陳埏芳， 馮淑芬， 施 穎， 鐘 綠， 李觀宏， 湯紹輝

（暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化科，廣東廣州510630）

肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是原發(fā)性肝癌中最常見的病理類型，是世界上第五大常見惡性腫瘤，也是腫瘤死亡的第三大原因［1］。雖然近年來HCC 的診療水平有所提高，但我國HCC 患者的5年生存率僅約12%［2］。復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致HCC患者死亡的兩大主因。因此，研究HCC 發(fā)生和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，對HCC的個(gè)體化精準(zhǔn)治療極其重要。

胰島素樣生長因子1 受體（insulin-like growth factor-1 receptor，IGF-1R）是一種廣泛表達(dá)于多種類型細(xì)胞表面的酪氨酸激酶跨膜蛋白，主要介導(dǎo)IGF-1和IGF-2 的生物學(xué)作用，參與機(jī)體物質(zhì)代謝調(diào)節(jié)、細(xì)胞增殖分化及胚胎發(fā)育等生物學(xué)過程［3-4］。近年研究表明，IGF-1R 在多種惡性腫瘤（包括HCC）中表達(dá)水平顯著增高，IGF-1R過表達(dá)促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長、侵襲與轉(zhuǎn)移，抑制IGF-1R 表達(dá)可能成為HCC 治療的新靶點(diǎn)［5-7］。但是，目前有關(guān)IGF-1R調(diào)控HCC生長與侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚未完全明確。

IGF-1R 致癌的分子機(jī)制涉及Janus 激酶（Janus kinase，JAK）/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白（signal transducers and activators of transcription，Stat）信號通路的異?；罨?-11］。Stat3 蛋白屬于 Stat 家族成員，研究顯示Stat3 的激活可以促進(jìn)HCC 發(fā)生和腫瘤血管形成，與HCC 的進(jìn)展和預(yù)后密切相關(guān)［12］。但是目前對IGF-1R-Stat3 通路的研究尚不夠深入，活化狀態(tài)的Stat3調(diào)節(jié)下游靶基因的中間環(huán)節(jié)并不明確［8-11］。

我們前期研究顯示，IGF-1R 通過正向調(diào)控中期因子（midkine）表達(dá)促進(jìn)HCC 生長與侵襲，而抑制midkine 表達(dá)則可以逆轉(zhuǎn)IGF-1R 對HCC 生長及侵襲的促進(jìn)作用［7］。但是，IGF-1R 調(diào)控 midkine 表達(dá)的機(jī)制目前國內(nèi)外尚缺乏系統(tǒng)深入研究。因此，我們對肝癌細(xì)胞中IGF-1R-Stat3信號通路與midkine表達(dá)調(diào)控的關(guān)系進(jìn)行了初步探討，以期為HCC 分子靶向治療提供參考資料。

材 料 和 方 法

1 材料

1.1 臨床標(biāo)本收集 32例HCC 組織標(biāo)本（男25例，女 7 例，平均年齡 52.6 歲）、32 例配對癌旁肝組織（matched adjacent nontumorous tissues，MANT）標(biāo)本（術(shù)中切除距離肝癌病灶≥2 cm）和13 例正常成人肝組織（normal adult liver tissues，NALT）標(biāo)本（男10例，女3例，11例為外傷性肝破裂患者，2例為肝血管瘤患者）于 2006 年 1 月至 2017 年12 月收集于暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院。所有患者的診斷均通過病理證實(shí)。組織標(biāo)本離體后立即放入液氮中速凍后轉(zhuǎn)入超低溫冰箱存放。本研究由暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 細(xì)胞株 肝癌細(xì)胞株（Huh7 和Hep3B）和正常肝細(xì)胞株（HL-7702）購于ATCC。穩(wěn)定敲減IGF-1R表達(dá)的Huh7 細(xì)胞株及midkine 表達(dá)載體已由本課題組前期構(gòu)建并保存［7］。

1.3 主要試劑 小量質(zhì)粒抽提試劑盒購于北京全式金生物公司；Lipofectamine?2000 轉(zhuǎn)染試劑購于Invitrogen；抗Stat3、磷酸化Stat3（phosphorylated Stat3，p-Stat3）和GAPDH 兔單克隆抗體及抗兔IgG（H+L）生物素化抗體購于Cell Signaling Technology；抗midkine 兔單克?。跡P1143Y］抗體購于Abcam；MTT 檢測試劑盒購于Abcam；Transwell 細(xì)胞培養(yǎng)板購于BD。

2 方法

2.1 RT-qPCR 實(shí)驗(yàn) 采用TRIzol 試劑盒制備各細(xì)胞株及肝組織標(biāo)本總RNA，驗(yàn)證總RNA 抽提完整后，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA 并進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR 分析。采用相對定量法（2-ΔΔCt）表示目的基因表達(dá)量。以18S rRNA 作為內(nèi)參照。引物由蘇州金唯智公司合成。IGF-1R 的上游引物序列為5'-GGTGTC-CAATAACTACATTG-3'，下游引物序列為5'-CAGCGGTTTGTGGTCCAGC-3'；Stat3 的上游引物序列為5'-CATCTTGAGCACTAAGCCT-3'，下游引物序列為5'-GAGATAGACCAGTGGAGACA-3'；midkine的上游引物序列為5'-CTGGGGTGCGTGTGATGGGG-3'，下游引物序列為5'-CTTTGGTCTTGGGGGTGCAG-3'；18S rRNA 的上游引物序列為5'-CCTGGATACCGCAGCTAGGA-3'，下游引物序列為5'-GCGGCGCAATACGAATGCCCC-3'。

2.2 Western blot 檢測 Stat3、p-Stat3 和 midkine 的蛋白水平 用RIPA 裂解液提取細(xì)胞總蛋白，4℃離心，收集上清，采用BCA法測定蛋白濃度，將待測樣品上樣后進(jìn)行電泳。電泳至PVDF膜后封閉，加入Ⅰ抗和Ⅱ抗。ECL 顯色試劑盒進(jìn)行顯色，用凝膠成像儀進(jìn)行拍照，以GAPDH為內(nèi)參照，分析蛋白表達(dá)水平。

2.3 篩選針對Stat3的siRNA（siStat3） 通過查詢GenBank 中人 Stat3 mRNA 序列（NM_139276.2），根據(jù) siRNA 設(shè)計(jì)原則，設(shè)計(jì) 3 對 siRNA（Stat3_001、Stat3_002 和Stat3_003）及1 對無任何靶基因的陰性對照siRNA（negative control siRNA，NC siRNA），并委托蘇州金唯智公司合成，序列見表1。培養(yǎng)Huh7細(xì)胞至匯合度為30%～50%，采用Lipofectamine ?2000轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染siRNA。實(shí)驗(yàn)分為4組，即陰性對照組（NC siRNA）和3 個(gè)實(shí)驗(yàn)組（Stat3_001、Stat3_002和Stat3_003），每組設(shè)置3 個(gè)siRNA 濃度梯度（25、50和 100 nmol/L）。轉(zhuǎn)染 24 h 后，按 TRIzol 試劑盒說明抽提Huh7 細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA 并進(jìn)行定量 PCR 擴(kuò)增，測定 Stat3 的 mRNA 表達(dá)量，引物序列同前。每個(gè)樣本同時(shí)擴(kuò)增3個(gè)復(fù)管，并連續(xù)進(jìn)行3次實(shí)驗(yàn)。采用2-ΔΔCt表示目的基因表達(dá)量。

表1 Stat3 siRNA候選序列Table 1.Candidate sequences of Stat3 siRNA

2.4 IGF-1R 和Stat3 過表達(dá)載體的構(gòu)建 提取Hun7細(xì)胞總RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。以反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA為模板，PCR 擴(kuò)增。PCR 條件為:94℃ 5 min；98℃30 s，58℃ 30 s，68℃ 20 s，30 個(gè)循環(huán)；68℃下延伸5 min；16℃保存。引物由蘇州金唯智公司合成。IGF-1R 的上游引物序列為5'-ccggaattcgccaccATGAAGTCTGGCTCCGGAGGAG-3'，下游引物序列為5'-ctagtctagaTCAGCAGGTCGAAGACTGGGG-3'；Stat3的上游引物序列為5'-GATCCGCTTCAGACCCGTCAACAAACTCGAGTTTGTTGACGGGTCTGAAGTTTTTTG-3'，下游引物序列為5'-AATTCAAAAAACTTCAGACCCGTCAACAAACTCGAGTTTGTTGACGGGTCTGAAGCG-3'。在上、下游分別引入EcoRI 與XbaI 的酶切位點(diǎn)及保護(hù)性堿基。用EcoRI 和XbaI 雙酶切質(zhì)粒載體pcDNA3.1和PCR擴(kuò)增得到的目的基因，分別收集目的片段后使用T4 連接酶進(jìn)行連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒，并進(jìn)行酶切鑒定和送至蘇州金唯智基因公司進(jìn)行測序鑒定。

2.5 MTT 法檢測細(xì)胞活力 實(shí)驗(yàn)分為5 組:空白對照（blank control，Bla）組（未轉(zhuǎn)染的Huh7細(xì)胞）、IGF-1R 組（瞬時(shí)轉(zhuǎn)染IGF-1R 過表達(dá)質(zhì)粒的Huh7 細(xì)胞）、siStat3+midkine 組（瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染 siStat3 及 midkine 過表達(dá)質(zhì)粒的Huh7細(xì)胞）、shIGF-1R 組（穩(wěn)定敲減IGF-1R表達(dá)的Huh7 細(xì)胞）和shIGF-1R+Stat3 組（穩(wěn)定敲減IGF-1R表達(dá)的Huh7 細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Stat3 過表達(dá)質(zhì)粒）。取上述5 組細(xì)胞，調(diào)整密度為1×108/L，接種至96 孔板，每孔加入 100 μL DMEM 培養(yǎng)液，于 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞，待貼壁后收集各時(shí)點(diǎn)（0、24、48和72 h）細(xì)胞，加入MTT，孵育4 h后，用酶標(biāo)儀在波長570 nm處讀取吸光度。

2.6 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移及侵襲能力 在細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)中，取上述5 組細(xì)胞，計(jì)數(shù)1×105個(gè)細(xì)胞，取100 μL 細(xì)胞懸液接種于Transwell 小室的上室，下室中加入600 μL 完全培養(yǎng)液，在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱孵育12～48 h。取出Transwell 小室，棄培養(yǎng)液，用棉簽擦去上室內(nèi)的細(xì)胞，4%多聚甲醛固定20 min，PBS 洗滌 1 次，用結(jié)晶紫染色 10 min，再用 PBS洗滌1 次，顯微鏡下觀察5 個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)，拍照統(tǒng)計(jì)結(jié)果。檢測細(xì)胞侵襲能力時(shí)，取Matrigel 加入Transwell 小室中，37℃孵育 2 h 使Matrigel 凝固，余下步驟同遷移實(shí)驗(yàn)。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 23.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用GraghPad Prism 7 軟件作圖。每次實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次，記錄平均值。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。組間均數(shù)比較采用單因素方差分析及LSD-t檢驗(yàn)，兩變量相關(guān)性評估采用Pearson 積矩相關(guān)分析。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 HCC 細(xì)胞株及組織中 IGF-1R、Stat3 和 midkine mRNA表達(dá)水平上調(diào)

RT-qPCR 結(jié)果顯示，Huh7 和 Hep3B 細(xì)胞中 IGF-1R、Stat3 和 midkine 的 mRNA 表達(dá)水平均顯著高于HL-7702 細(xì)胞（P＜0.01），見圖1A；HCC 組織中IGF-1R、Stat3 和 midkine 的 mRNA 表達(dá)水平均顯著高于MANT 及 NALT（P＜0.01），MANT 中 IGF-1R mRNA表達(dá)水平也顯著高于NALT（P＜0.05），見圖1B。線性相關(guān)分析結(jié)果進(jìn)一步顯示，HCC 組織中Stat3 和midkine mRNA 表達(dá)水平均與IGF-1R mRNA 表達(dá)水平呈正相關(guān)（r=0.716 和r=0.681，P＜0.01），midkine mRNA 表達(dá)水平與Stat3 mRNA 表達(dá)也呈正相關(guān)（r=0.657，P＜0.01），見圖1C。

Figure 1.The mRNA expression of IGF-1R，Stat3 and midkine was up-regulated in HCC cell lines and tissues.A:the mRNA expression of IGF-1R，Stat3 and midkine in HCC cell lines（Huh7 and Hep3B）and normal liver cell line（HL-7702）was detected by RT-qPCR（n=3）；B:the mRNA expression of IGF-1R，Stat3 and midkine in human HCC tissues（n=32），matched adjacent nontumorous tissues（MANT，n=32）and normal adult liver tissues（NALT，n=13）was detected by RT-qPCR；C:linear correlation analyses among IGF-1R，Stat3 and midkine mRNA expression levels in HCC tissues（n=32）.Mean±SD.**P＜0.01 vs HL-7702 group；△P＜0.05，△△P＜0.01 vs NALT group；##P＜0.01 vs MANT group.圖1 IGF-1R、Stat3和midkine在HCC細(xì)胞株和組織中的mRNA表達(dá)水平上調(diào)

2 siStat3的篩選結(jié)果

siStat3 轉(zhuǎn)染 Huh7 細(xì)胞后，RT-qPCR 檢測轉(zhuǎn)染效果，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染 Stat3_001、Stat3_002 及Stat3_003的Huh7 細(xì)胞中Stat3 mRNA 表達(dá)量均有不同程度的降低，抑制效率約為37%～80%，其中Stat3_003 濃度在100 nmol/L 時(shí)抑制效率最高，達(dá)80%，見表2。因此采用此siRNA用于后續(xù)研究。

3 IGF-1R 通過上調(diào)Huh7 細(xì)胞Stat3 表達(dá)并增加其磷酸化水平而促進(jìn)midkine表達(dá)

RT-qPCR 結(jié)果顯示，與空白對照組相比，瞬時(shí)上調(diào) IGF-1R 表達(dá)，Stat3 和 midkine 的 mRNA 表達(dá)水平顯著上調(diào)（P＜0.01），見圖2A；Western blot 結(jié)果顯示，瞬時(shí)上調(diào) IGF-1R 表達(dá)后 Stat3、p-Stat3 及 midkine的蛋白水平也顯著上調(diào)，見圖2B。

表2 針對Stat3的siRNA篩選結(jié)果Table 2.Results of siRNA screening for Stat3

穩(wěn)定敲減IGF-1R表達(dá)則可顯著降低Stat3 和midkine 的mRNA 表達(dá)水平（P＜0.01）及Stat3、p-Stat3和midkine的蛋白水平，見圖2A、B。

在穩(wěn)定敲減IGF-1R表達(dá)的Huh7細(xì)胞中，瞬時(shí)上調(diào)Stat3 表達(dá)逆轉(zhuǎn)了敲減IGF-1R表達(dá)所致的midkine mRNA及蛋白表達(dá)水平降低（P＜0.01），見圖2A、B。

在Huh7細(xì)胞中瞬時(shí)敲減Stat3表達(dá)，可下調(diào)midkine mRNA 及蛋白表達(dá)（P＜0.01），瞬時(shí)上調(diào)Stat3 表達(dá)則可上調(diào)midkine mRNA 及蛋白表達(dá)（P＜0.01），見圖2C、D。

4 IGF-1R 通過激活 Stat3、上調(diào) midkine 表達(dá)而增強(qiáng)Huh7細(xì)胞活力，促進(jìn)其遷移和侵襲

MTT 法及 Transwell 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在 Huh7 細(xì)胞中瞬時(shí)上調(diào)IGF-1R 表達(dá)可顯著增強(qiáng)其活力、遷移能力和侵襲能力（P＜0.01）；瞬時(shí)敲減Stat3表達(dá)并同時(shí)瞬時(shí)上調(diào)midkine 表達(dá)則其活力、遷移能力和侵襲能力無明顯變化（P＞0.05）；而穩(wěn)定敲減IGF-1R表達(dá)則顯著抑制Huh7 細(xì)胞活力、遷移能力和侵襲能力（P＜0.01）；在穩(wěn)定敲減IGF-1R表達(dá)的 Huh7 細(xì)胞中瞬時(shí)上調(diào)Stat3 表達(dá)可逆轉(zhuǎn)敲減IGF-1R表達(dá)所致的細(xì)胞活力、遷移能力和侵襲能力的抑制（P＜0.01），見圖3、4。

討 論

IGF-1R 是IGF 家族中的一個(gè)重要成員。大量研究表明，IGF-1R 在多種惡性腫瘤包括HCC 中的表達(dá)水平顯著上調(diào)，其致癌機(jī)制涉及多條信號通路活化，其中IGF-1R-Stat3 信號通路激活在HCC 發(fā)生中具有重要作用，但Stat3 信號的下游靶分子尚未完全明確［8-11］。

Stat3 是Stat 轉(zhuǎn)錄因子家族的一員，參與調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡、血管生成、免疫反應(yīng)、腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移等病理生理過程［8，10，13-14］，而且對于細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的建立和維持至關(guān)重要［8，13］。此外，midkine 是一種肝素結(jié)合生長因子［15］，在胚胎發(fā)育過程中呈現(xiàn)高水平表達(dá)，但在正常成人組織表達(dá)水平極低［16-17］。最近研究表明，midkine 參與人類多種腫瘤（包括HCC）的發(fā)生發(fā)展［18-21］。

在本研究中，我們檢測到IGF-1R、Stat3 和midkine 在 HCC 細(xì)胞株（Huh7 和 Hep3B）和 32 例人 HCC組織中的mRNA 表達(dá)水平顯著升高；線性相關(guān)分析顯示HCC 組織中Stat3 和midkine mRNA 的表達(dá)水平均與IGF-1R mRNA 表達(dá)水平呈正相關(guān)，midkine mRNA 表達(dá)水平也與Stat3 mRNA 表達(dá)水平呈正相關(guān)。這些結(jié)果表明，IGF-1R-Stat3 信號通路和midkine 表達(dá)在HCC 中被激活，且前者可能正向調(diào)控后者表達(dá)。與本研究結(jié)果相似，多項(xiàng)研究報(bào)道IGF-1R［5-7，22］、Stat3［23-24］及 midkine［25-26］在 HCC 中的表達(dá)水平顯著上調(diào)。

為進(jìn)一步明確IGF-1R-Stat3 信號通路與midkine表達(dá)之間的聯(lián)系，我們在Huh7 肝癌細(xì)胞中進(jìn)行了過表達(dá)或敲減IGF-1R和Stat3的體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，在 Huh 細(xì)胞中，IGF-1R 正向調(diào)控 Stat3 和 midkine 的 mRNA 表達(dá)水平及 Stat3、p-Stat3 和 midkine 的蛋白表達(dá)水平；在穩(wěn)定敲減IGF-1R表達(dá)的Huh7細(xì)胞中，瞬時(shí)上調(diào)Stat3 表達(dá)逆轉(zhuǎn)了敲減IGF-1R表達(dá)所致的midkine mRNA 及蛋白表達(dá)水平降低；在Huh7 細(xì)胞中瞬時(shí)上調(diào)或下調(diào)Stat3表達(dá)，則midkine 的mRNA和蛋白表達(dá)水平也出現(xiàn)了同向變化。上述結(jié)果表明，在 HCC 細(xì)胞中，IGF-1R 通過上調(diào) Stat3 表達(dá)并增加其磷酸化水平促進(jìn)midkine表達(dá)；結(jié)合前述HCC組織中IGF-1R、Stat3 和midkine 表達(dá)的線性相關(guān)分析結(jié)果，表明IGF-1R-Stat3 信號通路正向調(diào)控midkine表達(dá)。

為了探討IGF-1R-Stat3信號通路影響midkine 表達(dá)對HCC細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，我們在Huh7細(xì)胞中過表達(dá)或敲減IGF-1R和Stat3及上調(diào)midkine 表達(dá)后觀察細(xì)胞活力、遷移能力和侵襲能力的變化。結(jié)果顯示，在Huh7 細(xì)胞中瞬時(shí)上調(diào)IGF-1R 表達(dá)可顯著增強(qiáng)其活力、遷移能力和侵襲能力；瞬時(shí)敲減Stat3表達(dá)并同時(shí)瞬時(shí)上調(diào)midkine 表達(dá)則其活力、遷移能力和侵襲能力無明顯變化；而穩(wěn)定敲減IGF-1R表達(dá)則顯著抑制Huh-7 細(xì)胞活力、遷移能力和侵襲能力；在穩(wěn)定敲減IGF-1R表達(dá)的Huh7 細(xì)胞中，瞬時(shí)上調(diào)Stat3 表達(dá)可逆轉(zhuǎn)敲減IGF-1R表達(dá)所致的細(xì)胞活力、遷移能力和侵襲能力的抑制。

Figure 2.Effect of IGF-1R on the expression of Stat3 and midkine（A，B），and effect of Stat3 on midkine expression（C，D）in Huh7 cells.The mRNA expression of Stat3 and midkine was detected by RT-qPCR（A，C），and the protein levels of Stat3，p-Stat3 and midkine were detected by Western blot（B，D）.Bla:blank control；shIGF-1R:stable knockdown of IGF-1R；IGF-1R:transient over-expression of IGF-1R；Stat3:transient over-expression of Stat3；siStat3:transient knock-down of Stat3.Mean±SD. n=3.**P＜0.01 vs Bla group；##P＜0.01 vs shIGF-1R group.圖2 IGF-1R對Huh7細(xì)胞Stat3和midkine表達(dá)水平及Stat3對Huh7細(xì)胞midkine表達(dá)水平的影響

Figure 3.Effect of IGF-1R-Stat3 signaling pathway and midkine expression changes on Huh7 cell viability.Bla:blank control；IGF-1R:transient over-expression of IGF-1R；siStat3+midkine:transient knock-down of Stat3 and transient over-expression of midkine；shIGF-1R:stable knockdown of IGF-1R；shIGF-1R+Stat3:stable knockdown of IGF-1R and transient over-expression of Stat3.Mean±SD. n=3.**P＜0.01 vs Bla group；##P＜0.01 vs shIGF-1R group.圖3 IGF-1R-Stat3信號通路及midkine表達(dá)改變對Huh7細(xì)胞活力的影響

Figure 4.Effect of IGF-1R-Stat3 signaling pathway and midkine expression changes on Huh7 cell migration（A）and invasion（B）.Scale bar=50 μm.Bla:blank control；IGF-1R:transient over-expression of IGF-1R；siStat3+midkine:transient knockdown of Stat3 and transient over-expression of midkine；shIGF-1R:stable knockdown of IGF-1R；shIGF-1R+Stat3:stable knockdown of IGF-1R and transient over-expression of Stat3.Mean±SD. n=3.**P＜0.01 vs Bla group；#P＜0.05 vs shIGF-1R group.圖4 IGF-1R-Stat3通路及midkine表達(dá)改變對Huh7細(xì)胞遷移和侵襲的影響

綜上所述，本研究結(jié)果提示，IGF-1R-Stat3 信號通路通過激活midkine表達(dá)增強(qiáng)HCC細(xì)胞活力，促進(jìn)其遷移和侵襲，而抑制該通路激活則顯著降低HCC細(xì)胞的活力、遷移能力和侵襲能力。