1 （C-3）， 137.3 （C-4）， 131.4 （C-5）， 149.4 （C-6）。根據(jù)波譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)分析，結(jié)合文獻(xiàn)[22]比對(duì)，鑒定化合物6為煙酸。

化合物7：白色粉末狀;ESI-MSm/z：273 [M+H]⁺;分子式為C₁₄H₁₂N₂O₄。¹H NMR （500 MHz， CD₃OD）δ： 9.02 （2H， d，J= 2.5 Hz， H-2， H-2?）， 8.71 （2H， dd，J= 5.0， 1.5 Hz， H-3， H-3?）， 8.29 （2H， dt，J= 7.9， 2.0 Hz， H-4， H-4?）， 7.56 （2H， dd，J= 8.0， 4.8 Hz， H-6， H-6?）， 4.89 （4H， s， H-8， H-8?）。¹³C NMR （125 MHz， CD₃OD）δ： 152.9 （2C-2， 2?）， 125.2 （2C-3， 3?）， 137.1 （2C-4， 4?）， 131.8 （2C-5， 5?）， 149.2 （2C-6， 6?）， 168.0 （2C-7， 7?）， 64.7 （2C-8， 8?）。根據(jù)波譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)分析，結(jié)合文獻(xiàn)[25]比對(duì)，鑒定化合物7為ethane-1，2-diyl dinicotinate。

化合物8：淡黃色晶體;ESI-MSm/z：357 [M+H]⁺;分子式為C₁₆H₂₀O₉。¹H NMR （500 MHz， CD₃OD）δ： 7.74 （1H， d，J= 16.0 Hz， H-7）， 7.19 （1H， brs， H-5）， 7.10 （1H， brd，J= 8.0 Hz， H-6）， 6.83 （1H， d，J= 8.0 Hz， H-2）， 6.42 （1H， d，J= 16.0 Hz， H-8）， 5.59 （1H， d，J= 8.0 Hz， H-1?， 3.89 （3H， s， 3-OMe）， 3.87 （1H， d，J= 11.5 Hz， Ha-6?）， 3.72 （1H， dd，J= 12.0， 5.0 Hz， Hb-6?）， 3.38 – 3.50 （4H， m， H-2? – H-5`）.¹³C NMR （125 MHz， CD₃OD） δ： 127.5 （C-1）， 116.5 （C-2）， 149.4 （C-3）， 150.9 （C-4）， 111.8 （C-5）， 124.4 （C-6）， 148.3 （C-7）， 114.7 （C-8）， 167.8 （C-9）， 95.8 （C-1?）， 74.0 （C-2?）， 78.0 （C-3?）， 71.1 （C-4?）， 78.8 （C-5?）， 62.3 （C-6?）， 56.4 （3-OMe）。根據(jù)波譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)分析，結(jié)合文獻(xiàn)[26]比對(duì)，鑒定化合物8為 3，4，5-trihydroxy-6-（hydroxymethyl）te- trahydro-2H-pyran-2-yl （E）-3-（4-hydroxy-3-metho- xyphenyl）acrylate。

化合物9：淡黃色晶體;ESI-MSm/z：343 [M+H]⁺;分子式為C₁₆H₂₂O₈。¹H NMR （500?MHz， CD₃OD） δ： 7.71 （1H， d，J = 16.0Hz， H-7）， 7.20 （1H， s， H-2）， 7.10 （1H， d，J= 8.5 Hz， H-5）， 6.83 （1H， d，J=?8.0 Hz， H-6）， 6.46 （1H， dt，J= 16.0， 6.0 Hz， H-8）， 5.34 （1H， d，J= 3.5 Hz， H-1?）， 4.70 （1H， m， H-3?）， 3.97 （1H， m， Ha-9）， 3.90 （3H， s， 3-OMe）， 3.87 （1H， m， Ha-6?）， 3.83 （1H， m， H-4?）， 3.75 （1H， m， Hb-9）， 3.69 （1H， m， Hb-6?）， 3.58 （1H， m， H-2?）， 3.46 （1H， m， H-5?）.¹³C NMR （125 MHz， CD₃OD）δ： 127.8 （C-1）， 111.7 （C-2）， 150.0 （C-3）， 149.4 （C-4）， 124.1 （C-5）， 147.3 （C-6）， 116.5 （C-7）， 115.3 （C-8）， 62.6 （C-9）， 91.4 （C-1?）， 73.5 （C-2?）， 75.5 （C-3?）， 73.0 （C-4?）， 71.9 （C-5?）， 62.3 （C-6?）， 57.0 （3-OMe）。根據(jù)波譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)分析，結(jié)合文獻(xiàn)[26]比對(duì)，鑒定化合物9為（E）-2-（hydrox?ymethyl）-6-（4- （3-hydro?xy?prop-1-en-1-yl）-2-methox-yphenoxy）

tetrahydro-2H-pyran-3，4，5-triol。

化合物10：無(wú)色油狀物;ESI-MSm/z：389 [M+H]⁺;分子式為C₁₉H₃₂O₈。¹H NMR （500 MHz， CD₃OD）δ： 6.06 （1H， d，J= 16.0 Hz， H-7）， 5.55 （1H， ddd，J= 2.5， 6.0， 16.0 Hz， H-8）， 4.51 （1H， d，J= 7.5 Hz， H-14）， 4.33 （1H， q，J= 6.5 Hz， H-9）， 4.09 （1H， d，J= 3.5 Hz， H-4）， 3.99 （1H， dt，J= 3.5， 13.0 Hz， H-3）， 3.86 （1H， dd，J= 1.5， 12.0 Hz， Ha -19）， 3.70 （1H， dd，J= 5.5， 12.0 Hz， Hb-19）， 1.89 （1H， d，J= 4.5 Hz， Ha-2）， 1.85 （3H， s， H-13）， 1.60 （1H， ddd，J= 1.0， 3.5， 12.0 Hz， Hb-2）， 1.27 （3H， d，J= 6.5 Hz，

H-10）， 1.08 （3H， s， H-11）， 1.04 （3H， s， H-12）.¹³C NMR （125 MHz， CD₃OD）δ： 37.8 （C-1）， 40.0 （C-2）， 76.1 （C-3）， 70.1 （C-4）， 127.9 （C-5）， 143.0 （C-6）， 126.7 （C-7）， 140.7 （C-8）， 69.4 （C-9）， 23.8 （C-10）， 30.2 （C-11）， 27.7 （C-12）， 19.9 （C-13）， 102.7 （C-14）， 75.3 （C-15）， 78.1 （C-16）， 71.6 （C-17）， 78.0 （C-18）， 62.7 （C-19）。根據(jù)波譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)分析，結(jié)合文獻(xiàn)[27]比對(duì)，鑒定化合物10為6-（（（1R，2S）-2- hydroxy-4-（（S，E）-3-hydroxybut-1-en-1-yl）-3，5，5-tri?methylcyclohex-3-en-1-yl）oxy）-5-（hydroxymethyl） tetrahydro-2H-pyran-2，3，4-triol。

化合物11：無(wú)色油狀物;ESI-MSm/z： 387 [M+H]⁺;分子式為C₁₉H₃₀O₈。¹H NMR （500 MHz， CD₃OD）δ： 5.87 （1H， br s， H-4）， 5.87 （1H， br s， H-7）， 5.86 （1H， br s， H-8）， 4.45 （1H， quint，J= 6.0 Hz， H-9）， 4.35 （1H， d，J= 8.0 Hz， H-1?）， 3.86 （1H， dd，J?=?2.0， 12.0 Hz， Ha-6?）， 3.64 （1H， dd，J= 5.5， 12.5 Hz， Hb -6?）， 3.35 （1H， d，J= 8.5 Hz， H-3?）， 3.27 （1H， d，J = 9.5 Hz， H-4?）， 3.24 （1H， m， H-5?）， 3.19 （1H， dd， J= 8.0， 9.0 Hz， H-2?）， 2.54 （1H， d，J = 17.0 Hz， Ha-2）， 2.17 （1H， d， J= 17.0 Hz， Hb-2）， 1.92 （3H， d，J= 1.0 Hz， 5-Me）， 1.30 （3H， d，J = 6.0 Hz， 9-Me）， 1.04 （3H， s， 1-Me）， 1.03（3H， s， 1-Me）.¹³C NMR （125 MHz， CD₃OD）δ： 42.4 （C-1）， 50.7 （C-2）， 201.2 （C-3）， 127.2 （C-4）， 167.3 （C-5）， 80.0 （C-6）， 131.5 （C-7）， 135.3 （C-8）， 77.3 （C-9）， 23.4 （1-Me）， 24.7 （1-Me）， 19.6 （5-Me）， 21.2 （9-Me）， 102.7 （C-1?）， 75.2 （C-2?）， 78.1 （C-3?）， 71.6 （C-4?）， 78.0 （C-5?）， 62.8 （C-6?）。根據(jù)波譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)分析，結(jié)合文獻(xiàn)[28]比對(duì)，鑒定化合物11為（E）- 4-hydroxy-3，5， 5-trimethyl-4-（3-（（3，4，5-trihydroxy- 6-（hydroxymethyl）tetrahydro-2H-pyran-2-yl）oxy）

but-1-en-1-yl）cyc?lohex-2-en-1-one。

3? 討論

本研究通過(guò)各種色譜技術(shù)對(duì)冰菜乙醇提取物乙酸乙酯和正丁醇相進(jìn)行了分離，從中分離得到11個(gè)單體化合物，其中苯丙素類化合物2個(gè)，分別是順式對(duì)羥基肉桂酸（化合物4）、阿魏酸（化合物3）。在已有的文獻(xiàn)報(bào)道中，肉桂酸類似物大量存在于肉桂（Cinnamomum cassiaPresl）中，肉桂作為一種藥食兩用的天然產(chǎn)物，除了具有調(diào)料，增味等食用功能外，還具有減輕疼痛，抑制血小板聚集等多種藥理活性^[29-30];生物堿類化合物2個(gè)，分別是煙酸（化合物6）、ethane-1，2-diyl dinicotinate（化合物7），生物堿是天然產(chǎn)物中重要的有效成分之一，大多數(shù)生物堿都具有一定的生物活性，其中煙酸及其類似物在臨床上廣泛用于血管擴(kuò)張、治療偏頭痛以及緩解糙皮病癥狀，另外煙酸的合成工藝完善，常被作為醫(yī)藥中間體，用于合成多種醫(yī)藥^[31];糖苷類化合物5個(gè)，分別是2-ethoxy-5-（hydroxy?methyl）tetrahydrofuran-3，4- diol（化合物5）、3，4，5-trihy?droxy-6-（hydroxymethyl） tetrahydro-2H-pyran-2-yl（E）-3-（4-hydroxy-3-meth?oxyphenyl）acrylate（化合物8）、（E）-2-（hydroxy- methyl）-6-（4-（3-hydroxyprop-1-en-1-yl）-2-methoxyphenoxy）tetrahydro-2H-pyran-3，4，5-triol（化合物9）、6-（（（1R，2S）-2-hydroxy-4-（（S，E）-3-hyd?roxybut-1-en- 1-yl）-3，5，5-trimethylcyclohex-3-en-1-yl）oxy）-5-（hydroxymethyl）tetrahydro-2H-pyran-2，3，4-triol（化合物10）、（E）-4-hydroxy- 3，5，5-trimethyl-4-（3-（（3，4，5- trihydroxy-6-（hydroxymethyl）tetrahydro-2H-pyran- 2-yl）oxy）but-1-en-1-yl）cyclohex-2-en-1-one（化合物11）;苯丙呋喃酮類化合物1個(gè)：黑麥草內(nèi)酯（化合物2）;甾體類化合物1個(gè)：b-谷甾醇（化合物1），靳若周等^[32]利用GC-MS，以鷹嘴豆為研究對(duì)象，指出鷹嘴豆的甾醇提取物中b-谷甾醇的含量達(dá)到80.43%，并對(duì)金黃色葡萄球菌等革蘭

氏陰性菌具有較好的抑菌效果。

另外，榮海燕^[33]和劉慧穎等^[34]分別在2016年和2019年利用不同濃度的NaCl水溶液，報(bào)道了冰菜雖然是耐鹽植物，但是鹽分過(guò)高（NaCl溶液濃度>0.7%），會(huì)顯著抑制冰菜種子的萌發(fā)率（<20%），而在進(jìn)一步研究中發(fā)現(xiàn)，在最大程度保證冰菜營(yíng)養(yǎng)成分（總黃酮含量）和適宜食用（可溶性膳食纖維含量）的前提下，NaCl溶液的濃度不宜超過(guò)0.3%。徐微風(fēng)等^[35]也報(bào)道了類似的研究成果，他們利用不同濃度的海水（0%～100%）種植冰菜，然后測(cè)量葉片中的含水量及葉片表面的囊泡數(shù)量，得出隨著澆灌用水中海水比例的增大，冰菜的含水量逐漸降低，囊泡數(shù)量會(huì)極大地增加，從而損害冰菜的食用口感。這些研究對(duì)因地制宜推廣冰菜種植有著重要的指導(dǎo)意義，例如為了盡可能不損害冰菜的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在種植冰菜前，要對(duì)鹽堿地的鹽濃度進(jìn)行準(zhǔn)確的調(diào)研。

當(dāng)然，除了鹽分會(huì)影響冰菜的生長(zhǎng)及品質(zhì)外^[36-37]，氣溫同樣是影響冰菜種植的重要因素之一^[38]。由于冰菜不喜高溫和嚴(yán)寒，適宜生長(zhǎng)溫度為15～30?℃，所以不同地區(qū)，冰菜的種植季節(jié)也不相同，南方浙江地區(qū)一般是9月中旬開始播種到12月初開始采收^[39]，北方大連地區(qū)則是3月初開始播種到5月下旬開始采收^[40]。海南省全年溫度均能滿足冰菜的生長(zhǎng)，但是夏季高溫需要注意大棚遮陽(yáng)、降溫。

本研究結(jié)果可以加深對(duì)冰菜的化學(xué)成分的了解，也為研究利用冰菜提供了更多的數(shù)據(jù)，但是，冰菜作為一款耐鹽蔬菜，在本次的研究?jī)?nèi)容中，并沒有找到與冰菜耐鹽性有關(guān)的化合物，這說(shuō)明本研究?jī)?nèi)容還不夠完善，分離得到的化合物只是冰菜乙醇提取物乙酸乙酯相和正丁醇相中的一部分，更進(jìn)一步的研究，例如冰菜乙醇提取物石油醚相的化學(xué)成分有待進(jìn)一步去分離鑒定，而分離的相關(guān)化合物的生物學(xué)特性也有待探索。如果可以充分了解冰菜的化學(xué)成分，找到與其生理、生化特性相關(guān)的化合物，不僅可以提高對(duì)冰菜營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的利用，也將為緩解海南省甚至全國(guó)土地鹽漬化難題提供一個(gè)可行的新途徑。

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