郝一影，袁竹青，陳 珂，蘇紅麗，岳艷榮

(河南省化工研究所有限責(zé)任公司，河南 鄭州 450052)

0 前言

吡蟲啉(imidacloprid)是一種煙堿類的超高效殺蟲劑，有很高的觸殺和胃毒作用，使害蟲因中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常信號的傳導(dǎo)受阻而致死[1]?？┚?fludioxonil)屬于苯基吡咯類殺菌劑，咯菌腈作用后，和葡萄糖磷?；P(guān)聯(lián)的轉(zhuǎn)移被抑制，進(jìn)一步使真菌菌絲體的生長被抑制，最終引起病菌死亡，從而起到抑菌和殺菌的作用[2]。嘧菌酯(Azoxystrobin)屬于甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，可以直接進(jìn)行莖葉噴霧，也可以用來進(jìn)行種子和土壤處理，具有高效、廣譜的特點(diǎn)[3]。將吡蟲啉、咯菌腈、嘧菌酯混合制成種子處理懸浮種衣劑，能夠發(fā)揮較高的協(xié)同增效作用，與單劑或者其它的復(fù)配種子處理組合物作比較，殺菌作用不僅效果快、防治范圍增大，且持續(xù)時間長，還可以延緩產(chǎn)生病蟲害的抗藥性，實(shí)現(xiàn)了降低成本的同時又能夠提高防治效果。目前關(guān)于吡蟲啉、咯菌腈和嘧菌酯單劑的分析方法已有報(bào)道，但有關(guān)吡蟲啉、咯菌腈和嘧菌酯三者復(fù)配的種子處理懸浮劑的高效液相色譜分析方法，目前還未發(fā)現(xiàn)有公開報(bào)道[4-7]。本文采用高效液相色譜法，使用C18色譜柱對吡蟲啉·咯菌腈·嘧菌酯種子處理懸浮劑中的3種有效成分同時進(jìn)行定量分析。該方法操作簡單方便，分離效果好。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑和溶液

乙腈，色譜純；純凈水。標(biāo)準(zhǔn)品有：吡蟲啉，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99.1%；咯菌腈，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99.5%；嘧菌酯，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.5%；標(biāo)準(zhǔn)品均由國家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心提供。7%吡蟲啉·咯菌腈·嘧菌酯種子處理懸浮種衣劑，河南瀚斯作物保護(hù)有限公司。

1.2 儀器

Agilent1200高效液相色譜儀；ZORBAX SB-C18(5 μm，250 mm×4.5 mm )色譜柱；超聲波清洗器；過濾膜(0.45 μm孔徑)。

1.3 色譜操作條件

室溫條件下，體積比55∶45的乙腈-磷酸水溶液(pH值=3)作流動相，以1.0 mL/min的流速進(jìn)樣5 μL，在210 nm波長進(jìn)行測試，各組分的保留時間分別為吡蟲啉約3.4 min，咯菌腈約10.9 min，嘧菌酯約12.1 min。標(biāo)樣和試樣典型的液相色譜圖見圖1、圖2。

圖1 吡蟲啉、咯菌腈、嘧菌酯標(biāo)樣液相色譜圖

圖2 7%吡蟲啉·咯菌腈·嘧菌酯懸浮種衣劑液相色譜圖

1.4 測定步驟

1.4.1標(biāo)樣溶液的配制稱取吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)品0.090 g(精確至0.000 2 g)，嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品0.012 g(精確至0.000 2 g)，咯菌腈標(biāo)準(zhǔn)品0.003 g(精確至0.000 2 g)放置在同一個100 mL容量瓶里面，加入80 mL乙腈后放置于超聲波清洗器中超聲使其充分溶解，取出后冷卻至室溫，用乙腈定容，搖勻后靜置、備用。

1.4.2試樣溶液的配制

稱取1.50 g 樣品(精確至0.000 2 g)放置在100 mL容量瓶里面，加入80 mL乙腈后放置于超聲波清洗器中超聲使其充分溶解，取出后冷卻至室溫，用乙腈定容，搖勻后靜置，過濾、備用。

1.4.3測定

在1.3所述條件下，當(dāng)儀器基線運(yùn)行平穩(wěn)后，標(biāo)樣溶液被連續(xù)注入幾次，比較各次的特征色譜峰的保留時間和峰面積，如果相鄰的兩幀的保留時間和峰面積的變化均小于1.5%，那么可以進(jìn)樣進(jìn)行測定，測試按照標(biāo)樣、試樣、試樣、標(biāo)樣的順序進(jìn)行。

1.5 計(jì)算

分別對測得的兩幀標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液的各個特征峰峰面積進(jìn)行平均計(jì)算后，按下式計(jì)算吡蟲啉、咯菌腈、嘧菌酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(X)

式中：A1為標(biāo)樣溶液中吡蟲啉(或咯菌腈、嘧菌酯)特征峰峰面積的平均值；A2為試樣溶液中吡蟲啉(或咯菌腈、嘧菌酯)特征峰峰面積的平均值；m1為吡蟲啉(或咯菌腈、嘧菌酯)標(biāo)樣的質(zhì)量(g)；m2為試樣的質(zhì)量(g)；P為吡蟲啉(或咯菌腈、嘧菌酯)標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)。

2 結(jié)果分析

2.1 流動相的選擇

采用乙腈-磷酸水溶液(pH值=3)作為流動相，在1.0 mL/min的流速條件下，試驗(yàn)在不同比例流動相下各成分能否實(shí)現(xiàn)有效的分離。結(jié)果證明當(dāng)流動相中乙腈比例過高時，咯菌腈與嘧菌酯達(dá)不到有效的分離，在乙腈-磷酸水溶液(pH值=3)的體積比為55∶45時，各個組分能夠有效地分離，并且峰型對稱、保留時間適中，滿足試驗(yàn)的要求。

2.2 檢測波長的選擇

通過Agilent 1200的紫外光譜采集功能，得到其相應(yīng)的吸收波長與響應(yīng)值的紫外吸收光譜圖。在掃描的190～400 nm波長范圍內(nèi)，吡蟲啉的最大吸收出現(xiàn)在260 nm波長左右，咯菌腈和嘧菌酯最大吸收在200～220 nm波長范圍內(nèi)，因?yàn)闃悠分锌┚婧袜拙サ暮枯^低，所以在選擇檢測波長時主要考慮咯菌腈和嘧菌酯的吸收情況，選定在210 nm波長條件下進(jìn)行測試。

2.3 方法線性關(guān)系的測定

分別稱取吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)品0.144 4 g、咯菌腈標(biāo)準(zhǔn)品0.012 0 g、嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品0.021 6 g置于同一100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容后，用移液管分別準(zhǔn)確移取5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 mL于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容后進(jìn)行測定。測試結(jié)果被繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖3、圖4、圖5)，其中橫坐標(biāo)表示各成分的進(jìn)樣濃度，縱坐標(biāo)表示其特征峰的峰面積，各有效成分的線性回歸方程分別為：吡蟲啉y=8 959.4x- 45.463，相關(guān)系數(shù)為0.999 4；咯菌腈y=23 360x-0.461 9，相關(guān)系數(shù)為0.999 9；嘧菌酯y=22 959x-0.486 1，相關(guān)系數(shù)為0.999 9。

圖3 吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖4 咯菌腈標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖5 嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4 方法精密度測定

按1.3所述操作條件對同一樣品進(jìn)行平行試驗(yàn)，測定5次。測定結(jié)果見表1，吡蟲啉、咯菌腈、嘧菌酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.039、0.009、0.012，變異系數(shù)分別為0.62%、4.12%、1.38%。

表1 精密度的測定結(jié)果

2.5 方法準(zhǔn)確度測定

一定量的標(biāo)準(zhǔn)品被添加在樣品(含量已知)中后，在1.3所述條件下測試，測定結(jié)果如表2所示，測得吡蟲啉的回收率為99.84%～100.06%，平均回收率為99.96%；咯菌腈的回收率為98.99%～100.01%，平均回收率為99.67%；嘧菌酯的回收率為99.33%～100.04%，平均回收率為99.76%。

表2 回收率的試驗(yàn)測定結(jié)果

3 結(jié)論

通過試驗(yàn)表明，本方法能夠?qū)崿F(xiàn)7%吡蟲啉·咯菌腈·嘧菌酯懸浮種衣劑中的3種有效成分的高效分離和含量測試，并且具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，能夠滿足定量分析的要求。