殷玉婷 郭茜茜 陳 芳 洪 婷△

苜蓿素(Tricin)，又稱麥黃酮、小麥黃素，屬黃酮類化合物，廣泛存在于禾本科植物中，如竹子、大麥、稻米、小麥和玉米等，被認(rèn)為是一種健康無害的營養(yǎng)物質(zhì)。在臨床常用于治療哮喘的竹茹、竹根和淡竹葉等禾本類中草藥里含量也十分豐富?，F(xiàn)代藥理研究表明，苜蓿素具有廣泛的生物活性，如抗炎、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)等，尤其抗炎作用明顯[1-3]。本文對苜蓿素的理化性質(zhì)、提取方法和藥理作用進(jìn)行綜述，為深入研究提供參考。

1 苜蓿素化學(xué)結(jié)構(gòu)與物理化學(xué)性質(zhì)

苜蓿素化學(xué)名稱為(4′,5,7-三羥基-3′,5′-二甲氧基黃酮)，呈淡黃色針晶態(tài)[4]，屬于黃酮類化合物。其空間上結(jié)構(gòu)(圖1)，分子內(nèi)緊密堆砌，在5，7，4′位中存在3個酚羥基，可形成分子間氫鍵，晶格的排列和氫鍵的形成使得苜蓿素的分子間作用力增大，因此其熔點(diǎn)較高，脂溶性與水溶性較差[5]。

圖1 苜蓿素的空間結(jié)構(gòu)

2 苜蓿素的提取

2.1 提取方法的影響1986年，肖永慶、屠呦呦通過醇提、分離以及硅膠層析，在菊科植物南劉寄奴中首次得到了苜蓿素[6]。1990年Dornbos等[7]首先通過對苜蓿植物的葉子部位梯度洗脫，并經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀和氫核磁共振譜測定出其含有苜蓿素，并從苜蓿中所含的酚醛酸物質(zhì)中分離出苜蓿素和4-甲氧基苜蓿素。 醇提、分離以及硅膠層析是苜蓿素提取的一般方法。8.5 kg云南兔耳朵草中，用乙醇提取并氯仿萃取，經(jīng)過硅膠柱色譜取420 mg苜蓿素[8]，但其提取率不高。大孔樹脂分離、Sephadex LH-20 柱純化、RP-C18柱層析、高壓制備色譜及重結(jié)晶等方法使用[9-11]，提高了苜蓿素的提取率。有研究發(fā)現(xiàn)，用在線HPLC-DPPH生物活性指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)的二維色譜分離方法，在800 mg的甘肅鳶尾花粗制樣品中制備出的苜蓿素其純度可>98%[12]。用化學(xué)合成的方法也可以制取，通過苯甲酸甲酯與苯乙酮縮合反應(yīng)得到的苜蓿素，其總收率為68%，純度為99%[13]。

2.2 提取工藝及植物生長時期的影響不同工藝的條件對苜蓿素提取率有影響。有研究人員對苜蓿素的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)從小麥籽粒中提取苜蓿素，最佳提取工藝為用濃度70%乙醇、料液比為1∶20、醇提時間1.5 h、超聲處理時間30 min[14]。植物不同生長時期對苜蓿素的提取也有影響, 如紫花苜蓿不同生長期苜蓿素的含量不同, 8月份量最高[15]。

3 苜蓿素的藥理研究

3.1 抗炎作用苜蓿素主要是通過抑制環(huán)氧酶(COX)、腫瘤壞死因子(TNF)、前列腺素(PG)、白細(xì)胞介素(IL)、一氧化氮(NO)等炎癥介質(zhì)，發(fā)揮抗炎作用。苜蓿素能夠阻斷TLR4/NF-κB/STAT信號聯(lián)級的作用從而產(chǎn)生抗炎作用[16]。苜蓿素通過干擾TLR4激活而激活炎癥級聯(lián)反應(yīng)，優(yōu)選通過阻斷LPS誘導(dǎo)的hPBMC中的TLR4、MYD88和TRIF蛋白的活化。苜蓿素也通過阻斷TLR4信號介導(dǎo)的細(xì)胞溶質(zhì)磷脂酶A2(cPLA2)的活化來抑制LPS的促炎作用。其也可以減少NF-κB表達(dá)和IRF3的磷酸化。苜蓿素可通過下調(diào)上游磷酸化酶如JAK1和JAK2顯著抑制STAT1和STAT3的活化，從而阻止STAT蛋白的活化。在PI3K活化條件下，通過調(diào)節(jié)NF-κB和MAPK信號通路抑制促炎介質(zhì)如TNF-α，cox-2，IFNγ，MCP1的活化從而抑制炎癥。苜蓿素還可抑制細(xì)胞黏附因子如ICAM-1，VCAM-1，E-選擇素，減少內(nèi)皮細(xì)胞損傷，保護(hù)內(nèi)皮功能紊亂炎癥反應(yīng)[17]。有研究表明，苜蓿素可以抑制細(xì)胞中LPS誘導(dǎo)的NO產(chǎn)生，通過NF-κB下調(diào)iNOS和COX-2的表達(dá)[18]。其還可以抑制LPS誘導(dǎo)的前列腺素E2的產(chǎn)生，降低了LPS誘導(dǎo)的誘導(dǎo)型NO合酶和環(huán)氧合酶蛋白水平的增加[19]。

3.3 抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)表明，苜蓿素有抗腸癌、乳腺癌、肝癌、前列腺癌、肺癌、白血病等惡性腫瘤作用。有報道顯示，苜蓿素對結(jié)腸癌SW480細(xì)胞、HT29細(xì)胞菌落的形成有抑制作用[20]，作用機(jī)制可能與阻滯細(xì)胞周期及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。苜蓿素可顯著抑制人直腸癌 SW1116 細(xì)胞的增殖，使細(xì)胞阻滯于G0/G1期，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與下調(diào)Bcl-2和Bax蛋白有關(guān)[21]。苜蓿素也可抑制人 MDA-MB-468乳腺癌細(xì)胞，阻滯細(xì)胞周期于G2/M，但未誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡[22]。通過抑制COX酶和PGE2，苜蓿素還可降低ApcMin鼠腺瘤的發(fā)生[23]。苜蓿素可抑制血小板生長因子PDGF受體的磷酸化，減少人肝癌HSC細(xì)胞的增殖[24]。另外，苜蓿素通過誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞PC-03、肺癌細(xì)胞NCI460和早幼粒白血病細(xì)胞HL-60的凋亡，治療相關(guān)惡性腫瘤[25，26]；苜蓿素可以上調(diào)焦點(diǎn)黏附激酶靶向MicroRNA-7，從而抑制C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲[27]。

3.4 抗病毒作用有研究發(fā)現(xiàn)，在人巨細(xì)胞病毒(HCMV)感染后，用苜蓿素治療顯著抑制了人胚胎肺成纖維細(xì)胞(HEL)細(xì)胞中的感染性病毒粒子產(chǎn)生和HCMV復(fù)制。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，HCMV感染可以增加CC-基序配體2(CCL2 /MCP-1)和CCR2(一種CCL2特異性受體)的表達(dá)，而苜蓿素引起HCMV感染誘導(dǎo)的CCL2和CCR2 mRNA表達(dá)和CCL2蛋白表達(dá)的上調(diào)的劑量依賴性減弱，所以苜蓿素可能是通過抑制CCL2表達(dá)來發(fā)揮抗HCMV活性[28]。同時有相關(guān)研究報顯示苜蓿素抑制HCMV作用的靶蛋白為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶9(CDK9)[29]。另有報道研究苜蓿素能夠比較好的抗人類免疫缺陷病毒HIV[26]。

3.5 免疫作用Dornbos[7]從提取出來的苜蓿素中發(fā)現(xiàn)其有免疫功能，能夠增強(qiáng)免疫力，提高機(jī)體抗氧化能力。在實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)苜蓿素具有一定的免疫作用，并通過體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)苜蓿素可抑制正常小鼠T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的增殖，能說明苜蓿素抗免疫作用的原因[30]。而苜蓿素中的提取物(1′,6′-di-O-β-d-葡萄糖-丙烯酸)，在哺乳動物細(xì)胞中表現(xiàn)出選擇性(SI>7)，并引發(fā)對宿主細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用[31]。

3.6 其他苜蓿素可通過阻斷血小板源生長因子(PDGF)β受體的酪氨酸磷酸化，下調(diào)細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK1/2)和蛋白激酶B(Akt)，抑制人體肝形狀細(xì)胞(HSC)增殖，從而對肝纖維化起到保護(hù)作用[24]。有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，苜蓿素能顯著激活胰島素依賴性細(xì)胞信號傳導(dǎo)途徑，包括激活胰島素受體底物-1(IRS1)，磷酸肌醇3-激酶(PI3K)，蛋白激酶B(AKT)和160kDa的AKT底物(AS160)，說明苜蓿素具有很大的潛力用作血糖控制的功能劑[32]。

4 展望

苜蓿素存在于許多植物當(dāng)中，易取得其成分。雖然苜蓿素藥理作用一直是學(xué)者的研究目標(biāo)，并且研究越來越成熟。但是，對于苜蓿素的提取分離純化研究比較少。所以，本文主要對苜蓿素的提取分離進(jìn)行總結(jié)，并且主要對其抗炎作用進(jìn)行詳細(xì)分析。以后將對抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用的通路與相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行更深入的研究。